高效液相色谱仪色谱柱的填充物如何添进去?
1.所有材料均达到规定温度。2.用所需的溶液冲洗柱底部以除去气泡,并确保柱网下没有气泡关闭色谱柱出口,并将1-2cm的缓冲液留在柱管中。3.温和重悬填充物。4.估计需要的悬浊液(重悬的填充物)总量。5.向塔中加入所需体积的混合物,并用玻璃棒排干,以免产生气泡。6.立即用该栏填充缓冲区。7.安装立柱顶部并将立柱连接至泵。8.打开柱口,设定泵的流量。如果混合物的体积大于柱的体积,则应连接一个额外的玻璃柱以供储存。这样使得混合物在填充时的直径维持恒定,从而减少紊流并提高柱子的填充状态。9.在达到柱床高度后,保持填料流量至少为柱体积的3倍,并在柱上标记柱床的高度。10.关闭泵和塔出口,取下上盖,向塔内注入缓冲液,使其向上凸起。11.将接头以一定角度插入到柱中以确保网下无气泡。12.沿立柱向下滑动接头(打开接头出口),直到达到标记的位置,并且接头已锁定并填满。......阅读全文
高效液相色谱仪、流动相、色谱柱、检测器、泵的保养维护
液相色谱仪是利用混合物在液-固或互不相溶的两种液体之间分配比的差异,对混合物进行分离和分析鉴定的仪器,应用极其广泛。流动相流动相:保持贮液瓶清洁,对专用贮液瓶应定期清洁;定期(如半个月)在稀硝酸溶液中超声、清洁过滤器,清洁后用纯水清洗到中性,保持过滤器畅通。使用的流动相应为HPLC级或同等级,在配置
液相色谱仪色谱柱的分类
色谱柱是液相色谱分离系统的核心,是不同样品分离的基础,也是主要的消耗品。一般来说,高效液相色谱仪分析是根据样品的性质来确定使用哪种高效液相色谱仪方法,然后选择不同类型的色谱柱,即不同类型的色谱柱代表不同的色谱方法。不同类型的液相色谱柱与柱结构和柱填充柱尺寸的差异是不同的。色谱柱有不同的尺寸,包括制备
液相色谱仪色谱柱的再生
液相色谱仪色谱柱长期使用后柱效会下降(色谱柱的理论塔板数减小),可对色谱柱进行再生。一、建议用来冲洗色谱柱的溶剂体积:1、Ф4×125mm色谱柱:柱体积为1.6mL,所用溶剂体积为30mL。2、Ф4×250mm色谱柱:柱体积为3.2mL,所用溶剂体积为60mL。3、Ф10×250mm色谱柱:柱体积为
液相色谱仪—色谱柱的安装
a、拆开柱包装盒,确认色谱柱的类型、尺寸、出厂日期以及柱内贮存的溶剂。 b、拧下柱两端接头的密封堵头放回包装盒供备用。 c、 按柱管上标示的流动相流向,将色谱柱的入口端通过连接管与进样阀出口相连接(如条件允许,建议在柱前使用保护柱);柱的出口与检测器连接。连接管是外径为1.57mm、内径为0
液相色谱仪色谱柱的保养
正常情况下,液相色谱仪色谱柱至少可以使用3~6个月,能完成数百次分离。但若操作不慎,将很容易损坏色谱柱而不能使用。因此为了保持柱效、柱容量和渗透性,必须对色谱柱进行仔细保养。一、色谱柱的保护:1、流动相和样液都需用0.45um孔径的滤膜过滤。2、加3~5cm保护柱。3、进样阀进样。4、用纯甲醇保存色
液相色谱仪的色谱柱简介
色谱柱是液相色谱仪的核心部件,由柱管和固定相等组成。一、柱管材质:柱管材料有玻璃、不锈钢、铝、铜和内衬光滑聚合材料的其它金属。玻璃管耐压有限,金属管使用较多。二、色谱柱描述方式:如ODS(Φ4.6×150mm,5um)。三、色谱柱规格:色谱内径为4~5mm,柱长为50~300mm,凝胶色谱柱内径为3
高效液相色谱仪的色谱介绍
(high performance liquid chromatography,HPLC)也叫高压液相色谱(high pressure liquid chromatography)、高速液相色谱(high speed liquid chromatography)、高分离度液相色谱(high re
高效液相色谱仪色谱特点
高压——压力可达150~300 kg/cm2。色谱柱每米降压为75 kg/cm2以上。 高速——流速为0.1~10.0 mL/min。 高效——塔板数可达5000/米。在一根柱中同时分离成份可达100种。 高灵敏度——紫外检测器灵敏度可达0.01ng。同时消耗样品少。 HPLC与经典液相
高效液相色谱仪HPLC泵故障如何处理?
下面列出预防泵故障的几项措施: (1)用高质量试剂和HPLC级溶剂; (2)过滤流动相和溶剂; (3)脱气; (4)每天开始使用时放空排气,工作结束后从泵中洗去缓冲液; (5)不让水或腐蚀性溶剂滞留泵中; (6)定期更换垫圈; (7)需要时加润滑油; (8)查阅有关泵操作手册中的其它
高效液相色谱仪分离机制不同,如何划分?
根据分离机制的不同,HPLC原理可分为液固吸附色谱法、液液分配色谱法(正相与反相)、离子交换色谱法及分子排阻色谱法。1. 液固吸附色谱法液固吸附色谱法中,固定相为固体吸附剂,根据各组分吸附能力差异而使组分得以分离。常用的吸附剂为硅胶或氧化铝,大多数用于非离子型化合物。吸附色谱固定相可以分为极性和非极
高效液相色谱仪出现故障了,如何快速处理?
气泡溢出在活动阶段存在气泡,关闭泵,打开减压阀,打开清洗键,清洗除气,气泡不断从过滤器中流出,进入活动阶段,无论我们打开多少次吹扫键,都无法消除连续的气泡。原因是过滤器长期浸泡在醋酸铵缓冲液中。由于模具的生长和增殖,过滤器被堵塞,缓冲器难以顺利通过过滤器。在泵的压力下,空气通过过滤器进入活性阶段。将
液相色谱仪的色谱柱的安装
a、拆开柱包装盒,确认色谱柱的类型、尺寸、出厂日期以及柱内贮存的溶剂。 b、拧下柱两端接头的密封堵头放回包装盒供备用。 c、 按柱管上标示的流动相流向,将色谱柱的入口端通过连接管与进样阀出口相连接(如条件允许,建议在柱前使用保护柱);柱的出口与检测器连接。连接管是外径为1.57mm、内径为0
高效液相色谱柱
一、怎样选择色谱柱现代高效液相色谱中,分离效果好坏很大程度上取决于色谱填料的选择。但是色谱填料的选择范围很宽,要做合适的选择,必须对此有一定的认识和了解。(1)硅胶基质填料:1、正相色谱正相色谱用的固定相通常为硅胶(Silica),以及其他具有极性官能团,如胺基团(NH2,APS)和氰基团(CN,C
高效离子色谱柱研究
离子色谱(IC)发展已经有四分一个世纪,作为一种独立的色谱分枝,并在许多领域得到广泛应用。 但离子色谱(IC)与其相似的色谱高效液相色谱(HPLC)相比,柱效要低很多(约为HPLC的1/3),而价格则要高很多(约HPLC的3到5倍)。 提高离子色谱的柱效,是离子色谱研究急需解决的问题,也将是推动离子
高效液相色谱柱
一、怎样选择色谱柱 现代高效液相色谱中,分离效果好坏很大程度上取决于色谱填料的选择。但是色谱填料的选择范围很宽,要做合适的选择,必须对此有一定的认识和了解。 (1)硅胶基质填料: 1、正相色谱 正相色谱用的固定相通常为硅胶(Silica),以及其他具有极性官能团,如胺基团(NH2,APS)和氰基团(
液相色谱仪色谱柱柱压升高的可能原因
液相色谱仪色谱柱柱压升高的可能原因有色谱柱筛板堵塞、非特异性吸附、样品沉淀、盐晶体析出和更换流动相时置换不彻底等。一、色谱柱筛板堵塞:色谱柱筛板堵塞往往是由于流动相没有过滤或虽已过滤但滤膜孔径过大或滤片损坏,使固体杂质滞留在筛板上造成的。可采用反冲的方法除去堵塞物。类似的堵塞也会发生在排气阀过滤芯、
高效液相色谱仪的色谱柱堵了谱图会是什么样子
色谱柱堵塞的话会造成峰宽展。其实色谱柱被堵塞的最典型标志是柱压升高。
高效液相色谱仪色谱柱浓度大就会出肩锋怎么办?
如果这样还是出现肩峰,这个原因可能是:1、本来就是两个未分开的物质,峰相聚较近;2、色谱柱柱床结构发生改变;3、色谱柱c18臂发生改变,造成柱效下降,引起分离效果的改变;4、色谱条件选择有待优化,流动相洗脱组分应予以调整后观察实验结果是否有改进。
液相色谱仪的柱温
柱温是液相色谱仪的重要参数,控制柱温可提高保留时间的重现性。一般情况下,较高柱温能增加样品在流动相中的溶解度,缩短分析时间。升高柱温能增加柱效,提高分离效率。通常柱温升高6℃,组分保留时间减少约30%。分析高分子化合物或粘度大的样品时,柱温必须高于室温。分析具有生物活性的生物分子时,柱温应低于室温
高效色谱仪的色谱柱简介
色谱柱是高效色谱仪的分离系统,是高效色谱仪的核心部件之一。一、柱形状:1、填充柱:有U型和螺旋型,一般内径为2~4mm,长度为1~3m。2、毛细管柱:呈螺旋型,一般内径为0.2~0.5mm,长度为30~300m。二、柱材质:不锈钢管和玻璃管。三、柱固定相:1、气液色谱仪的柱固定相由载体和固定液组成。
液相色谱仪保护柱
液相色谱仪保护柱是内径为1.0mm、2.1mm、3.2mm、4.6mm或10mm、20mm、40mm,长7.5mm、10mm或20~60mm的短填充柱,通常填充和分析柱相同的填料,可看作是分析柱的缩短形式,安装在分析柱前。其作用是收集、阻断来自进样器的机械和化学杂质,以保护和延长分析柱的使用寿命。
高效液相色谱仪的特点
高压——压力可达150~300kg/cm2。色谱柱每米降压为75kg/cm2以上。高速——流速为0.1~10.0mL/min。高效——塔板数可达5000/米。在一根柱中同时分离成份可达100种。高灵敏度——紫外检测器灵敏度可达0.01ng。同时消耗样品少。HPLC与经典液相色谱相比有以下优点:速度快
高效液相色谱仪的组成
高效液相色谱仪由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。高效液相色谱仪(HPLC)是应用高效液相色谱原理,主要用于分析高沸点不易挥发的、受热不稳定的和分子量大的有机化合物的仪器设备。高效液相色谱法只要求样品能制成溶液,不受样品挥发性的限制,流动相可选择的范围宽,固定相的种类繁多,因而
高效液相色谱仪的组成
高效液相色谱仪一般都具备贮液器、高压泵、梯度洗提装置(用双泵)、进样器、色谱柱、检测器、恒温器、记录仪等主要部件。
高效液相色谱仪的应用
高效液相色谱法只要求样品能制成溶液,不受样品挥发性的限制,流动相可选择的范围宽,固定相的种类繁多,因而可以分离热不稳定和非挥发性的、离解的和非离解的以及各种分子量范围的物质。 与试样预处理技术相配合,HPLC 所达到的高分辨率和高灵敏度,使分离和同时测定性质上十分相近的物质成为可能,能够分离复
高效液相色谱仪的组成
高效液相色谱仪由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。高效液相色谱仪(HPLC)是应用高效液相色谱原理,主要用于分析高沸点不易挥发的、受热不稳定的和分子量大的有机化合物的仪器设备。高效液相色谱法只要求样品能制成溶液,不受样品挥发性的限制,流动相可选择的范围宽,固定相的种类繁多,因而
高效液相色谱仪的原理
储液器中的流动相被高压泵打入检测系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相)内,由于样本溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数,在两相中作相对运动时,经过反复多次的“吸附-解吸”的分配过程,各组分在移动速度上产生较大的差别,被分离成单个组分依次从柱内流出,通过检测器时,样本浓度被
高效液相色谱仪的结构
HPLC仪一般由溶剂输送系统、进样系统、分离系统(色谱柱)、检测系统和数据处理与记录系统组成,具体包括储液器、输液泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪或数据工作站等几部分 。其中输液泵、色谱柱和检测器是HPLC仪的关键部分。
高效液相色谱仪的原理
高效液相色谱仪的原理: 分配系数与组分、流动相和固定相的热力学性质有关,也与温度、压力有关。在不同的色谱分离机制中,K有不同的概念:吸附色谱法为吸附系数,离子交换色谱法为选择性系数(或称交换系数),凝胶色谱法为渗透参数。但一般情况可用分配系数来表示。 在条件(流动相、固定相、温度和压
高效液相色谱仪的原理
储液器中的流动相被高压泵打入检测系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相)内,由于样本溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数,在两相中作相对运动时,经过反复多次的“吸附-解吸”的分配过程,各组分在移动速度上产生较大的差别,被分离成单个组分依次从柱内流出,通过检测器时,样本浓度被