E.coli基因文库的分类和选择
自 1995 年成立以来，Dharmacon 在生物信息学，RNA 生物学和合成化学方面的专长 , 使我们能够开发出一整套研究基因功能的产品。作为 RNA 定制合成的leader，Dharmacon 公司是 RNA 干扰新发现领域的早期参与者，并且在若干重要的科学发现中，以及确保沉默效率的 siRNA 试剂的商业化过程中做出了重大贡献。Dharmacon 公司保持技术进步，利用生物信息学和化学修饰提高产品性能，从而维持了长久以来 siRNA 领域的领先性。当今，我们研究的领域和研究工具已经扩展到支持 RNA 干扰应用的方方面面；如，siRNA，慢病毒shRNA，microRNA 研究工具，以及对基因，microRNA 和 lncodeRNA 进行功能性筛选的全基因组文库。同样，在过表达研究应用中，Dharmacon 公司收集了最齐全的商业化 cDNA 和 ORF 文库。包括大肠杆菌Keio基因敲除文库，监测基......阅读全文
新技术为肿瘤化疗耐药研究打开“新大门”
近日，东北大学费腾教授课题组利用以CRISPR技术为基础的高通量遗传筛选系统，深入研究了肿瘤化疗耐药性问题，并揭示了其全局性规律和分子基础。相关成果发表在《自然—通讯》。肿瘤化疗耐药是肿瘤诊疗临床实践中遇到的常见问题，严重影响病人预后和临床治疗效果，目前尚未有系统的解决方案。尽管有证据表明多个基因与
基因调控的研究方法
筛选突变型 这是在原核生物中广泛应用的方法，例如在乳糖操纵子的研究中筛选失去了基因调控能力的组成型，包括调节基因发生突变和操纵基因发生突变的突变型，以及筛选即使有乳糖或其他诱导物存在的情况下仍然不能合成β-半乳糖苷酶的超阻遏型等等。 激素诱导 在高等的真核生物中，除了离体培养的体细胞以
概述分子杂交技术常见的杂交分类
分子杂交是通过各种方法将核酸分子固定在固相支持物上，然后用放射性标记的探针与被固定的分子杂交，经显影后显示出目的DNA或RNA分子所处的位置。根据被测定的对象，分子杂交基本可分为以下几大类： (1) Southern杂交:DNA片段经电泳分离后,从凝胶中转移到硝酸纤维素滤膜或尼龙膜上,然后与探
DNA测序方法鸟枪法的操作步骤
“鸟枪法”是一种由生物基因组提取目的基因的方法。首先利用物理方法(如剪切力、超声波等)或酶化学方法(如限制性内切核酸酶)将生物细胞染色体DNA切割成为基因水平的许多片段，继而将这些片段与适当的载体结合，将重组DNA转入受体菌扩增，获得无性繁殖的基因文库，再结合筛选方法，从众多的转化子菌株中选出含有某
DNA测序的方法鸟枪法的原理和操作方法
“鸟枪法”是一种由生物基因组提取目的基因的方法。首先利用物理方法(如剪切力、超声波等)或酶化学方法(如限制性内切核酸酶)将生物细胞染色体DNA切割成为基因水平的许多片段，继而将这些片段与适当的载体结合，将重组DNA转入受体菌扩增，获得无性繁殖的基因文库，再结合筛选方法，从众多的转化子菌株中选出含有某
DNA测序鸟枪法的介绍
“鸟枪法”是一种由生物基因组提取目的基因的方法。首先利用物理方法(如剪切力、超声波等)或酶化学方法(如限制性内切核酸酶)将生物细胞染色体DNA切割成为基因水平的许多片段，继而将这些片段与适当的载体结合，将重组DNA转入受体菌扩增，获得无性繁殖的基因文库，再结合筛选方法，从众多的转化子菌株中选出含
目的基因分离最常用的方法及原理
1.从生物基因组群体中分离目的基因原核生物基因组较小，基因容易定位，用限制性内切酶将基因组切成若干段后，用带有标记的核酸探针，从中选出目的基因。真核生物一般通过基因组文库的方法获得目的基因。图10-3-1 限制性内切酶限制性内切酶(restrictive enzyme)是20世纪60年代末在细菌中发
从RNA抽提到制成cDNA的全过程
一).构建cDNA文库：以生物细胞的总 mRNA 为模板，用反转录酶合成互补的双链 cDNA ，然后接到载体上，转入到宿主后建立的基因文库就是 cDNA 文库。1、mRNA的提取及其完整性的确定1） 总 RNA 的提取RNA 提取方法：APGC法或NP-40或应用试剂盒提取总RNA2）mRNA的分离
《自然》获得首创性全基因组RNAi库
来自奥地利科学院维也纳分子生物学研究院（Institute of Molecular Biotechnology of the Austrian Academy of Sciences）的研究人员以果蝇为研究对象，利用一套完整的基因组序列数据，从达到了88%覆盖率的蛋白编码基因中获得了全基因组范围内
目的基因分离最常用的方法及原理
1.从生物基因组群体中分离目的基因原核生物基因组较小，基因容易定位，用限制性内切酶将基因组切成若干段后，用带有标记的核酸探针，从中选出目的基因。真核生物一般通过基因组文库的方法获得目的基因。图10-3-1 限制性内切酶限制性内切酶(restrictive enzyme)是20世纪60年代末在细菌中发
创建轻链改组噬菌体文库
[器材和试剂]● PCR试剂和设备● 含有起始scFV基因的载体pHENl单链模板DNA（50ng/ul）● Geneclean试剂盒● Wlzard PCR纯化试剂盒● scFvJHL2XhoFOR引物：5'-GAG TCA TTC TCG TCT CGA GAC GGT GAC
烟草基因组计划
生物技术和生命科学将成为21世纪引发新科技革命的重要推动力量。实施基因组计划可以获得一批具有自主知识产权的烟草重要性状功能基因，全面揭示种质资源的遗传背景，确立我国在烟草基因组研究上的核心优势，对提升烟草育种工作整体水平、实现烟草品种的根本性突破、培育烟草新兴产业、更好地发挥烟草模式作物的基础研究作
全自动化DNA文库构建技术简介
在二代测序中，基因文库的构建是一项十分耗时耗力的工作，需要熟练的科研技术人员在整个操作过程中保持需高度注意力，花费大量时间和精力才能完成建库工作。因此，大多数实验室有将文库构建工作自动化的需求，以节省人力。应文库构建自动化的需求，派玛．迪格（PrimaDiag）公司研发了ACSIA NGSLib
碱性卵白酶的发酵生产工艺
冠状耳霉碱性卵白酶大规模生产资料较少。为了获得既高又具商业价值的酶产量，一要获得优良的冠状耳霉产酶菌株，二要优化生长和产酶造就基，三要研究该菌的发酵条件。对生长和产酶造就的研究讲明，蔗糖为最佳碳源，硝酸铵为最佳氮源，酪卵白为最佳诱导剂，但未发现外貌活性剂(SDS，Tween 20，80)对产酶有益，
基因芯片技术在研究领域的应用
包括基因表达检测、寻找新基因、杂交测序、基因突变和多态性分析以及基因文库作图以及等方面。1、基因表达检测。人类基因组编码大约10万个不同的基因，仅掌握基因序列信息资料，要理解其基因功能是远远不够的，因此，具有监测大量mRNA（信使RNA，可简单理解为基因表达的中介物）的实验工具很重要。有关对芯片技术
我国学者提出肿瘤异常生长的“细胞核陷阱”观点
肿瘤发生、发展机制研究，事关癌症患者治疗所需的新技术新药物的研发与应用。11日出版的《癌细胞》杂志发表中国工程院院士、医学免疫学国家重点实验室主任曹雪涛研究团队论文。他们发现新型小G蛋白分子RBJ，RBJ异常活跃则肿瘤生长恶化更快，而降低RBJ活性则可以显著抑制肿瘤生长，提出肿瘤异常生长的“细胞
基因芯片技术的应用实验研究
包括基因表达检测、寻找新基因、杂交测序、基因突变和多态性分析以及基因文库作图以及等方面。1、基因表达检测。人类基因组编码大约10万个不同的基因,仅掌握基因序列信息资料,要理解其基因功能是远远不够的,因此,具有监测大量mRNA(信使RNA,可简单理解为基因表达的中介物)的实验工具很重要。有关对芯片技术
基因芯片的应用研究领域
研究领域包括基因表达检测、寻找新基因、杂交测序、基因突变和多态性分析以及基因文库作图以及等方面。1、基因表达检测。人类基因组编码大约10万个不同的基因，仅掌握基因序列信息资料，要理解其基因功能是远远不够的，因此，具有监测大量mRNA（信使RNA，可简单理解为基因表达的中介物）的实验工具很重要。有关对
关于抗环状胍氨酸多肽抗体的发现历程介绍
1998年Schellekens和Girbal-Neuhause分别根据filaggrin的cDNA序列合成多肽证实瓜氨酸残基是类风湿关节炎特异的抗filaggrin抗体识别表位的必需组成。通过对基因文库中各个序列号的filaggrin氨基酸序列进行分析，合成含有精氨酸、长度在20个氨基酸残基左
抗环状胍氨酸多肽抗体的历程
1998年Schellekens和Girbal-Neuhause分别根据filaggrin的cDNA序列合成多肽证实瓜氨酸残基是类风湿关节炎特异的抗filaggrin抗体识别表位的必需组成。通过对基因文库中各个序列号的filaggrin氨基酸序列进行分析，合成含有精氨酸、长度在20个氨基酸残基左
基因芯片技术在疟原虫研究中的应用
基因芯片技术的出现有力地促进了人们对疟原虫生物学的认识。早在2000年,恶性疟原虫的基因组测序尚未完成, Hayward等根据恶性疟原虫绿豆核酸酶基因文库, 制成“鸟枪”DNA ( shotgunDNA)芯片,分析了疟原虫滋养体和配子体之间的基因表达差异,为疟原虫发育阻断剂和疫苗研究提供了有益线
目的基因的获取3
4、基因组文库的大小一个文库要包含99%的基因组DNA时所需要的克隆数目。 N：克隆数目 P：设定的概率值（如：0．99） x：插入片段平均大小（15～20kb） y：植物基因组大小（以kb计） 如果插入片段平均大小为 20 kb 某植物基因组大小为 4
关于cDNA文库的简介
cDNA文库（cDNA library）：是指某生物某一发育时期所转录的mRNA全部经反转录形成的cDNA片段与某种载体连接而形成的克隆的集合。 cDNA文库是以特定的组织或细胞mRNA为模板，逆转录形成的互补DNA（cDNA）与适当的载体（常用噬菌体或质粒载体）连接后转化受体菌形成重组DNA
基因芯片的应用
1998 年底美国科学促进会将基因芯片技术列为 1998 年度自然科学领域十大进展之一，足见其在科学史上的意义。现在，基因芯片这一时代的宠儿已被应用到生物科学众多的领域之中。它以其可同时、快速、准确地分析数以千计基因组信息的本领而显示出了巨大的威力。这些应用主要包括基因表达检测、突变检测、基因组多态
基因芯片技术的主要应用
1998 年底美国科学促进会将基因芯片技术列为 1998 年度自然科学领域十大进展之一，足见其在科学史上的意义。现在，基因芯片这一时代的宠儿已被应用到生物科学众多的领域之中。它以其可同时、快速、准确地分析数以千计基因组信息的本领而显示出了巨大的威力。这些应用主要包括基因表达检测、突变检测、基因组
31项与免疫学有关的分子生物学实验技术（二）
十二、大肠杆菌感受态细胞（E.coli DH5α）制备E.coli DH5α制备主要操作步骤：1）挑取受体菌（DH5或DH10B）的单菌落于LB培养基中37℃摇床培养过夜（约16小时）；2）取1ml过夜培养物转接于100ml LB培养基中，在37℃摇床上剧烈振荡培养约2.5-3小时（250-30
南京土壤所在秸秆腐解微生物群落演变研究中取得进展
土壤中的微生物驱动了植物残体的分解过程，其活性同时受气候条件和土壤条件的影响。然而，目前还无法全面了解气候和土壤条件的相对重要性。这主要是因为传统的研究方法，如控制条件下的培育试验以及不同环境下的土壤调查，在区分气候和土壤条件的相对作用方面能力十分有限。 中国科学院南京土壤研究所孙波课题组
str测序原理
微卫星DNA又称短串联重复序列(short tandem repeats， STR) 、简单重复序列(simple sequence repeat， SSR)，指DNA基因组中小于10个核苷酸的简单重复序列，广泛存在于真核基因组中，多数以2～6个碱基为核心单位、串联重复排列的序列。 1974年，S
微卫星技术(micro－satellite，－MS)
微卫星DNA又称短串联重复序列(short tandem repeats， STR) 、简单重复序列(simple sequence repeat， SSR)，指DNA基因组中小于10个核苷酸的简单重复序列，广泛存在于真核基因组中，多数以2～6个碱基为核心单位、串联重复排列的序列。 1974年，S
转座子标签法（transposon－tagging）克隆基因的改进
1 转座子及转座子标签法克隆基因基因标签法克隆植物组织中的基因是较为常用的一种方法，T-DNA和转座子均可作为基因标签。转座子最早由美国的细胞遗传学家Mc- clintock在玉米中发现，它是指基因组中一段特定DNA片段，能在转位酶的作用下从基因组的一个位点转移到另一个位点。转座子不仅能在本基因