ELISA试剂预防非特异性染色
非特异染色的原因包括一抗和二抗与血清蛋白的相互作用,抗体与组织之间的离子相互作用,以及与能够影响IHC检测系统的内源分子的相互作用。这些问题会产生高背景,以及无法在适当的细胞位置观察目的抗原。这种类型的染色问题可通过用封闭剂来封闭非特异相互作用来解决。在将样本与一抗共同孵育之前,可开展这些步骤:预防非特异疏水相互作用尽管疏水相互作用在抗原表位-抗体的结合中起了重要作用,但这些力同样能促进非特异结合。由于一些氨基酸的中性侧链,大部分蛋白有着某种程度的疏水性。将组织与热灭活的正常血清或牛血清白蛋白(BSA)共同孵育,是降低非特异疏水结合的常用步骤。正常血清类型的选择对预防与一抗或二抗的相互作用,或预防与待染色组织/细胞的相互作用很重要。例如,在使用山羊来源的一抗时,不建议用山羊血清作为封闭剂。而是推荐与二抗的宿主动物相同的血清或来自不相关物种的血清。BSA和脱脂奶粉常用作封闭剂。这些试剂通常包含在一抗和二抗的稀释液中。非离子去污剂如......阅读全文
ELISA试剂预防非特异性染色
非特异染色的原因包括一抗和二抗与血清蛋白的相互作用,抗体与组织之间的离子相互作用,以及与能够影响IHC检测系统的内源分子的相互作用。这些问题会产生高背景,以及无法在适当的细胞位置观察目的抗原。这种类型的染色问题可通过用封闭剂来封闭非特异相互作用来解决。在将样本与一抗共同孵育之前,可开展这些步骤:预防
非特异性酯酶染色
【临床意义】 血细胞中所含酯酶各不一致,但皆系作用于短链脂肪酸的酯酶,统称非特异性酯酶。其显示方法是采用偶氮偶联法。由于提供水解的基质不同,血细胞中常见酯酶有以下几种: α-乙酸萘酚酯酶(α-naphthol acetate esterace,α-NAE) 乙酸AS-D萘酚酯酶(naphtho
影响ELISA试剂盒中非特异性显色缘由剖析
影响ELISA试剂盒中非特异性显色的缘由许多,如试剂盒特异性、查验标本中含酶符号物的干扰物,操作进程中的疑问。这篇文章就这一缘由作一简明剖析,以便可以经过以上方法把非特异显色降至zui低极限,然后跋涉检测的特异性,并得到更准确、可靠的试验作用。查验标本中富含酶符号物的干扰物包被物的纯度。 在酶联免疫
ELISA中分析非特异性显色
酶联免疫吸附试验(ELISA)自1971年自问世以来,以其敏感性高,特异性强,操作简便、安全,而广泛应用于临床诊断,开创了免疫学诊断的新纪元。但同其它免疫诊断方法一样酶免试剂在它的研究、生产及使用中常常会碰到非特异性问题。1、试剂盒特异性因素1、1 固相载体的选择。ELISA中常用的固相载体有微
非特异性酯酶染色实验
实验方法原理 NAE将α-乙酸萘酚水解,产生α-萘酚,再与重氮盐偶联,生成不溶性的有色沉淀位于胞质中。试剂、试剂盒 磷酸盐缓冲液α-乙酸萘酚加重氮盐甲基绿水港派实验步骤 一、 实验试剂:1. 作用液:l/20mol/L 磷酸盐缓冲液(PH7.4)40mg加10g/Lα-乙酸萘酚(以50%丙酮做溶剂
非特异性酯酶染色实验
实验方法原理NAE将α-乙酸萘酚水解,产生α-萘酚,再与重氮盐偶联,生成不溶性的有色沉淀位于胞质中。试剂、试剂盒磷酸盐缓冲液α-乙酸萘酚加重氮盐甲基绿水港派实验步骤一、 实验试剂:1. 作用液:l/20mol/L 磷酸盐缓冲液(PH7.4)40mg加10g/Lα-乙酸萘酚(以50%丙酮做溶剂)0.
ELISA中非特异性显色原因分析
【摘要】:影响ELISA中非特异性显色的原因很多,如试剂盒特异性、检验标本中含酶标记物的干扰物,操作过程中的问题。本文就这一原因作一简要分析,以便可以通过以上措施把非特异显色降至最低限度,从而提高检测的特异性,并得到更准确、可靠的实验结果。 【关键词】 ELISA 非特异性
最小化非特异性染色方法
Ⅰ、将经荧光标记的抗体进行稀释。如果浓度过高,背景会因为的非特异性的相互作用的增加而增加。Ⅱ、在使用第一抗体之前,将样品与过量的蛋白一起培育,如小牛血清蛋白(BSA),脱脂干奶酪,或来自于同一寄主的正常血清来作为标记的第二抗体。这个步骤通过阻断第一抗体和细胞表面或胞内结构的非特异性的交互作用来降低背
预防非特异性尿道炎的简介
1.不滥用抗生素 抗生素可能抑制部分有益菌群,有害细菌就会乘机大量繁殖。因此,使用抗生素要慎重。 2.单独清洗内裤 有害细菌可以在皮肤表面、胃肠道、指甲内等地方大量繁殖。因此,内衣裤一定要单独洗,最好用专用的内衣裤除菌液浸泡几分钟。 3.女性护理液适合日常清洁 频繁使用药字号洗液、消毒
分析影响ELISA中非特异性显色的原因
影响ELISA中非特异性显色的原因很多,如试剂盒特异性、检验标本中含酶标记物的干扰物,操作过程中的问题。本文就这一原因作一简要分析,以便可以通过以上措施把非特异显色降至最低限度,从而提高检测的特异性,并得到更准确、可靠的实验结果。1、试剂盒特异性因素1、1 固相载体的选择。ELISA中常用的固相
免疫组化非特异性染色消除方法
一、非特异性染色的主要因素 组织的非特异性染色的机理很复杂,其产生的原因主要可分为以下几点: (1)一部分荧光素未与蛋白质结合,形成了聚合物和衍化物,而不能被透析除去。 (2)抗体以外的血清蛋白与荧光素结合形成荧光素脲蛋白,可与组织成分结合。 (3)除去检查的抗原以外,组织中还可能存在类属抗原(如F
免疫荧光非特异性染色的消除方法
一、非特异性染色的主要因素 组织的非特异性染色的机理很复杂,其产生的原因主要可分为以下几点: (1)一部分荧光素未与蛋白质结合,形成了聚合物和衍化物,而不能被透析除去。 (2)抗体以外的血清蛋白与荧光素结合形成荧光素脲蛋白,可与组织成分结合。 (3)除去检查的抗原以外,组织中还可能存在类属抗
非特异性染色产生原因及其解决方案
⑴游离荧光素残留在二抗中。一部分荧光素未与蛋白质结合,形成了聚合物和衍化物,而不能被透析除去。二抗配置时用透析法或层析法分离荧光素标记的二抗和游离的二抗。购买高质量、高纯度的荧光素二抗。⑵抗体以外的血清蛋白与荧光素结合形成荧光素脲蛋白,可与组织成分结合。⑶组织抗原封闭不全。除去检查的抗原以外,组织中
免疫组化非特异性染色的消除方法
一、非特异性染色的主要因素 组织的非特异性染色的机理很复杂,其产生的原因主要可分为以下几点: (1)一部分荧光素未与蛋白质结合,形成了聚合物和衍化物,而不能被透析除去 。 (2)抗体以外的血清蛋白与荧光素结合形成荧光素脲蛋白,可与组织成分结合。 (3)除去检查的抗原以外,组织中还可能存在类属抗原(如
免疫荧光非特异性染色的消除方法(二)
(二)透析法荧光素如FITC 分子可以通过半透膜,而蛋白质大分子不能透过,可将未与蛋白结合的荧光素透析除去。(1)将标记完毕的荧光蛋白液装入一透析袋或玻璃纸袋内,液面稍留空隙,紧扎。(2)浸入0.02mol/L PH 7.1~7.4的PBS中(悬于大于标记物体积约50~100倍的PBS内),在4℃中
产生组织切片非特异性染色的原因有哪些?
1、抗体孵育时间过长、抗体浓度高易增加背景着色。这可通过缩短一抗/二抗孵育时间、稀释抗体来控制。这是最重要的一条。 2、一抗用多克隆抗体易出现非特异性着色,建议试用单克隆抗体看看。 3、内源性过氧化物酶和生物素在肝脏、肾脏等组织含量很高(含血细胞多的组织),需要通过延长灭活时间和增加灭活剂浓
产生组织切片非特异性染色的原因有哪些?
1、抗体孵育时间过长、抗体浓度高易增加背景着色。这可通过缩短一抗/二抗孵育时间、稀释抗体来控制。这是最重要的一条。2、一抗用多克隆抗体易出现非特异性着色,建议试用单克隆抗体看看。3、内源性过氧化物酶和生物素在肝脏、肾脏等组织含量很高(含血细胞多的组织),需要通过延长灭活时间和增加灭活剂浓度来降低背景
免疫组化非特异性染色及控制方法
一、非特异性染色的识别常出现在组织边缘、胶原纤维及血浆渗出处,坏死组织及固定不良的组织中心处。表现为弥漫性,均匀性的背景染色。也可以是随机分布的阳性反应产物点、团或块状。二、非特异性染色的原因1. Ig与Fc受体结合多见于冰冻切片(特别是淋巴造血组织,淋巴细胞,单核细胞,组织细胞表面多),主要是和二
如何最大限度地降低组织非特异性染色?
(1)缩短一抗/二抗孵育时间、稀释抗体来控制。这是最重要的一条。(2)一抗用多克隆抗体易出现非特异性着色,建议试用单克隆抗体看看。(3)内源性过氧化物酶和生物素在肝脏、肾脏等组织含量很高(含血细胞多的组织),需要通过延长灭活时间和增加灭活剂浓度来降低背景染色;(4)非特异性组分与抗体结合,这需要通过
免疫荧光非特异性染色的消除方法(一)
一、非特异性染色的主要因素组织的非特异性染色的机理很复杂,其产生的原因主要可分为以下几点:(1)一部分荧光素未与蛋白质结合,形成了聚合物和衍化物,而不能被透析除去。(2)抗体以外的血清蛋白与荧光素结合形成荧光素脲蛋白,可与组织成分结合。(3)除去检查的抗原以外,组织中还可能存在类属抗原(如Forss
怎样预防非特异性溃疡性结肠炎?
该病的特点是容易反复发作并迁延难愈,所以给患者带来极大的经济及心理压力。许多患者会感觉戴了一顶重重的帽子,整天压地自己喘不过气来。 因此一旦患病,调理好心理状态非常重要。正确对待疾病,树立起打长久战的信心,保持心情愉悦,让自己充满正能量,身体的正气旺盛才能战胜疾病。 注意劳逸结合,不可太过劳
免疫组化非特异性背景染色及其控制方法
一、非特异性染色的识别常出现在组织边缘、胶原纤维及血浆渗出处,坏死组织及固定不良的组织中心处。表现为弥漫性,均匀性的背景染色。也可以是随机分布的阳性反应产物点、团或块状。二、非特异性染色的原因1. Ig与Fc受体结合多见于冰冻切片(特别是淋巴造血组织,淋巴细胞,单核细胞,组织细胞表面多),主要是和二
免疫荧光非特异性染色的产生因素和消除方法
1、产生非特异性染色的主要因素(1)一部分荧光素未与蛋白质结合,形成了聚合物和衍化物,而不能被透析除去。(2)抗体以外的血清蛋白与荧光素结合形成荧光素脲蛋白,可与组织成分结合。(3)除去检查的抗原以外,组织中还可能存在类属抗原(如Forssman氏抗原),可与组织中特异性抗原以外之之相应抗体结合。(
预防慢性非特异性溃疡性结肠炎的简介
1、注意劳逸结合,不可太过劳累;暴发型、急性发作和严重慢性型患者,应卧床休息。 2、注意衣着,保持冷暖相适;适当进行体育锻炼以增强体质。 3、一般应进食柔软、易消化、富有营养和足够热量的食物。宜少量多餐,补充多种维生素。勿食生、冷、油腻及多纤维素的食物。 4、注意食品卫生,避免肠道感染诱发
氯化乙酸ASD萘本分酶与非特异性酯双重染色
【临床意义】 双重染色优于单项染色。在双重染色中首推AS-D-CE+NSE价值最大,能在同一涂片中精确在鉴定单核细胞和粒细胞。粒—单核细胞白血病(M4)中,可在同一涂片中有二群异常细胞,分别为AS-D-CE或NSE阳性,因此对急性粒—单核细胞白血病(M4)的细胞学鉴定和诊断具有一定价值。
免疫组化:非特异性染色的八大原因
免疫组化,免疫组织化学技术(immunohistochemistry),是一项利用抗原抗体反应,通过使标记抗体的显色剂显色来确定组织细胞内抗原,对蛋白定位,定性的实验技术。非特异性染色的八大原因然而,结果却未必都是那么如意的,常常出现下面这种状况,好好的一张片子染得脏脏的,这就是最常见的非特异性染色
ELISA试剂盒提高检测的特异性
ELISA试剂盒提高检测的特异性每种试剂都有其反应模式,其中温度和温育时间控制是重要因素。因孵育温度高,反应时间长,会造成整板本底高,阳性率高。温育一般用湿盒或水浴,ELISA试剂盒反应板不宜叠放,以保证各板温度都能迅速平衡,为避免蒸发,板上应加盖。ELISA试剂盒作为记录测定结果的仪器,酶标仪的性
非特异性免疫的特点
抗病毒和抗细菌的非特异性免疫有许多相同之处,现将其特点给予补充。 巨噬细胞对阻止病毒感染和促进感染的恢复具有重要作用。血流中的单核细胞也能吞噬和清除病毒,中性粒细胞只能吞噬病毒,不能将其消灭,如果被吞噬的病毒不能消灭则可将病毒带到全身,引起播散。正常人血清中含有能抑制病毒感染的物质,称为病毒抑制物。
非特异性免疫的特点
①作用范围广。机体对入侵抗原物质的清除没有特异的选择性。 ②反应快。抗原物质一旦接触机体,立即遭到机体的排斥和清除。 ③有相对的稳定性。既不受入侵抗原物质的影响,也不因入侵抗原物质的强弱或次数而有所增减。但是,当机体受到共同抗原或佐剂的作用时,也可增强免疫的能力。 ④有遗传性。生物体出生后
非特异性免疫的功能
发挥保护功能的几道屏障 首先是外围屏障。皮肤粘膜是机体第一道防线,包括:皮肤粘膜的机械阻挡作用和附属物(如纤毛)的清除作用;皮肤粘膜分泌物(如汗腺分泌的乳酸、胃粘膜分泌的胃酸等)的杀菌作用;体表和与外界相通的腔道中寄居的正常微生物丛对入侵微生物的拮抗作用等。其次是内部屏障。抗原物质一旦突破第一道