如何最大限度地降低组织非特异性染色?

(1)缩短一抗/二抗孵育时间、稀释抗体来控制。这是最重要的一条。(2)一抗用多克隆抗体易出现非特异性着色,建议试用单克隆抗体看看。(3)内源性过氧化物酶和生物素在肝脏、肾脏等组织含量很高(含血细胞多的组织),需要通过延长灭活时间和增加灭活剂浓度来降低背景染色;(4)非特异性组分与抗体结合,这需要通过延长二抗来源的动物免疫血清封闭时间和适当增加浓度来加强封闭效果;(5)缩短DAB孵育时间或降低DAB浓度/过氧化氢浓度等;(6)适当增加PBS冲洗次数和浸洗时间,在一抗、二抗或SP孵育之后的浸洗尤为重要;(7)防止标本染色过程中出现干片,这容易增强非特异性着色。......阅读全文

产生组织切片非特异性染色的原因有哪些?

  1、抗体孵育时间过长、抗体浓度高易增加背景着色。这可通过缩短一抗/二抗孵育时间、稀释抗体来控制。这是最重要的一条。  2、一抗用多克隆抗体易出现非特异性着色,建议试用单克隆抗体看看。  3、内源性过氧化物酶和生物素在肝脏、肾脏等组织含量很高(含血细胞多的组织),需要通过延长灭活时间和增加灭活剂浓

产生组织切片非特异性染色的原因有哪些?

1、抗体孵育时间过长、抗体浓度高易增加背景着色。这可通过缩短一抗/二抗孵育时间、稀释抗体来控制。这是最重要的一条。2、一抗用多克隆抗体易出现非特异性着色,建议试用单克隆抗体看看。3、内源性过氧化物酶和生物素在肝脏、肾脏等组织含量很高(含血细胞多的组织),需要通过延长灭活时间和增加灭活剂浓度来降低背景

如何最大限度地降低组织非特异性染色?

(1)缩短一抗/二抗孵育时间、稀释抗体来控制。这是最重要的一条。(2)一抗用多克隆抗体易出现非特异性着色,建议试用单克隆抗体看看。(3)内源性过氧化物酶和生物素在肝脏、肾脏等组织含量很高(含血细胞多的组织),需要通过延长灭活时间和增加灭活剂浓度来降低背景染色;(4)非特异性组分与抗体结合,这需要通过

非特异性酯酶染色

【临床意义】  血细胞中所含酯酶各不一致,但皆系作用于短链脂肪酸的酯酶,统称非特异性酯酶。其显示方法是采用偶氮偶联法。由于提供水解的基质不同,血细胞中常见酯酶有以下几种:  α-乙酸萘酚酯酶(α-naphthol acetate esterace,α-NAE)  乙酸AS-D萘酚酯酶(naphtho

ELISA试剂预防非特异性染色

非特异染色的原因包括一抗和二抗与血清蛋白的相互作用,抗体与组织之间的离子相互作用,以及与能够影响IHC检测系统的内源分子的相互作用。这些问题会产生高背景,以及无法在适当的细胞位置观察目的抗原。这种类型的染色问题可通过用封闭剂来封闭非特异相互作用来解决。在将样本与一抗共同孵育之前,可开展这些步骤:预防

非特异性酯酶染色实验

实验方法原理NAE将α-乙酸萘酚水解,产生α-萘酚,再与重氮盐偶联,生成不溶性的有色沉淀位于胞质中。试剂、试剂盒磷酸盐缓冲液α-乙酸萘酚加重氮盐甲基绿水港派实验步骤一、 实验试剂:1. 作用液:l/20mol/L  磷酸盐缓冲液(PH7.4)40mg加10g/Lα-乙酸萘酚(以50%丙酮做溶剂)0.

非特异性酯酶染色实验

实验方法原理 NAE将α-乙酸萘酚水解,产生α-萘酚,再与重氮盐偶联,生成不溶性的有色沉淀位于胞质中。试剂、试剂盒 磷酸盐缓冲液α-乙酸萘酚加重氮盐甲基绿水港派实验步骤 一、 实验试剂:1. 作用液:l/20mol/L  磷酸盐缓冲液(PH7.4)40mg加10g/Lα-乙酸萘酚(以50%丙酮做溶剂

最小化非特异性染色方法

Ⅰ、将经荧光标记的抗体进行稀释。如果浓度过高,背景会因为的非特异性的相互作用的增加而增加。Ⅱ、在使用第一抗体之前,将样品与过量的蛋白一起培育,如小牛血清蛋白(BSA),脱脂干奶酪,或来自于同一寄主的正常血清来作为标记的第二抗体。这个步骤通过阻断第一抗体和细胞表面或胞内结构的非特异性的交互作用来降低背

免疫荧光非特异性染色的消除方法

一、非特异性染色的主要因素  组织的非特异性染色的机理很复杂,其产生的原因主要可分为以下几点:  (1)一部分荧光素未与蛋白质结合,形成了聚合物和衍化物,而不能被透析除去。  (2)抗体以外的血清蛋白与荧光素结合形成荧光素脲蛋白,可与组织成分结合。  (3)除去检查的抗原以外,组织中还可能存在类属抗

免疫组化非特异性染色消除方法

一、非特异性染色的主要因素 组织的非特异性染色的机理很复杂,其产生的原因主要可分为以下几点: (1)一部分荧光素未与蛋白质结合,形成了聚合物和衍化物,而不能被透析除去。 (2)抗体以外的血清蛋白与荧光素结合形成荧光素脲蛋白,可与组织成分结合。 (3)除去检查的抗原以外,组织中还可能存在类属抗原(如F

非特异性染色产生原因及其解决方案

⑴游离荧光素残留在二抗中。一部分荧光素未与蛋白质结合,形成了聚合物和衍化物,而不能被透析除去。二抗配置时用透析法或层析法分离荧光素标记的二抗和游离的二抗。购买高质量、高纯度的荧光素二抗。⑵抗体以外的血清蛋白与荧光素结合形成荧光素脲蛋白,可与组织成分结合。⑶组织抗原封闭不全。除去检查的抗原以外,组织中

免疫组化非特异性染色的消除方法

一、非特异性染色的主要因素 组织的非特异性染色的机理很复杂,其产生的原因主要可分为以下几点: (1)一部分荧光素未与蛋白质结合,形成了聚合物和衍化物,而不能被透析除去 。 (2)抗体以外的血清蛋白与荧光素结合形成荧光素脲蛋白,可与组织成分结合。 (3)除去检查的抗原以外,组织中还可能存在类属抗原(如

免疫荧光非特异性染色的消除方法(二)

(二)透析法荧光素如FITC 分子可以通过半透膜,而蛋白质大分子不能透过,可将未与蛋白结合的荧光素透析除去。(1)将标记完毕的荧光蛋白液装入一透析袋或玻璃纸袋内,液面稍留空隙,紧扎。(2)浸入0.02mol/L PH 7.1~7.4的PBS中(悬于大于标记物体积约50~100倍的PBS内),在4℃中

免疫组化非特异性染色及控制方法

一、非特异性染色的识别常出现在组织边缘、胶原纤维及血浆渗出处,坏死组织及固定不良的组织中心处。表现为弥漫性,均匀性的背景染色。也可以是随机分布的阳性反应产物点、团或块状。二、非特异性染色的原因1. Ig与Fc受体结合多见于冰冻切片(特别是淋巴造血组织,淋巴细胞,单核细胞,组织细胞表面多),主要是和二

免疫荧光非特异性染色的消除方法(一)

一、非特异性染色的主要因素组织的非特异性染色的机理很复杂,其产生的原因主要可分为以下几点:(1)一部分荧光素未与蛋白质结合,形成了聚合物和衍化物,而不能被透析除去。(2)抗体以外的血清蛋白与荧光素结合形成荧光素脲蛋白,可与组织成分结合。(3)除去检查的抗原以外,组织中还可能存在类属抗原(如Forss

免疫组化非特异性背景染色及其控制方法

一、非特异性染色的识别常出现在组织边缘、胶原纤维及血浆渗出处,坏死组织及固定不良的组织中心处。表现为弥漫性,均匀性的背景染色。也可以是随机分布的阳性反应产物点、团或块状。二、非特异性染色的原因1. Ig与Fc受体结合多见于冰冻切片(特别是淋巴造血组织,淋巴细胞,单核细胞,组织细胞表面多),主要是和二

免疫荧光非特异性染色的产生因素和消除方法

1、产生非特异性染色的主要因素(1)一部分荧光素未与蛋白质结合,形成了聚合物和衍化物,而不能被透析除去。(2)抗体以外的血清蛋白与荧光素结合形成荧光素脲蛋白,可与组织成分结合。(3)除去检查的抗原以外,组织中还可能存在类属抗原(如Forssman氏抗原),可与组织中特异性抗原以外之之相应抗体结合。(

氯化乙酸ASD萘本分酶与非特异性酯双重染色

【临床意义】  双重染色优于单项染色。在双重染色中首推AS-D-CE+NSE价值最大,能在同一涂片中精确在鉴定单核细胞和粒细胞。粒—单核细胞白血病(M4)中,可在同一涂片中有二群异常细胞,分别为AS-D-CE或NSE阳性,因此对急性粒—单核细胞白血病(M4)的细胞学鉴定和诊断具有一定价值。

免疫组化:非特异性染色的八大原因

免疫组化,免疫组织化学技术(immunohistochemistry),是一项利用抗原抗体反应,通过使标记抗体的显色剂显色来确定组织细胞内抗原,对蛋白定位,定性的实验技术。非特异性染色的八大原因然而,结果却未必都是那么如意的,常常出现下面这种状况,好好的一张片子染得脏脏的,这就是最常见的非特异性染色

非特异性抑制的概念

中文名称非特异性抑制英文名称non-specific inhibition定  义特指非特异性地对酶的抑制作用。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),酶(二级学科)

非特异性免疫的功能

  发挥保护功能的几道屏障 首先是外围屏障。皮肤粘膜是机体第一道防线,包括:皮肤粘膜的机械阻挡作用和附属物(如纤毛)的清除作用;皮肤粘膜分泌物(如汗腺分泌的乳酸、胃粘膜分泌的胃酸等)的杀菌作用;体表和与外界相通的腔道中寄居的正常微生物丛对入侵微生物的拮抗作用等。其次是内部屏障。抗原物质一旦突破第一道

非特异性免疫的分类

  固有免疫(非特异性免疫)系统分类  固有免疫(非特异性免疫)系统包括:组织屏障(皮肤和黏膜系统、血脑屏障、胎盘屏障等);固有免疫细胞(吞噬细胞、杀伤细胞、树突状细胞等);固有免疫分子(补体、细胞因子、酶类物质等)。

非特异性免疫的分类

固有免疫(非特异性免疫)系统包括:组织屏障(皮肤和黏膜系统、血脑屏障、胎盘屏障等);固有免疫细胞(吞噬细胞、杀伤细胞、树突状细胞等);固有免疫分子(补体、细胞因子、酶类物质等)。

非特异性免疫的意义

  非特异性免疫是特异性免疫的基础,特异性免疫所产生的免疫物质又能增强非特异性免疫的作用。例如,巨噬细胞吞噬、加工、处理抗原物质,并把抗原传递给淋巴细胞,使其产生抗体或淋巴因子,加强杀伤靶细胞的能力。反过来,抗体和淋巴因子的产生也加强了巨噬细胞的趋化、活化和吞噬作用。因此,增强机体的非特异性免疫对提

什么是非特异性免疫?

非特异性免疫(英文:nonspecific immunity)又称先天免疫或固有免疫。它和特异性免疫一样都是人类在漫长进化过程中获得的一种遗传特性。非特异性免疫是人一生下来就具有,而特异性免疫需要经历一个过程才能获得。炎症反应是人一生下来就有的能力。 固有免疫对各种入侵的病原微生物能快速反应,同时在

非特异性免疫的特点

抗病毒和抗细菌的非特异性免疫有许多相同之处,现将其特点给予补充。 巨噬细胞对阻止病毒感染和促进感染的恢复具有重要作用。血流中的单核细胞也能吞噬和清除病毒,中性粒细胞只能吞噬病毒,不能将其消灭,如果被吞噬的病毒不能消灭则可将病毒带到全身,引起播散。正常人血清中含有能抑制病毒感染的物质,称为病毒抑制物。

非特异性什么意思

用简单的话说特异性就是有一定规律性,相对来说针对某地事物具有固定的特征。而非特异性就是不固定的,没有特征性的。

非特异性免疫的特点

  ①作用范围广。机体对入侵抗原物质的清除没有特异的选择性。  ②反应快。抗原物质一旦接触机体,立即遭到机体的排斥和清除。  ③有相对的稳定性。既不受入侵抗原物质的影响,也不因入侵抗原物质的强弱或次数而有所增减。但是,当机体受到共同抗原或佐剂的作用时,也可增强免疫的能力。  ④有遗传性。生物体出生后

什么是特异性免疫和非特异性免疫

大自然当中存在着很多的病原微生物,人类在长期的进化过程中进化出了一种自我保护的功能,也就是免疫功能。人体能依靠这种功能可以识别自己和非己的成分,从而破坏和排斥进入体内的抗原物质,或人体本身所产生的损伤细胞和肿瘤细胞,以维持人体的健康。它包括非特异性免疫和特异性变异,非特异性免疫就是人类先天具有的,不

什么是非特异性免疫和特异性免疫

抗感染免疫包括先天性和获得性免疫两大类。先天性免疫:是机体在种系发育进化过程中逐渐建立起来的一系列天然防御功能,是经遗传获得,能传给下一代,其作用并非针对某种病原体故称非特异性免疫,由屏障结构,吞噬细胞及正常体液和组织免疫成分构成。获得性免疫:是出生后经主动或被动免疫方式而获得的,是在生活过程中接触