人ELISA试剂盒竞争法测抗原
人ELISA试剂盒然后再加标本和酶标抗体进行竞争结合反应。竞争法测抗体有多种模式,可将标本和酶标抗体与固相抗原竞争结合,抗HBc 一般采用此法。另一种模式为将标本与抗原一起加入到固相抗体中进行竞争结合,洗涤后再加入酶标抗体,与结合在固相上的抗原反应。抗HBe的检测一般采用此法。小分子抗原或半抗原因缺乏可作夹心法的两个以上的位点,因此不能用双抗体夹心法进行测定,可以采用竞争法模式。其原理是标本中的抗原和一定量的酶标抗原竞争与固相抗体结合。标本中抗原量量愈多,结合在固相上的酶标抗原愈少,最后的显色也愈浅。小分子激素、药物等ELISA测定多用此法。做了十多次的ELISA,能够得到线性比较好的标准曲线,但是同样浓度的标准品每次的OD值都不一致,样品就更加惨不忍睹了,除了酶标板之外,其余封闭蛋白,抗体,抗体稀释度,等等条件都已经更换过,但是问题还是没能解决,怀疑是酶标板的问题。求教各位高手,有什么方法可以快速验证酶标板的可靠性。人......阅读全文
竞争法测定抗原的操作步骤
竞争法可用于测定抗原,也可用于测定抗体。以测定抗原为例,受检抗原和酶标抗原竞争与固相抗体结合,因此结合于固相的酶标抗原量与受检抗原的量呈反比。操作步骤如下:⑴将特异抗体与固相载体连接,形成固相抗体。洗涤。⑵待测管中加受检标本和一定量酶标抗原的混合溶液,使之与固相抗体反应。如受检标本中无抗原,则酶标抗
检测抗原的竞争法知识点
用于测定小分子抗原,如药物、激素等。原理为先用抗小分子的特异性抗体包被固相,然后同时加入待测样本和酶标记的小分子,两种小分子竞争与固相上的抗小分子的特异性抗体结合,温育一定时间后洗涤,加入酶底物显色。特点是:①酶标记抗原与样品或标准品中的非标记抗原具有相同的与固相抗体结合的能力;②反应体系中,固相抗
检测抗原的竞争法知识点
用于测定小分子抗原,如药物、激素等。原理为先用抗小分子的特异性抗体包被固相,然后同时加入待测样本和酶标记的小分子,两种小分子竞争与固相上的抗小分子的特异性抗体结合,温育一定时间后洗涤,加入酶底物显色。特点是:①酶标记抗原与样品或标准品中的非标记抗原具有相同的与固相抗体结合的能力;②反应体系中,固相抗
竞争法测定抗原抗体的相关介绍
⑴将特异抗体与固相载体连接,形成固相抗体。洗涤。 ⑵待测管中加受检标本和一定量酶标抗原的混合溶液,使之与固相抗体反应。如受检标本中无抗原,则酶标抗原能顺利地与固相抗体结合。如受检标本中含有抗原,则与酶标抗原以同样的机会与固相抗体结合,竞争性地占去了酶标抗原与固相载体结合的机会,使酶标抗原与固相
人ELISA试剂盒竞争法测抗原
人ELISA试剂盒然后再加标本和酶标抗体进行竞争结合反应。竞争法测抗体有多种模式,可将标本和酶标抗体与固相抗原竞争结合,抗HBc 一般采用此法。另一种模式为将标本与抗原一起加入到固相抗体中进行竞争结合,洗涤后再加入酶标抗体,与结合在固相上的抗原反应。抗HBe的检测一般采用此法。小分子抗原或半
竞争法测抗原基本原理
竞争法测抗原基本原理:首先将特异性抗体吸附于固相载体表面(包被),经洗涤后分成两组:一组加酶标记抗原和被测抗原的混合液,而另一组只加酶标记抗原,标本中的抗原和一定量的酶标抗原竞争与固相抗体结会(标本中抗原量含量愈多,结含在固相上的酶抗原愈少,最后的显色也愈浅);再经孵育洗涤后加底物显色,两组底物降解
ELISA抗原竞争法检测样品中sIL...
实验概要本法是用纯化或重组的IL-2R(α链,P55,CD25,Tac抗原)蛋白包被96孔酶标反应板,同时加入已知量的抗IL-2RMcAb,再分别加入sIL-2R标准品与待测样品。则待测sIL-2R或者sIL-2R标准品与包被的纯化或重组的IL-2R蛋白竞争与抗IL-2R McAb结合。通过与标
ELISA测定的常用模式竞争法测抗原
大分子抗原因其具有两个以上的抗原决定簇,而可用双抗体夹心法测定,小分子半抗原如地高辛、茶碱等药物以及T3,T4及睾酮等激素因其只有一个抗原决定簇,从而无法使用双抗夹心方法测定,只能采用竞争抑制法测定。具体步骤如下:1.先用抗小分子的特异抗体如双抗体夹心法一样包被固相并封闭。2.同时加入待测样本和酶标
竞争法测抗原基本原理
竞争法测抗原基本原理:首先将特异性抗体吸附于固相载体表面(包被),经洗涤后分成两组:一组加酶标记抗原和被测抗原的混合液,而另一组只加酶标记抗原,标本中的抗原和一定量的酶标抗原竞争与固相抗体结会(标本中抗原量含量愈多,结含在固相上的酶抗原愈少,最后的显色也愈浅),再经孵育洗涤后加底物显色,两组底物降解
ELISA抗原竞争法检测样品中sIL2R含量
实验概要本法是用纯化或重组的IL-2R(α链,P55,CD25,Tac抗原)蛋白包被96孔酶标反应板,同时加入已知量的抗IL-2RMcAb,再分别加入sIL-2R标准品与待测样品。则待测sIL-2R或者sIL-2R标准品与包被的纯化或重组的IL-2R蛋白竞争与抗IL-2R McAb结合。通过与标
免疫技术中竞争法可以测大分子抗原吗
可以的 因为ELISA中有一种方法是竞争法测抗体,一般的抗原应该没有抗体大吧IgG有15KD的,但是个人感觉就好像你拿1000ul的移液器去吸取0.5ul一样,准确率不敢保证,原理上来说是没问题的,下例:抗体的测定一般不使用竞争法。当抗原中杂质难以去除或抗原的结合特异性不稳定时,可采用这种模式测定抗
ELISA抗原竞争法检测样品中sIL2R含量
【基本原理】 本法是用纯化或重组的IL-2R(α链,P55,CD25,Tac抗原)蛋白包被96孔酶标反应板,同时加入已知量的抗IL-2RMcAb,再分别加入sIL-2R标准品与待测样品。则待测sIL-2R或者sIL-2R标准品与包被的纯化或重组的IL-2R蛋白竞争与抗IL-2R McAb结合
关于Elisa试剂盒竞争法测抗原的原理与步骤
当抗原材料中的干扰物质不易除去,或不易得到足够的纯化抗原时,可用此法检测特异性抗体。其原理为标本中的抗体和一定量的酶标抗体竞争与固相抗原结合。标本中抗体量越多,结合在固相上的酶标抗体愈少,因此阳性反应呈色浅于阴性反应。如抗原为高纯度的,可直接包被固相。如抗原中会有干扰物质,直接包被不易成功,可采用捕
Elisa竞争法抑制试验原理
针对于HBeAb的中和抑制法采用抗-HBe抗体包被反应板,加入校准品及被测样本,同时加入定量HBeAg中和抗原,经过振荡孵育,洗板后再加入铕标记的抗-HBe,若标本中抗-HBe浓度高,HBeAg将被大量中和,使最后形成的抗-HBe-HBeAg-铕标记抗-HBe复合物减少。增强液(β-NTA)将标记在
Elisa竞争法抑制试验原理
针对于HBeAb的中和抑制法采用抗-HBe抗体包被反应板,加入校准品及被测样本,同时加入定量HBeAg中和抗原,经过振荡孵育,洗板后再加入铕标记的抗-HBe,若标本中抗-HBe浓度高,HBeAg将被大量中和,使最后形成的抗-HBe-HBeAg-铕标记抗-HBe复合物减少。增强液(β-NTA)将标记在
竞争法测抗体的实验原理
竞争法测抗体的实验原理当抗原材料中的干扰物质不易除去,或不易得到足够的纯化抗原时,可用此法检测特异性抗体。其原理为标本中的抗体和一定量的酶标抗体竞争与固相抗原结合。标本中抗体量越多,结合在固相上的酶标抗体愈少,因此阳性反应呈色浅于阴性反应。如抗原为高纯度的,可直接包被固相。如抗原中会有干扰物质,直接
ELISA常用检测法——竞争法原理介绍
做ELISA实验,有几种常见的实验方法,他们分别是竞争法、捕获法、间接法、夹心法、而夹心法又可以分为双抗体夹心法和双抗原夹心法!在今天的文章中,将详细得跟大家讲述竞争法的实验原理!竞争法一般分为直接竞争法和间接竞争法,这里我们以直接竞争法为例进行原理讲解。直接竞争法,其基本原理是:将合适浓度的包被抗
在定量测定抗原时,直接elisa与间接elisa有何区别
直接竞争ELISA和间接竞争ELISA区别 1、直接竞争,标记抗原,与检测样品中的抗原竞争抗体。 2、间接竞争,标记抗体,固相抗原与液相抗原(样品)竞争标记抗体。 3、定义 间接竞争法的模型:包被抗原,用HRP-抗体与样本一起加入。样本中的Ag与Solid-Ag竞争HRP-Ab,固相吸附的H
免疫学中竞争法原理讲解
基本原理是:①把抗原或抗体结合到某种固相载体表面,并保持其免疫活性。②把抗原或抗体与某一种酶连接成酶标抗原或抗体,这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性,又保留酶的活性。在测定时,把受检标本(测定其中的抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上
ELISA测定的常用模式竞争法测抗体
抗体的测定一般不使用竞争法。当抗原中杂质难以去除或抗原的结合特异性不稳定时,可采用这种模式测定抗体。如乙型肝炎病毒核心抗体(HBcAb)和乙型肝炎病毒e抗体(HBe·Ab)的测定,由于e抗原较核心抗原仅多29个氨基酸,e抗原很容易转变为核心抗原,因此,HBcAb和HBeAb的测定均采用竞争法。但其测
酶联免疫吸附剂测定的分类方法
夹心法夹心法常用于检测大分子抗原,一般的操作步骤为:将具有专一性的抗体固著(coating)于塑胶孔盘上,完成后洗去多余抗体;加入待测检体,检体中若含有待测的抗原,则其会与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结;洗去多余待测检体,加入另一种对抗原专一的一次抗体,与待测抗原进行键结;洗去多余未键结一次抗体,加
elisa都有什么类型
夹心法夹心法常用于检测大分子抗原,一般之操作步骤为:将具有专一性之抗体固著(coating)于塑胶孔盘上,完成后洗去多余抗体加入待测检体,检体中若含有待测之抗原,则其会与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结洗去多余待测检体,加入另一种对抗原专一之一次抗体,与待测抗原进行键结洗去多余未键结一次抗体,加入带
elisa都有什么类型,分别适用与检测哪些物质
夹心法夹心法常用于检测大分子抗原,一般之操作步骤为:将具有专一性之抗体固著(coating)于塑胶孔盘上,完成后洗去多余抗体加入待测检体,检体中若含有待测之抗原,则其会与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结洗去多余待测检体,加入另一种对抗原专一之一次抗体,与待测抗原进行键结洗去多余未键结一次抗体,加入带
完全抗原,半抗原和超抗原的概念区别
完全抗原:同时具有免疫原性和抗原性的抗原,又称免疫原。半抗原:仅具备抗原性而无免疫原性的抗原,如某些寡糖、类脂和药物等。超抗原:能非特异激活多克隆T细胞并能刺激其分泌大量细胞因子的抗原。
酶联免疫吸附测定的分类方法
1、夹心法 夹心法常用于检测大分子抗原,一般的操作步骤为: 将具有专一性的抗体固著(coating)于塑胶孔盘上,完成后洗去多余抗体; 加入待测检体,检体中若含有待测的抗原,则其会与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结; 洗去多余待测检体; 洗去多余未键结一次抗体,加入带有酶的二次抗体,与一
抗原
· Designing Antigens (Perkin-Elmer)What is an Epitope?Choosing the EpitopeMethods for Epitope PredictionDesigning the Synthetic PeptidePromisc
抗原
决定抗原特异性的物质基础是抗原分子中的抗原表位。抗原以抗原决定簇与相应淋巴细胞的抗原受体结合而激活淋巴细胞引起免疫应答。换言之,淋巴细胞表面的抗原识别受体通过识别抗原决定簇而区分“自身”与“异己”。抗原也是以抗原决定簇与相应抗体特异性结合而发生反应的。因此,抗原决定簇是免疫应答和免疫反应具有特异性的
大鼠ELISA试剂盒的技术分析
最常用于检测抗原的方法是非竞争性的双抗体夹心法,其次是竞争法。但竞争法在具体实验中有些困难,特别是检测微生物的抗原,因为需要标记抗原,这对于某些抗原是很难做到的,大鼠ELISA试剂盒甚至是不可能的。另外在竞争法中,酶标记的抗原与标本直接混合在一起,许多标本中含有酶抑制剂或蛋白A样物质,可影响ELIS
放射免疫测定技术的种类
按其方法学原理,主要有两种基本类型。1、放射免疫分析(RIA)RIA 是该类技术最经典的模式。它是以放射核素标记抗原与反应系统中未标记的抗原竞争特异性抗体的基本原理来测定待检样品中抗原量的一种分析法。使放射性标记抗原和未标记抗原(待测物)与不足量的特异性抗体竞争性地结合,反应后分离并测量放射性而求得
抗原加工与抗原递呈
抗原加工是指蛋白质抗原在细胞内被降解成能与MHC分子结合的肽的过程。抗原递呈是指MHC分子与抗原肽结合,将其展示于细胞表面供T细胞识别的过程。抗原又分为内源性抗原和外源性抗原,内源性抗原:细胞内产生的蛋白质抗原,包括自身抗原和非己抗原----MHCⅠ分子递呈。外源性抗原:由细胞外摄入细胞内的蛋白质抗