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High performance liquid chromatography (HPLC) is the gold standard methodology for the HbA1c test. By manipulating the flow rate of the liquid (i.e. mobile phase) and the temperature of the HPLC column (i.e. stationary phase), it is possible to change the chromatographic display."......阅读全文

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High performance liquid chromatography (HPLC) is the gold standard methodology for the HbA1c test. By manipulating the flow rate of the liquid (i.

HPLC简介

目录1 高效液相色谱法的定义2 对仪器的一般要求和色谱条件2.1 色谱柱2.2 检测器2.3 流动相3 系统适用性试验3.1 色谱柱的理论板数(n)3.2 分离度(R)3.3 重复性3.4 拖尾因子(T)4 测定法4.1 内标法4.2 外标法4.3 加校正因子的主成分自身对照法4.4 不加校正因子的

HPLC用水

  HPLC用水可以通过以下几个方面来得到:  1、专门的纯水机或超纯水机;  2、去离子水重蒸;  3、二次或三次重蒸水;  4、采用类似家用的纯水机;  5、市场上瓶装的纯净水或蒸馏水;  6、其它途径  不管采用何种途径,配制流动相应用新鲜水,水质越高放置时间越短。  理想的HPLC用水应为1

HPLC-填料

目前液相色谱的填料主要为硅胶及其键合硅胶。硅胶的主要优点是柱效高,机械强度高,物理性质如孔结构、孔径、比表面积和孔径易于控制,通过表面改性可获得多种功能固定相.在高效液相色谱的发展的过程中曾使用过大颗粒全多孔硅胶、表面多孔的颗粒、小颗粒全多孔硅胶。高效液相色谱使用中孔和大孔全多孔的硅胶。现代高效液相

HPLC组成

HPLC由溶剂输送系统(脱气机、高压泵等)、进样系统(定量泵、六通阀、定量环、进样针等)、分离系统(色谱柱等)、检测系统(检测器等)、记录及数据处理系统。高压输液泵:将流动相在高压下连续不断地送入液路系统,具有有足够的压力,输出流量恒定、可调,输出压力平稳,泵室体积小,泵体抗腐蚀、耐酸等特点。压力平

HPLC应用

一、样品测定1.流动相比例调整:由于我国药品标准中没有规定柱的长度及填料的粒度,因此每次新开检新品种时几乎都须调整流动相(按经验,主峰一般应调至保留时间为6~15分钟为宜)。所以建议第一次检验时请少配流动相,以免浪费。弱电解质的流动相其重现性更不容易达到,请注意充分平衡柱。2.样品配制:①溶剂;②容

分析HPLC如何放大到制备型HPLC?

在分析液相中色谱柱的典型进样量是微克级,甚至更低。样品量和固定相之比有的甚至小于1:10000。进样体积一般来说都大大小于色谱柱体积(小于1:100)。 在这种条件下,会达到很好的分离效果,峰形尖锐并且很对称。分析系统线形放大到制备型HPLC意味着使用直径更大的制备柱、更高的流速和根据色谱柱的长度增

维他命HPLC剖析

  维他命做为关键的食品类或是饲料原料,在国家标准或是各种各样制造行业、产品标准常有涉及含水量的检验。文中共享一下对于某些维他命剖析的检验的实例:   一、食品类中维他命、的测量   第一:食品类中维他命A和维他命E的测量 反相液相色谱法   国家标准连用的是C30柱,水/乙醇的流动性相管理体

HPLC用水来源

HPLC用水可以通过以下几个方面来得到:1 专门的纯水机或超纯水机;2 去离子水重蒸;3 二次或三次重蒸水;4 采用类似家用的纯水机;5 市场上瓶装的纯净水或蒸馏水;6 其它途径不管采用何种途径,配制流动相应用新鲜水,水质越高放置时间越短。理想的HPLC用水应为18.2Ω的超纯水,并通过0.22um

HPLC系统概述

HPLC系统一般由输液泵、进样器、色谱柱、检测器、数据记录及处理装置等组成。其中输液泵、色谱柱、检测器是关键部件。有的仪器还有梯度洗脱装置、在线脱气机、自动进样器、预柱或保护柱、柱温控制器等,现代HPLC仪还有微机控制系统,进行自动化仪器控制和数据处理。制备型HPLC仪还备有自动馏分收集装置。最早的

HPLC的应用

  一、样品测定  1.流动相比例调整:由于我国药品标准中没有规定柱的长度及填料的粒度,因此每次新开检新品种时几乎都须调整流动相(按经验,主峰一般应调至保留时间为6~15分钟为宜)。所以建议第一次检验时请少配流动相,以免浪费。弱电解质的流动相其重现性更不容易达到,请注意充分平衡柱。  2.样

安捷伦HPLC维护

  一、如何处理 HPLC 中的盐带来的问题?   很多问题是由于流动相含有盐成分造成的。建议在清洗时将水加热后再冲洗,这样既可以将盐溶解的更好,也可以溶解一些脂溶性物质,会减少很多问题的发生,包括管路堵塞,盐析出,基线噪音……   二、安捷伦1100及1200液相泵的日常维护   泵是

HPLC分类及其原理

HPLC分类有很多种,可以根据不同的依据进行分类。1. 根据流动相和固定相的极性不同,HPLC可以分为正相色谱和反相色谱。正相高效液相色谱: 色谱柱中的固定相是由硅胶、氧化铝等极性化合物组成。当色谱运行时,由于样品中的极性化合物对固定相有较强的亲和力,使它们在色谱柱中的保留时间比非极性化合物长,因此

HPLC基础知识

鉴于HPLC应用在药品分析中越来越多,因此每一个药品分析人员应该掌握并应用HPLC。 (一)概论 一、液相色谱理论发展简况 色谱法的分离原理是:溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时,由于与固定相(stationary ph

uhplc和hplc区别

hplc是高效液相色谱,uplc是超高效液相色谱,这两个的区别是超高效液相色谱借助于HPLC(高效液相色谱)的理论及原理,涵盖了小颗粒填料、非常低系统体积及快速检测手段等全新技术,增加了分析的通量、灵敏度及色谱峰容量。

HPLC维护知识问答

  1、为什么溶剂和样品要过滤?   溶剂和样品过滤非常重要,它会对色谱柱、仪器起到保护作用,消除由于污染对分析结果的影响。  色谱柱:由于填料颗粒很细,色谱柱内腔很小,溶剂和样品中的细小颗粒会使色谱柱和毛细管容易堵塞。  仪器:溶剂和样品中的细小颗粒会增加进样阀的堵塞和磨损,同时也会增加泵头内的蓝

HPLC入门问题FAQ

HPLC 篇 1 . HPLC 灵敏度不够的主要原因及解决办法 样品量不足:解决办法为增加样品量 样品未从柱子中流出:可根据样品的化学性质改变流动相或柱子 样品与检测器不匹配:根据样品化学性质调整波长或改换检测器 检测器衰减太多:调整衰减即可。 检测器时间常数太大:解决办法为降低时间参数 检测器池窗

HPLC名词术语

色谱图(Chromatogram) : 色谱柱流出物通过检测器时所产生的响应信号对时间的曲线图,其纵坐标为信号强度,横坐标为时间。色谱峰(Peak):色谱柱流出组分通过检测器时产生的响应信号。峰底(Peak Base):峰的起点与终点之间连接的直线。峰高(Peak Height):峰最大值到峰底的距

HPLC基础知识

鉴于HPLC应用在药品分析中越来越多,因此每一个药品分析人员应该掌握并应用HPLC。 (一)概论 一、液相色谱理论发展简况 色谱法的分离原理是:溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时,由于与固定相(stationary phase)发生作用(吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和)的

HPLC填料的选择

基质HPLC填料可以是陶瓷性质的无机物基质,也可以是有机聚合物基质。陶瓷性质的无机物基质主要是硅胶和氧化铝。陶瓷性质的无机物基质刚性大,在溶剂中不容易膨胀。HPLC级的有机聚合物是基于交联的苯乙烯-二乙烯苯或者甲基丙烯酸酯。有机聚合物基质刚性小,更易压缩。溶剂或溶质容易渗入有机质基质中,导致填料颗粒

HPLC入门问题FAQ

HPLC 篇 1 . HPLC 灵敏度不够的主要原因及解决办法 样品量不足:解决办法为增加样品量样品未从柱子中流出:可根据样品的化学性质改变流动相或柱子样品与检测器不匹配:根据样品化学性质调整波长或改换检测器检测器衰减太多:调整衰减即可。检测器时间常数太大:解决办法为降低时间参数检测器池窗污染:解决

比较FPLC与HPLC

1、二者原理相同:都是由经典的液体柱层析引入气相色谱理论,并且对相体进  行了改革,配用高压输液泵,采用高灵敏检测器、梯度洗脱装置、自动收集装置和微机等发展起来的现代液相色谱。  2、特点:二者均具有快速、分辨率高、检测灵敏度高、分离效能高等特点,而且FPLC还具有柱容量大、回收效率高及不易使生物大

HPLCICPMS和HPLCAFS助力食品安全检测

  近期,天津滨海新区召开2011年度科学技术奖励大会,隆重表彰为滨海新区科技发展作出突出贡献的单位和科技工作者。天津检验检疫局动植物与食品检测中心申报的天津检验检疫局重点科技项目《食品安全关键因子的新型检测技术研究与应用》(TK041-2009)荣获科学技术进步奖二等奖。   该项目针

水质对HPLC的影响

  高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography \ HPLC)是一种有效可靠的技术,目前已成为许多实验室研究的重要工具。HPLC最常见的一个问题就是溶剂中的污染物对分析结果的影响。   1、颗粒   颗粒可以损坏泵和注射器。颗粒也可以堵塞色谱柱并

GC和HPLC的区别

Gas Chromatography 气相色谱法气相色谱系统由盛在管柱内的吸附剂(表1) 或惰性固体上涂着液体的固定相和不断通过管柱的气体的流动相组成。将欲分离、分析的样品从管柱一端加入后,由于固定相对样品中各组分吸附或溶解能力不同,即各组分在固定相和流动相之间的分配系数有差别,当组分在两相中反复多

HPLC峰变宽的原因

原因:a.在使用过程中柱本身退化,逐渐降低柱效; b.柱外峰宽效应。一根很好的专用柱用于另一液相色谱系统引起塔板数降低,说明新系统有很大的柱外峰宽效应; c.化学效应,多数是流动相和固定相相互作用所致,改变流动相可使宽峰有所改善。

HPLC的故障及处理

(一) 保留时间变化1.柱温变化       柱恒温2.等度与梯度间未能充分平衡   至少用10倍柱体积的流动相平衡柱3.缓冲液容量不够 用>25mmol/L的缓冲液4.柱污染         每天冲洗柱5.柱内条件变化   稳定进样条件,调节流动相6.柱快达到寿命   采用保护柱(二) 保留时间缩

HPLC基础知识(四)

  4.柱的使用和维护注意事项    色谱柱的正确使用和维护十分重要,稍有不慎就会降低柱效、缩短使用寿命甚至损坏。在色谱操作过程中,需要注意下列问题,以维护色谱柱。① 避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动。温度的突然变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充状况;柱压的突然升高或降低也会冲动柱内

水质对HPLC的影响

水质对HPLC的影响有机物超纯水中的有机物可能影响色谱峰的分离度和积分、可能导致鬼峰、还可能改变固定相的选测性以及影响色谱基线。离子离子浓度的改变会影响分离结果,部分能吸收UV的离子会对峰产生影响。某些有腐蚀性离子的还会降低高压输液泵等配件的使用寿命。胶体胶体会不可逆的吸附在固定相上面,影响柱的分离

HPLC基础知识(六)

三、流动相1.流动相的性质要求    一个理想的液相色谱流动相溶剂应具有低粘度、与检测器兼容性好、易于得到纯品和低毒性等特征。    选好填料(固定相)后,强溶剂使溶质在填料表面的吸附减少,相应的容量因子k降低;而较弱的溶剂使溶质在填料表面吸附增加,相应的容量因子k升高。因此,k值是流动相组成的函数