31项与免疫学有关的分子生物学实验技术（二）
十二、大肠杆菌感受态细胞（E.coli DH5α）制备E.coli DH5α制备主要操作步骤：1）挑取受体菌（DH5或DH10B）的单菌落于LB培养基中37℃摇床培养过夜（约16小时）；2）取1ml过夜培养物转接于100ml LB培养基中，在37℃摇床上剧烈振荡培养约2.5-3小时（250-300rpm）；3）将0.1M CaCl2溶液置于冰上预冷；以下步骤需在超净工作台和冰上操作；4）吸取1.5ml培养好的菌液至1.5ml离心管中，在冰上冷却10分钟；5）4℃下3000 g冷冻离心5分钟；6）弃去上清，加入100μL预冷0.1M CaCl2溶液，用移液枪轻轻上下吸动打匀，使细胞重新悬浮，在冰放置20分钟；7）4℃下3000g冷冻离心5分钟；8）弃去上清，加入100μL预冷0.1M CaCl2溶液，用移液枪轻轻上下吸动打匀，使细胞重新悬浮；9 ）细胞悬浮液可立即用于转化实验或添加冷冻保护剂（15%-20%......阅读全文
31项与免疫学有关的分子生物学实验技术（二）
十二、大肠杆菌感受态细胞（E.coli DH5α）制备E.coli DH5α制备主要操作步骤：1）挑取受体菌（DH5或DH10B）的单菌落于LB培养基中37℃摇床培养过夜（约16小时）；2）取1ml过夜培养物转接于100ml LB培养基中，在37℃摇床上剧烈振荡培养约2.5-3小时（250-30
31项与免疫学有关的分子生物学实验技术（一）
现代分子生物学和免疫学的进展加深了我们对许多疾病的了解，并且导至了免疫新策略的产生，免疫学检测方法可分为体液免疫和细胞免疫测定。本文盘点了与免疫学有关的分子生物学实验技术汇总。一、GST pull-down实验GST是指谷胱甘肽巯基转移酶，GST pull-down实验是一个行之有效的验证酵母双杂交
盘点：31项与免疫学有关的分子生物学实验技术
现代分子生物学和免疫学的进展加深了我们对许多疾病的了解，并且导致了免疫新策略的产生，免疫学检测方法可分为体液免疫和细胞免疫测定。本文盘点了与免疫学有关的分子生物学实验技术汇总。 一、GST pull-down实验 GST是指谷胱甘肽巯基转移酶，GST pull-down实验是一个行之有效的验
分子生物学实验诊断技术（二）
（三）Northern blot用于RNA分析，电泳条件与转膜方法与Southern blot不同外，RNA不必变性与中和，电泳时加电醛防止RNA发夹结构形成。其它步骤相同。为了防止RNase水解需分析的mRNA，尽可能将器皿在160-180℃干热灭菌8小时以上，也可加0.1％焦碳酸二乙酯（DEPC
分子生物学实验小技术（二）
1 、 各供应商送货时往往会提供冰袋，在室温下将化冻的大冰袋平整的一面整齐地插入1.5ml 或0.5ml 、0.2ml 的废弃离心管；或将几个化冻后的小冰袋填料塞入一个小泡沫盒中压实，再插入各种大小的试管，放在-20 摄氏度下冻24小时后取出，拔出插入的废管（可加点热水以助拔管）即可做成一个
分子生物学常用实验技术（二）
第三节操作步骤 一、细菌的培养和收集 将含有质粒pBS 的DH5α菌种接种在LB 固体培养基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培养12-24 小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5ml LB 液体培养基(含50μg/ml Amp)中,37℃振荡培养约12 小时至对数生长后期。 二、质粒D
免疫学技术专题：组织病理实验（二）
（7）切成的蜡带到20~30 cm 长时，右手用另一支毛笔轻轻将蜡带挑起，以免卷曲，并牵引成带，平放在蜡带盒上，靠刀面的一面较光滑，朝下，较皱的一面朝上。（8）用单面刀片切取蜡片一小段，放在载玻上加水一滴，置于放大镜或显微镜下观察切片是否良好。（9）切片工作结束后，应将切片刀取下用氯仿擦去刀上沾着的
分子生物学实验室的常规仪器设备及有关操作（二）
（六）超净工作台：内有紫外灯、照明灯、还应有酒精灯火焰、75%乙醇等灭菌的设备，是一种提供局部洁净度的设备。其原理是鼓风机驱动空气，经过低、中效的过滤器后，通过工作台面，使实验操作区域成为无菌的环境。超净台按气流方向的不同大致有几种类型： ①侧流式：净化后气流，从左侧或右侧通过工作台面，流向对
常用的分子生物学基本技术（二）
载体 所谓载体是指携带靶DNA片段进入宿主细胞进行扩增和表达的工具。细菌质粒 是一种细菌染色体外小型双链环状结构的DNA，分子大小为1-20kb，对细菌的某些代谢活动和抗药性表型具有一定的作用。质粒载体是在天然质粒的基础上人工改造拼接而成。最常用的质粒是pBR322。噬菌体（phaeg） 噬菌体是感
常用的分子生物学基本技术（二）
PCR-SSCP法 PCR-SSCP法是在非这性聚丙烯酰胺凝胶上，短的单链DNA和RNA分子依其大街基序列不同而形成不同构象，一个碱基的改变将影响其构象而导致其在凝胶上的移动速度改变。其基本原理为单链DNA在中性条件下会形成二级结构，这种二级结构依赖于其碱基组成，即使一个碱基的不同，也会形成不同的二
分子生物学实验小技术
当找到可能的重组质粒且条带清晰时可直接切下含DNA 的凝胶条带，用胶回收DNA 的方法回收质粒并进行酶切鉴定，如果DNA 量太少则需重提质粒。 用QIAprep Miniprep Spin 小量提质粒注意以下事项可提高得率A．用含抗生素的培养基培养细菌会有较高的得率。B．收菌时用tips吸干净残余的
分子生物学实验诊断技术
一、酸杂交技术检验方法建立的基本要素是特异性和灵敏度，在复杂的物体中，使无法感觉的特定物质进入人类的观察范围。核酸杂交检测技术就是利用核酸碱基严格配对的特异性，核酸标记物的灵敏度而建立的检测核酸结构与功能的方法。该法建立以来已有二十年，目前研究实验室用得多，临床实验室用得较少，除成本高外，关键是操作
分子生物学实验诊断技术
一、酸杂交技术检验方法建立的基本要素是特异性和灵敏度，在复杂的物体中，使无法感觉的特定物质进入人类的观察范围。核酸杂交检测技术就是利用核酸碱基严格配对的特异性，核酸标记物的灵敏度而建立的检测核酸结构与功能的方法。该法建立以来已有二十年，目前研究实验室用得多，临床实验室用得较少，除成本高外，关键是操作
免疫学实验二硝基氯苯（DNCB）介绍
二硝基氯苯（DNCB）介绍： 二硝基氯苯（DNCB）是一种化学制剂，属半抗原，能与上皮蛋白的可溶部分共价结合成为完全抗原。 DNCB是淡黄色结晶粒末，可溶于丙酮。用0.1 毫升（含1-2mgDNCB）滴于2cm直径的圆环内上臂内侧皮肤表面，使之均匀涂布，待丙酮挥发后取下圆环。14天后再将0.1
免疫学实验二硝基氯苯试验介绍
二硝基氯苯试验介绍： 二硝基氯苯试验主要用于干燥综合征、咽部麻风、麻风病等病的辅助诊断方法。 二硝基氯苯试验正常值： 正常为阳性。试验后24-72小时，可出现水肿性红斑、丘疹或水疱。 二硝基氯苯试验临床意义： 异常结果：(1)升高：①OT、PPD：结核病时强阳性为多
生物化学与分子生物学最常用的实验技术
分子细胞生物学研究所用的实验技术有哪些分子诊断学的研究范畴包括：利用遗传学、病理学、免疫学、生物化学、基因组学、蛋白质组学和分子生物学的理论和方法探讨疾病发生和发展的分子机制。为整个疾病过程寻求特异的分子诊断指标，以及利用分子生物学技术为这些分子诊断指标建立临床实用的检测方法。细胞培养技术指的是细胞
免疫学实验免疫浊度技术介绍
免疫浊度技术介绍： 免疫浊度技术早期主要用于血清、尿和脑脊液中蛋白质含量的测定。免疫浊度技术是利用可溶性抗原、抗体在液相中特异结合，形成一定大小的抗原抗体复合物，使反应液出现浊度。当反应液中保持抗体过剩时，形成的复合物随抗原量增加而增加，反应液的浊度亦随之增加，与一系列的标准品对照，即可计算出
常用分子生物学和细胞生物学实验技术介绍（二）
核酸原位杂交用特定标记的已知顺序核酸作为探针与细胞级或组织切片中核酸进行复性杂交并对其实行检测的方法，称为核酸原位杂交（nucleic acid hybridization in situ）。用来检测DNA在细胞核或染色休上的分布，与细胞内RNA进行杂交以研究该组织细胞中特定基因表达水闰；还
分子生物学常用实验技术（十七）
第二节T7 DN A 聚合酶测序技术一、概述 T7 DNA 聚合酶最初具有5'→3'聚合酶活性以及单链和双链3'→5'外切酶活性。当T7 DNA 聚合酶用适当方法处理后，可使3'→5'外切酶活力明显下降。改造后的T7 DNA 聚合酶又称T7
分子生物学常用实验技术（十五）
第十章测序技术 在分子生物学研究中，DNA 的序列分析是进一步研究和改造目的基因的基础。目前用于测序的技术主要有Sanger 等（1977）发明的双脱氧链末端终止法和Maxam 和Gilbert（1977）发明的化学降解法。这二种方法在原理上差异很大，但都是根据核苷酸在某一固定的点开始，随
分子生物学常用实验技术（七）
（四） 电泳分析 通常合成的cDNA 第一链和第二链长度为350-6000 碱基,需进行1.4%碱性琼脂糖电泳。将第一链和第二链掺入测定管中的反应液先用酚抽提,乙醇沉淀，方法见本章（二）第二链合成中的9-12 步，一般第一链和第二链上样量相同。1. 标准分子量DNA 参照物的同位素标记(1) 通常
分子生物学常用实验技术（三）
第二章DNA 酶切及凝胶电泳第一节概述一. DNA 的限制性内切酶酶切分析 限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA 序列之内或其附近的特异位点上,并切割双链DNA。它可分为三类:Ⅰ类和Ⅲ类酶在同一蛋白质分子中兼有切割和修饰(甲基化)作用且依赖于ATP 的存在。Ⅰ类酶结
分子生物学常用实验技术（十三）
2. 从RNA 合成单链cDNA 探针cDNA 单链探针主要用来分离cDNA 文库中相应的基因。用RNA为模板合成cDNA 探针所用的引物有两种: (1)用寡聚dT 为引物合成cDNA 探针。本方法只能用于带Poly(A)的mRNA,并且产生的探针极大多数偏向于mRNA 3'末端序列
分子生物学实验诊断技术（一）
一、核酸杂交技术 检验方法建立的基本要素是特异性和灵敏度，在复杂的物体中，使无法感觉的特定物质进入人类的观察范围。核酸杂交检测技术就是利用核酸碱基严格配对的特异性，核酸标记物的灵敏度而建立的检测核酸结构与功能的方法。该法建立以来已有二十年，目前研究实验室用得多，临床实验室用得较少，除成
分子生物学常用实验技术（一）
第一章质粒DNA 的分离、纯化和鉴定第二章DNA 酶切及凝胶电泳第三章大肠杆菌感受态细胞的制备和转化第四章RNA 的提取和cDNA 合成第五章重组质粒的连接、转化及筛选第六章基因组DNA 的提取第七章RFLP 和RAPD 技术第八章聚合酶链式反应(PCR)扩增和扩增产物克隆第九章分子杂交技术第十章测
分子生物学常用实验技术（四）
第三章大肠杆菌感受态细胞的制备和转化第一节概述 在自然条件下,很多质粒都可通过细菌接合作用转移到新的宿主内,但在人工构建的质粒载体中,一般缺乏此种转移所必需的mob 基因,因此不能自行完成从一个细胞到另一个细胞的接合转移。如需将质粒载体转移进受体细菌，需诱导受体细菌产生一种短暂的感受态以摄取外
分子生物学常用实验技术（九）
第三节从动物组织提取基因组DNA一、材料 哺乳动物新鲜组织。二、设备 移液管、高速冷冻离心机、台式离心机、水浴锅。三、试剂1、分离缓冲液：10mmol/L Tris?Cl pH7.4, 10mmol/L NaCl, 25mmol/L EDTA。2、其它试剂：10% SDS，蛋白酶K (20mg/
分子生物学常用实验技术（十四）
三、菌落原位杂交 对分散在若干个琼脂平板上的少数菌落（100-200）进行克隆筛选时，可采用本方法。将这些菌落归并到一个琼脂主平板以及已置于第二个琼脂平板表面的一张硝酸纤维素滤膜上。经培养一段时间后，对菌落进行原位裂解。主平板应贮存于4℃直至得到筛选结果。1、材料：待检测的细菌平皿，已标记好的探针
分子生物学常用实验技术（十八）
五、操作步骤：（一）、模板制备1、M13 单链模板制备：在转化入合适的大肠杆菌宿主菌且在含有指示剂如X-gal/IPTG 的培养基上铺板之后, 含有M13 重组子的细胞将表现出无色的"噬菌斑"，事实上受感染的细胞并非被噬菌体溶菌或杀死，出现噬菌斑是因为被感染的细菌在生长速度上比其周围未感染的
分子生物学常用实验技术（十二）
第九章分子杂交技术 互补的核苷酸序列通过Walson-Crick 碱基配对形成稳定的杂合双链分子DNA 分子的过程称为杂交。杂交过程是高度特异性的,可以根据所使用的探针已知序列进行特异性的靶序列检测。杂交的双方是所使用探针和要检测的核酸。该检测对象可以是克隆化的基因组DNA,也可以是细胞总D