毛细管电色谱仪分析技术(二)
②电动填充法:电动填充是利用电泳原理,使固定相在一定pH下带电荷,在电场中定向移动而把固定相填充到毛细管中。与高压匀浆填充法相比,电动填充法可有选择地把荷质比相同的固定相填入毛细管中,柱床均匀。③超临界CO2法:超临界CO2法是在毛细管柱一端制作临时柱塞后,另一端与贮液罐相连,将预填充的填料放入贮液罐中,然后利用超临界CO2将填料填入毛细管中,再缓慢释放压力至常压而得到干的色谱柱。柱使用前用流动相润洗,平衡。(2)特点:1)优点:①柱效高。②固定相资源丰富。2)缺点:①存在柱塞制备和柱填充,步骤繁琐。②重现性差。(3)气泡问题:填充毛细管柱CEC操作的困难是分离过程中常伴有气泡产生。气泡一般产生在柱塞与固定相交界处和柱塞与检测窗口交界处。为了控制气泡产生,目前主要采取以下措施:1)在柱两端同时施加低压,可较好的解决气泡问题。2)制备渗透性好的柱塞。3)在分流阀处接一阻尼管,当电极处有气泡产生时,气泡会经分流阀通过阻尼管排出。4)......阅读全文
毛细管电泳色谱仪分离分析模式
毛细管电泳色谱仪(CE)是以毛细管为分离通道,以高压直流电场为驱动力,利用荷电粒子之间的淌度差异和分配系数差异进行分离,是分析科学继液相色谱仪之后的又一重大进展,使分析科学从微升级进入到了纳升级水平,正成为生物样品zui重要的分离分析手段。CE分离分析模式有毛细管电色谱、毛细管区带电泳、毛细管胶束电
色谱仪毛细管柱内表面的改性(二)
二、毛细管柱内表面的羟基化:在毛细管柱内表面去活处理前,无论是普通玻璃柱还是石英玻璃柱都要经过酸处理,目的是使毛细管柱内表面增加硅醇基,在下一步的去活化中降低或消除玻璃种类的影响,从而制备出重现性好的毛细管柱。1、普通玻璃毛细管柱的沥取:普通玻璃毛细管柱的沥取是用酸或碱把柱内表面的金属离子除去,使玻
毛细管等电聚焦的概念
中文名称毛细管等电聚焦英文名称capillary isoelectric focusing;CIEF定 义在毛细管内进行的等电聚焦。毛细管内壁经涂层处理使电渗流减到最小,再将样品和两性电解质混合进样,两个电极槽中分别为酸和碱,加高电压后,在毛细管内产生pH梯度,样品的各成分在毛细管中迁移至各自的等
毛细管电泳色谱仪扩散进样技术
毛细管电泳色谱仪扩散进样是利用浓度差扩散原理,当将毛细管浸入样品溶液时,样品分子因在毛细管管口界面存在浓度差而向管内扩散。一、进样质量:扩散进样时,在时间t内,进入毛细管的样品质量Q为:Q = 400CS(2Dt)1/2式中:D为样品分子的扩散系数,C为样品浓度。扩散进样动力是不可控制参数,进样量
毛细管气相色谱仪的技术优势
毛细管气相色谱仪的气密性检查非常重要,无论是刚开始安装亦或者后期维护,这都是必须可少的工作,只要保证气路不漏气才能保证气相色谱仪稳定工作,保证气相色谱仪的灵敏度。 毛细管气相色谱仪分流/不分流进样口是常用的进样口,它既可用作分流进样,也可用作不分流进样口如图是典型的分流/不分流进样器原理图。从
毛细管电泳色谱仪电动进样技术
毛细管电泳色谱仪电动进样是当在毛细管的进样端浸入样品溶液并加上电场E时,组分因电泳和电渗作用而进入毛细管内。由于毛细管内径很小,对进样技术要求很高,进样区带宽度约是毛细管柱长的1%~2%,不能引入显著的区带扩张,以确保系统的;样品量必须<100nL,否则易造成过载。一、进样方法:毛细管洗净后,用微量
毛细管电泳色谱仪压力进样技术
毛细管电泳色谱仪压力进样要求毛细管内的填充介质具有流动性,当毛细管两端置于不同的压力环境中时,管内溶液流动,将样品引入。一、进样动力:进样动力有进样端加压(正压)、出口端抽真空(负压)和虹吸(重力)。1、进样端加压:采用压缩空气(钢瓶气)可实现正压进样,并可与毛细管清洗系统共用。多采用。2、出口端抽
毛细管电泳仪故障分析二
电泳峰拖尾1、可能原因:毛细管窗口未开或窗口位置不正。解决方案:打开毛细管检测窗口或调整窗口位置。2、可能原因:样品在毛细管内壁吸附。解决方案:对于蛋白质和核酸样品,应尽量采用涂层毛细管、极端pH 条件或动态涂层,防止样品吸附。
等电聚焦电泳色谱仪分离技术介绍(一)
等电聚焦电泳色谱仪是利用蛋白质分子或其它两性分子的等电点不同,在一个稳定、连续和线性的pH梯度中进行分离。按pH梯度的形成原理不同可分为载体两性电解质pH梯度等电聚焦电泳和固相pH梯度等电聚焦电泳。一、载体两性电解质pH梯度等电聚焦电泳:1、理想的载体两性电解质应具备的条件:载体两性电解质是两性分子
新型PCR分析方法毛细管PCR技术
新型PCR分析方法毛细管PCR技术 常规PCR反应采用导热性较差的塑料管作为反应容器,对于100~1样品,样品温度要比槽板温度滞后2030s,加上槽板升降温度较慢(1C/s),因此30个循环反应通常需要2~6h,循环时间多浪费在常规PCR反应采用导热性较差的塑料管作为反应容器,对于100~1样品,样
新型PCR分析方法毛细管PCR技术
常规PCR反应采用导热性较差的塑料管作为反应容器,对于100~1样品,样品温度要比槽板温度滞后20—30s,加上槽板升降温度较慢(1’C/s),因此30个循环反应通常需要2~6h,循环时间多浪费在加热和冷却样品过程中,不能满足临床快速诊断的需要。毛细管PCR由于采用导热性远强于塑料管的毛细管作为反应
毛细管电泳色谱仪分析的理想目标
21世纪是生命科学大发展的世纪,人类基因组计划基本完成后,后基因组时代的基因组学和蛋白组学将快速发展,功能基因和蛋白质的分离检测对毛细管电泳色谱仪(HPCE)提出更高的期望。将所有的化学反应集成在一块很小的芯片(Chip)上,建立有一个实验室功能的芯片是HPCE发展的前景。Chip是以晶体硅、石英玻
毛细管电泳色谱仪分离分析模式详解
分析模式详解。毛细管电泳色谱仪(CE)是以毛细管为分离通道,以高压直流电场为驱动力,利用荷电粒子之间的淌度差异和分配系数差异进行分离,是分析科学继液相色谱仪之后的又一重大进展,使分析科学从微升级进入到了纳升级水平,正成为生物样品zui重要的分离分析手段。CE分离分析模式有毛细管电色谱、毛细管区带电泳
电色谱仪分类
电色谱仪分类有多种。1、按分离目的可分:实验室电色谱仪和工业电色谱仪。2、按分离装置可分:毛细管电色谱仪和芯片电色谱仪等。3、按分离对象的荷电性质可分:阴离子电色谱仪、阳离子电色谱仪和中性分子电色谱仪。4、按分离对象的离子属性可分:无机离子电色谱仪和有机离子电色谱仪。5、按分离特征可分:高选择性电
台积电STTMRAM技术细节(二)
图6.Rap和Rp的电阻分布间距在计入寄生电阻时变小为了感测MTJ的电阻,必须在读取期间将其两端的电压通过晶体管N1和N2钳位到一个低值,以避免读取干扰,并对其进行微调以消除感测放大器和参考电流偏移。参考电阻是1T4R配置R?(R p + R ap)/ 2 + R1T,如图7所示。图7.具有微调能力
蛋白等电聚焦凝胶电泳技术(二)
5.电泳操作步骤:1)将蛋白样品于等体积的2×上样缓冲液混合,10000×g离心5min以除去蛋白质沉淀;2)用微量注射器将蛋白质样品加入到上样空底部,注意不要溢出来。注意:对于考马斯亮蓝染色液来说,每个泳道10-30ug的蛋白混合粗提物(我们俗称粗抗原)或者5-10ug单一蛋白组分是较合理的上样浓
蛋白等电聚焦凝胶电泳技术(二)
6.电泳聚焦后处理测定pH梯度:1)将凝胶条切成0.5cm或1cm的小片;2)将每小片凝胶在1ml 10mM KCl中 浸泡30min;3)测读此KCl溶液的pH值、凝胶的固定:1)将凝胶于10%三氯乙酸中浸泡10min;2)换成1%三氯乙酸溶液继续浸泡至少2h以上,以去除载体两性电解质,浸泡过夜可
毛细管电泳色谱仪与质谱仪的联用技术
毛细管电泳色谱仪(CE)是以毛细管为分离通道,以高压直流电场为驱动力,利用荷电粒子之间的淌度差异和分配系数差异进行分离,具有、分辨率高、重复性好、速度快和易于自动化等优点。质谱仪(MS)是通过对样品离子的质量和强度的测定进行定量和结构分析,具有灵敏度高和速度快等优点。CE与MS联用综合了两者的优点,
高效毛细管电泳色谱仪扩散进样技术
高效毛细管电泳色谱仪扩散进样是利用浓度差扩散原理,当将毛细管浸入样品溶液时,样品分子因在毛细管管口界面存在浓度差而向管内扩散。一、进样质量: 扩散进样时,在时间t内,进入毛细管的样品质量Q为: Q = 400CS(2Dt)1/2 式中:D为样品分子的扩散系数
毛细管电色谱的应用及发展
毛细管电色谱是在毛细管中填充或在管壁涂布、键合液相色谱的固定相,然后在毛细管的两端施加高压直流电,在电场作用下产生电渗流,流动相在电渗流的驱动下通过色谱柱。对中性化合物,其分离过程和HPLC类似,即通过溶质在固定相和流动相之间的分配差异而获得分离;当被分析的物质在流动相中带电荷时,除了和中性化合物一
毛细管电色谱的应用及发展
毛细管电色谱的应用及发展毛细管电色谱(Capillary electrochromatography, 简称 CEC)是在毛细管中填充或在管壁涂布、键合液相色谱的固定相,然后在毛细管的两端施加高压直流电,在电场作用下产生电渗流(Electroosmotic flow ,简称EOF),流动相在电渗流的
凝胶色谱仪分析技术
凝胶色谱仪分析中不具有分配、吸附和离子交换作用,是基于样品分子尺寸和形状不同实现分离的。一、工作原理:小分子可以扩散到凝胶空隙中通过,出峰最慢。中等分子只能通过部分凝胶空隙,中速通过。大分子被排斥在外,出峰最快。二、固定相:1、半刚性凝胶:为高交联度的聚苯乙烯,孔径范围较宽。常以有机溶剂作流动相。2
毛细管电泳色谱仪毛细管概述
毛细管电泳色谱仪毛细管是电泳分离的关键。一、尺寸:毛细管尺寸的选择与分离模式和样品有关。自由溶液电泳多选用50或75μm内径的毛细管,分离的有效长度常为40~100cm之间。如进行大颗粒如红细胞分离,则需要内径大于300mμm的毛细管。CGE和CEC的有效长度一般控制在20cm左右。二、涂层:毛细管
毛细管电泳色谱仪毛细管简介
毛细管电泳色谱仪分离的关键部件是毛细管。一、毛细管材质:理想的毛细管必须是电绝缘、紫外可见光透明和富有弹性。目前使用的有塑料毛细管、玻璃毛细管和石英毛细管等,其中使用最多的是石英毛细管。熔融石英拉制的毛细管脆而易断,外涂聚酰亚胺后会变得很有弹性。二、毛细管检测窗口制作:毛细管的聚酰亚胺涂层不透明,检
毛细管色谱仪分类
毛细管色谱仪分类有多种。1、按分离目的可分:化验室毛细管色谱仪和工业毛细管色谱仪。2、按流动相物理状态可分:毛细管气相色谱仪和毛细管液相色谱仪。3、按功能可分:分析型毛细管色谱仪和制备型毛细管色谱仪。4、按分离原理可分:毛细管吸附色谱仪和毛细管分配色谱仪。5、按用途可分:毛细管生物色谱仪、毛细管制药
气相毛细管柱色谱仪进样系统概述(二)
5、操作参数:气相毛细管柱分析以分流进样作为进样方式,主要是由于它的简易性而不是它的可靠性,因此,在常规分析时被广泛应用。实验表明,对于挥发性或极性相近和沸点低于正二十烷沸点的样品,通过主要操作参数的优化选择,可得到比较满意的定量精度。(1)气化温度:气化温度一般选择在接近或等于zui高沸点组分的温
气相毛细管柱色谱仪分流进样系统(二)
二、特点:1、优点:(1)可用于浓缩样品。(2)样品不需要溶剂稀释,不存在溶剂的有害影响。(3)可注入较大体积的样品。(4)不会引起色谱柱超载,能有效防止柱污染。(5)分流比调节容易,进样量可大可小。(6)色谱峰窄而尖锐。(7)分析结果重现性好。(8)结构和操作简单,有利于自动化。2、缺点:(1)不
毛细管电泳色谱仪分析的关键问题
毛细管电泳色谱仪(CE)是以毛细管为分离通道,以高压直流电场为驱动力,利用荷电粒子之间的淌度差异和分配系数差异进行分离,是分析科学继液相色谱仪之后的又一重大进展,使分析科学从微升级进入到了纳升级水平,不仅使单细胞乃至单分子分析成为可能,也使蛋白质和核酸等生物大分子分析有了新的转机。由于CE溶质区带
毛细管电泳色谱仪分析中的电泳现象
毛细管电泳色谱仪(CE)是以毛细管为分离通道,以高压直流电场为驱动力,利用带电粒子之间的电泳淌度差异和分配系数差异进行分离,是分析科学继液相色谱仪之后的又一重大进展,使分析科学从微升级进入到了纳升级水平。一、电泳:电泳是指带电粒子在电场的作用下,向着与其电性相反的电极方向移动的现象。二、电泳技术:电
毛细管电泳色谱仪分析中的电渗现象
毛细管电泳色谱仪(CE)是以毛细管为分离通道,以电渗流为驱动力,利用带电粒子之间的淌度差异和分配系数差异进行分离,电渗流在CE中起着极其重要的作用。一、电渗:电渗是指在电场作用下,毛细管中液体沿毛细管内表面或或固相多孔物质内液体沿固体表面移动的现象。毛细管一般采用石英管,管内表面为硅胶,当内充缓冲液