人ELISA试剂盒竞争法测抗原

人ELISA试剂盒然后再加标本和酶标抗体进行竞争结合反应。竞争法测抗体有多种模式,可将标本和酶标抗体与固相抗原竞争结合,抗HBc 一般采用此法。另一种模式为将标本与抗原一起加入到固相抗体中进行竞争结合,洗涤后再加入酶标抗体,与结合在固相上的抗原反应。抗HBe的检测一般采用此法。小分子抗原或半抗原因缺乏可作夹心法的两个以上的位点,因此不能用双抗体夹心法进行测定,可以采用竞争法模式。其原理是标本中的抗原和一定量的酶标抗原竞争与固相抗体结合。标本中抗原量量愈多,结合在固相上的酶标抗原愈少,最后的显色也愈浅。小分子激素、药物等ELISA测定多用此法。做了十多次的ELISA,能够得到线性比较好的标准曲线,但是同样浓度的标准品每次的OD值都不一致,样品就更加惨不忍睹了,除了酶标板之外,其余封闭蛋白,抗体,抗体稀释度,等等条件都已经更换过,但是问题还是没能解决,怀疑是酶标板的问题。求教各位高手,有什么方法可以快速验证酶标板的可靠性。人......阅读全文

抗原

决定抗原特异性的物质基础是抗原分子中的抗原表位。抗原以抗原决定簇与相应淋巴细胞的抗原受体结合而激活淋巴细胞引起免疫应答。换言之,淋巴细胞表面的抗原识别受体通过识别抗原决定簇而区分“自身”与“异己”。抗原也是以抗原决定簇与相应抗体特异性结合而发生反应的。因此,抗原决定簇是免疫应答和免疫反应具有特异性的

放射免疫测定技术的种类

按其方法学原理,主要有两种基本类型。1、放射免疫分析(RIA)RIA 是该类技术最经典的模式。它是以放射核素标记抗原与反应系统中未标记的抗原竞争特异性抗体的基本原理来测定待检样品中抗原量的一种分析法。使放射性标记抗原和未标记抗原(待测物)与不足量的特异性抗体竞争性地结合,反应后分离并测量放射性而求得

抗原的抗原性(一)

  自发现抗体后,用血清学方法在体外实验,证明了天然抗原与其相应抗体发生特异性结合,这是一个重要的免疫学现象,称这种特性为抗原的抗原性。在早期由于尚未建立对蛋白质抗原进行分析的方法,为研究抗原性的化学本质造成了困难。奥地利免疫化学家Landsteiner在本世纪20年代创建了人工结合抗原,并应

抗原的抗原性(二)

  三、天然蛋白质的抗原性  绝大多数免疫原性物质是大分子蛋白质或细胞组分,但只是其有限的部位能与其相应抗体结合,此部位称为抗原决定簇或表位(前述载体-半抗原效应已证明一个抗原分子须有T细胞决定簇和B细胞决定簇)。由于天然大分子蛋白质结构复杂,并具有空间构型,因此对其单一抗原决定簇的化学组成、定位及

抗原-抗原决定簇

[大纲]抗原与抗原性的概念影响抗原免疫原性的因素抗原决定簇[解析]1、抗原抗原(Ag)  是指凡能刺激机体产生抗体或致敏淋巴细胞,并能与之结合发生特异性免疫反应的物质。抗原有两种基本特性:免疫原性和反应原性,统称为抗原性免疫原性:指抗原刺激机体产生抗体和致敏淋巴细胞的能力或特性。反应原性:指抗原与抗

抗原加工与抗原递呈

抗原加工是指蛋白质抗原在细胞内被降解成能与MHC分子结合的肽的过程。抗原递呈是指MHC分子与抗原肽结合,将其展示于细胞表面供T细胞识别的过程。抗原又分为内源性抗原和外源性抗原,内源性抗原:细胞内产生的蛋白质抗原,包括自身抗原和非己抗原----MHCⅠ分子递呈。外源性抗原:由细胞外摄入细胞内的蛋白质抗

免疫学中竞争法的基本原理

1、把抗原或抗体结合到某种固相载体表面,并保持其免疫活性。2、把抗原或抗体与某一种酶连接成酶标抗原或抗体,这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性,又保留酶的活性。在测定时,把受检标本(测定其中的抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗

免疫学中竞争法的基本原理

1、把抗原或抗体结合到某种固相载体表面,并保持其免疫活性。2、把抗原或抗体与某一种酶连接成酶标抗原或抗体,这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性,又保留酶的活性。在测定时,把受检标本(测定其中的抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗

竞争法酶联免疫吸附测定的应用特点

竞争法可用于测定抗原,也可用于测定抗体。以测定抗原为例,受检抗原和酶标抗原竞争与固相抗体结合,因此结合于固相的酶标抗原量与受检抗原的量呈反比。

免疫学中竞争法的基本原理

1、把抗原或抗体结合到某种固相载体表面,并保持其免疫活性。2、把抗原或抗体与某一种酶连接成酶标抗原或抗体,这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性,又保留酶的活性。在测定时,把受检标本(测定其中的抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗

免疫学中竞争法的基本原理

1、把抗原或抗体结合到某种固相载体表面,并保持其免疫活性。2、把抗原或抗体与某一种酶连接成酶标抗原或抗体,这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性,又保留酶的活性。在测定时,把受检标本(测定其中的抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗

竞争法酶联免疫吸附测定的操作步骤

⑴将特异抗体与固相载体连接,形成固相抗体。洗涤。⑵待测管中加受检标本和一定量酶标抗原的混合溶液,使之与固相抗体反应。如受检标本中无抗原,则酶标抗原能顺利地与固相抗体结合。如受检标本中含有抗原,则与酶标抗原以同样的机会与固相抗体结合,竞争性地占去了酶标抗原与固相载体结合的机会,使酶标抗原与固相载体的结

免疫学中竞争法的基本原理

1、把抗原或抗体结合到某种固相载体表面,并保持其免疫活性。2、把抗原或抗体与某一种酶连接成酶标抗原或抗体,这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性,又保留酶的活性。在测定时,把受检标本(测定其中的抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗

Elisa方法中的竞争法与夹心法的区别

1、检测范围不同竞争法一般用于检测无法同时与两种抗体结合的小分子抗原;夹心法适用于测定二价或二价以上的大分子抗原,但不适用于测定半抗原及小分子单价抗原,因其不能形成两位点夹心。2、检测原理不同竞争法的检测原理为:受检抗原和酶标抗原竞争与固相抗体结合,因此结合于固相的酶标抗原量与受检抗原的量呈反比;夹

竞争法ELISA中,主要两种计算方法

在竞争法ELISA中,阴性孔呈色深于阳性孔。阴性呈色的强度取决于反应中酶结合物的浓度和加入竞争抑制物的量,一般调节阴性对照的吸光度在1.0-1.5之间,此时反应最为敏感。竞争法ELISA不易用自视判断结果,因肉眼很难辨别弱阳性反应与阴性对照的显色差异,一般均用比色计测定,读出S、P和N的吸光值。计算

一文了解tefia固相抗体竞争法原理

  ①把抗原zhidao或抗体结合到某种固相载体表面,并保持其免疫活性。②把抗原或抗体与某一种酶连接成酶标抗原或抗体,这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性,又保留酶的活性。在测定时,把受检标本(测定其中的抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上

ELISA技术综述(一)

ELISA原理ELISA利用抗原抗体之间专一性结合之特性,对标本进行检测;由于结合与固体承载物(一般为塑胶孔盘)上之抗原或抗体仍可具有免疫活性,因此设计 其结合 机制後,配合酵素显色反应,即可显示特定抗原或抗体是否存在,并可利用显色之深浅进行定量分析。根据待测样品与结合机制的不同,ELISA

全自动酶联荧光免疫分析系统的基本原理

免疫酶技术是将抗原、抗体特异性反应和酶的高效催化作用原理有机结合的一种新颖、实用的免疫学分析技术。它通过共价结合将酶与抗原或抗体结合,形成酶标抗原或抗体,或通过免疫方法使酶与抗酶抗体结合,形成酶-抗体复合物。这些酶标抗体(抗原)或酶-抗体复合物仍保持免疫学活性和酶活性,可以与相应的抗原(抗体)结合,

全自动酶联荧光免疫分析系统的工作原理

免疫酶技术是将抗原、抗体特异性反应和酶的高效催化作用原理有机结合的一种新颖、实用的免疫学分析技术。它通过共价结合将酶与抗原或抗体结合,形成酶标抗原或抗体,或通过免疫方法使酶与抗酶抗体结合,形成酶-抗体复合物。这些酶标抗体(抗原)或酶-抗体复合物仍保持免疫学活性和酶活性,可以与相应的抗原(抗体)结合,

超抗原与普通抗原的区别

超抗原(super antigen,SAg)是一类只需极低浓度(≤10-9M)即可激活大量的T细胞克隆,产生极强免疫应答的物质。超抗原与普通抗原相比,不需要常规的细胞内抗原提呈,无MHC限制性。超抗原一端与APC表面的MHC-Ⅱ类分子抗原结合槽外的非多态区结合,一端与TCR的Vβ外侧区结合,通过

抗原表位是抗原肽吗

抗原表位,又称抗原决定指抗原分子中决定抗原特异性的特殊化学基团。抗原通过抗原表位与相应的淋巴细胞表面的抗原受体结合,从而激活淋巴细胞,引起免疫应答;抗原也借表位与相应抗体或致敏淋巴细胞发生特异性结合而发挥免疫效应。抗原表位的性质、数目和空间构型决定抗原的特异性。抗原肽具有免疫原性的多肽或抗原衍生肽。

根据抗原的来源可将抗原分类

根据抗原的来源可将抗原分为:(1)异种抗原(xenoantigens):病原微生物、类毒素等不同种族之间的抗原;(2)同种异型抗原(9alloantigens):存在于同一种族不同个体之间的抗原,如HLA,ABO血型抗原,Rh抗原, MHC等;(3)自身抗原(autoantigens):自身成分,分

全自动酶联荧光免疫分析系统原理和特点

  1、原理   全自动酶联荧光免疫分析系统(VIDAS)是利用免疫酶技术进行细菌鉴定的仪器(图1-1)。   全自动酶联荧光免疫分析系统   免疫酶技术是将抗原、抗体特异性反应和酶的高效催化作用原理有机结合的一种新颖、实用的免疫学分析技术。它通过共价结合将酶与抗原或抗体结合,形成酶标抗原或抗

Elisa有哪些常用的方法

1. 直接法测定抗原 2.间接法测定抗体 3.双抗体夹心法测定抗原 4. 竞争法测定抗原

竞争法ELISA中的两种主要计算方法

在竞争法ELISA中,阴性孔呈色深于阳性孔。阴性呈色的强度取决于反应中酶结合物的浓度和加入竞争抑制物的量,一般调节阴性对照的吸光度在1.0-1.5之间,此时反应最为敏感。竞争法ELISA不易用自视判断结果,因肉眼很难辨别弱阳性反应与阴性对照的显色差异,一般均用比色计测定,读出S、P和N的吸光值。计算

详细说明提高竞争-ELISA-法准确性的实验流程

提高竞争 ELISA 法准确性的实验流程:实验准备酶标仪,能够准确测量吸光度。恒温培养箱,控制孵育温度。移液器,确保准确加样。高质量的特异性抗体和抗原,确保其纯度和活性。合适的酶标记试剂,如辣根过氧化物酶(HRP)或碱性磷酸酶(AP)。酶反应底物,如 TMB(四甲基联苯胺)或 pNPP(对硝基苯磷酸

免疫检测中的反应模式

在免疫检测中,即使相同的项目,也常常有不同的反应模式。这些模式各有特点,其中夹心法、竞争法可用于检测抗原,也可用于检测抗体;间接法、捕获法仅可用于检测抗体。下面为大家介绍各种反应模式的特点。 夹心法夹心法分为检测抗体的双抗原夹心法和检测抗原的双抗体夹心法。其中双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法,可用

免疫检测中的反应模式

在免疫检测中,即使相同的项目,也常常有不同的反应模式。这些模式各有特点,其中夹心法、竞争法可用于检测抗原,也可用于检测抗体;间接法、捕获法仅可用于检测抗体。下面为大家介绍各种反应模式的特点。夹心法夹心法分为检测抗体的双抗原夹心法和检测抗原的双抗体夹心法。其中双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法,可用于

抗原制备

不管是制备单抗还是多抗,抗原的设计与制备都是一个非常重要的问题,设计或者制备得不好的抗原有可能完全不能免疫出抗体来。一个良好的抗原必须具体的条件:(1)分子足够大。对于多肽或蛋白质类的抗原来说,一个抗原决定簇(又叫表位,epitope),通常由6-8个氨基酸残基组成。而平均每5-10kD才有一个表位

ELISA的原理和类型

ELISA的原理ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与