液相色谱使用流动相时需要注意哪些问题
1.色谱柱中的流动相是否会会排干的问题： 不少做色谱分离试验的人遇到过这样的情形：不慎未及时补充流动相泵将溶剂瓶中的流动相吸干了HPLC系统由此而停止工作了这会损坏色谱柱吗?泵是否排出了塔中的所有流动相？色谱柱还能用吗事实上，如果泵吸收了溶剂瓶中的流动相，就不会对色谱柱造成损坏,即使泵内充满空气，泵也不会将空气排入塔中,因为泵只能输送液体，不能输送空气。 2.色谱柱变干的问题： 另一种更可能的情况是忘记盖上色谱柱两端的密封盖或者因为盖子太松而使色谱柱干燥同样整个柱的干燥也不容易发生，其中大部分可能在柱两端只有几毫米干燥，因为蒸发所有溶剂需要很长时间。即使色谱柱真的很干，也不一定是不能治愈的。你可以试着用完全去气的低表面张力溶剂(如被氦气分解的甲醇)冲洗色谱柱，以除去气体较低的表面张力有助于浸透填料表面；脱气......阅读全文
高效液相色谱使用步骤
高效液相色谱仪操作步骤如下：1)． 过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜.2)． 对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。3)． 打开hplc工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。4)． 进入hplc控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。5)． 有一段时间没用
高效液相色谱知识（二）
正相色谱法 采用极性固定相（如聚乙二醇、氨基与腈基键合相）；流动相为相对非极性的疏水性溶剂（烷烃类如正已烷、环已烷），常加入乙醇、异丙醇、四氢呋喃、三氯甲烷等以调节组分的保留时间。常用于分离中等极性和极性较强的化合物（如酚类、胺类、羰基类及氨基酸类等）。反相色谱法 一般用非极性固定相（如C18、C8
反相高效液相色谱2
方案2 填充 RP-HPLC 毛细管微柱试剂、试剂盒甲醇n-丙醇反相硅胶TFA 乙腈溶剂体系仪器、耗材水浴超声波仪色谱加样器层析柱玻璃料末端接口环氧树脂流动池正向光学扫描检测器加热枪加样器液相色谱柱填充泵微柱聚丙烯离心管聚硅酸盐管蓝宝石切刀信号数据收集装置硅胶隔膜Teflon接头UV检测器实验步骤一
液相色谱（HPLC）入门（二）
什么是色谱图?色谱图表示发生在高效液相色谱系统中的化学[色谱]分离。一系列从基线出现的峰以时间为坐标。每个峰代表对不同化合物的检测器反应。色谱图由计算机数据站描绘。[如图 H].Figure H: How Peaks Are Created图H中，黄色谱带完全通过了检测器流通池；产生的电信号被送到计
液相色谱柱的填装
液相色谱柱、特别是高效液相色谱柱的填装，需要有较高的技巧和熟练的技能。因此，有人甚至将“装柱”看作是“艺术加技术”。但是，只要掌握了一些基本的规律和方法，任何实验室都可以填装出具有较高柱性能的色谱柱。当然，目前大多数实验室多是购买商品预填装柱来满足分离、分析之需。但是在一些有特殊需要的情况
液相色谱保养知识介绍
1、 色谱柱长时间不用，存放时，柱内应充满溶剂，两端封死(如ACN适于反相色谱柱，正相色谱柱用相应的有机相)2、 对于手动进样器，当使用缓冲溶液时，要用水冲洗进样口，同时搬动进样阀数次，每次数毫升。3、流动相使用前必须过滤，不要使用多日存放的蒸馏水(易长菌)。4、带seal-wash的1100，
液相色谱柱的保护
液相色谱柱的保护 在液相色谱仪的使用中,保持液相色谱柱的柱效、容量和渗透特性,延长柱子的使用寿命非常重要。色谱柱用久后常出现柱压升高,柱效降低,峰形畸变, 保留时间改变等变化,如不采取适当措施,色谱柱将无法再使用,缩短色谱柱的使用寿命,本文从影响色谱柱的外界因素出发,并考虑色谱柱
液相色谱（HPLC）入门（一）
什么是液相色谱?历史概述和定义液相色谱的定义是二十世纪早期由俄罗斯植物学家 Mikhail S. 茨维特提出的。他最先尝试在装满颗粒的柱子上使用溶剂来分离从植物中提取的化合物[树叶色素]。茨维特用颗粒填满开口的玻璃柱。他发现两种特殊的材料，粉笔末(碳酸钙)和氧化铝很有用。他将样品[混匀植物叶
液相色谱操作规程
总流程：超纯水冲洗柱——流动相分离样品——超纯水冲洗柱——纯乙睛保存柱1.电源准备打开稳压器()电源开关，须待电压指示至220V后，才能开启其他有关设备。2.HP1100高效液相色谱仪的准备试剂：三氟乙酸乙腈(Fisher公司产品色谱纯)超纯水(Millipore超纯水)冰乙酸溶液配置：贮液瓶与流动
高效排阻液相色谱
高效排阻液相色谱又叫体积排阻色谱（ SEC），分子筛色谱，凝胶过滤等，生化界常用凝胶过滤。SEC是一种纯粹按照溶质分子在流动相溶剂中的体积大小分离的色谱法，填料具有一定范围的孔尺寸，大分子进不去而先流出色谱柱，小分子后流出。用于生物大分子分离的传统SEC填料主要是多糖聚合物软胶，只能在低压下作慢速分
液相色谱柱使用误区
色谱柱在色谱仪分析系统中起着分离作用，是色谱分析的核心部件。正确使用和维护色谱柱尤为重要，使用不当就会降低柱效、缩短使用寿命甚至损坏。以下从几个方面简答介绍液相色谱柱在使用过程中应当着重注意的问题。 一、避免压力和温度的急剧变化 温度的突然变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充状况
高速液相色谱方法解析
在生物工程中，作为代谢产生的物质群种在分离、精制过程中，生理物质容易失去活性，而且被分离物的分布范围甚广，如在水相溶液中时，性质相类似的蛋白质、氨基酸、核酸（DNA、NRA），抗体以及含有遗传基因结构的生物物质，用通常的化学方法很难进行分离。 80年代中期，采用高速液相色谱方法，便有效地解决了这
液相色谱负峰问题
如果用紫外检测器，负峰表明出峰的地方吸收值低于流动相，所以考虑两个方面：一是流动相吸收值大，很可能被污染了，二是质量不好的溶剂，尤其是甲醇，产生这种问题。如果做正相，要充分考虑流动相溶剂的截止波长。
变性高效液相色谱技术
变性高效液相色谱 (denaturing high performance liquid chromatography, DHPLC)是一项在单链构象多态性 (SSCP)和变性梯度凝胶电泳 (DGGE)基础上发展起来的新的杂合双链突变检测技术，可自动检测单碱基替代及小片段核苷酸的插入或缺失。DHPL
高效液相色谱的优势
高效液相色谱（High Pe-rformance Liauid Chromatography，HPLC）的主要优点是：⑴分辩率高于其它色谱法；⑵速度快，十几分钟到几十分钟可完成；⑶重复性高；⑷高效相色谱柱可反复使用；⑸自动化操作，分析精确度高。根据分离过程中溶质分子与固定相相互作用的差别，高效液相色
反相高效液相色谱1
方案1 蛋白质 RP-HPLC 的标准色谱条件实验材料蛋白质标样试剂、试剂盒乙睛（HPLC级）去离子水（HPLC级）三氟乙酸（TFA)仪器、耗材HPLC 色谱系统反相柱实验步骤1.进行空白或对照层析谱分析（即在步骤①中不加样）。一般这是进行一天层析工作的开始。下面是推荐使用的用于 RP-HPLC 系
高效液相色谱的维修
一、仪器的安装对环境的要求１、 电源电压２２０V：有条件的情况下，最好使用照明电，此电压比较稳定,对仪器的性能稳定性较好，在没有办法的时候，必须要用动力线路供电时，就要采取相应的办法克服或减少由于电机频繁启动，停止运行时对电网电压波动的影响电机是感性负载，停止和启动能产生很强的干扰尖脉冲电压。
简述液相色谱发展历史
液相色谱法开始阶段是用大直径的玻璃管柱在室温和常压下用液位差输送流动相，称为经典液相色谱法，此方法柱效低、时间长（常有几个小时）。高效液相色谱法(High performance Liquid Chromatography，HPLC)是在经典液相色谱法的基础上，于60年代后期引入了气相色谱理论而
高效排阻液相色谱
实验材料 nrhTNF 试剂、试剂盒 氯化钠 PB 仪器、耗材
液相色谱柱性能因素
液相色谱柱的性能关系很多因素，基质（matrix）或者说担体、载体的化学性质、键合相（固定液）的化学性质、填料形状大小粒度分布、碳量和键合度等。 色谱柱填料可以由基质直接构成，如硅胶、氧化铝、高交联度的苯乙烯-二乙烯苯或者甲基丙烯酸酯等；也可以在这些基质的基础上涂布或化学键合固定液来构成，如：zui
高压液相色谱淋洗剂
高压液相色谱淋洗剂高压液相色谱淋洗剂又称流动相或洗脱剂，是高压液相色谱分析中必不可少的试剂，其作用有两个，一是携带样品前进，二是给分析样品提供一个分配相，进而调节选择性，达到混合样品的分离。高压液相色谱法根据固定相的类型和分离原理可分为液固吸附色谱法、液液分配色谱法、离子交换色谱法、凝胶渗透色谱法
高效液相色谱故障排除
注意：在对NH2改性的色谱柱进行再生时，由于NH2可能成铵根离子的形式存在，因此应该在水洗后用0.1M的氨水冲洗，然后再用水冲洗至碱溶液完全流出。如果简单的有机溶剂/水的处理不能够完全洗去硅胶表面吸附的杂质，用0.05M稀硫酸冲洗非常有效。色谱柱的维护1．使用预柱保护分析柱（硅胶在极性流动相/离子性
怎样修理液相色谱柱子
液相色谱柱是液相色谱仪分离系统的“核心”。对于我们需要检测的样品物质有着不可忽视的作用。 我们在用高效液相色谱法对样品进行分析的时候，样品一般都会含有很多的各种杂质。其中样品杂质性能较弱的会快速的从色谱柱里面冲洗出来，对我们分析的结果影响比较小。但是中等的杂质虽然也会被冲洗出来，但是会有一定的干扰了
液相色谱柱怎么换
先用95%乙腈+5%水冲洗旧柱子（冲去柱子中残留的缓冲盐和之前难以洗脱的组分），关掉流速，待流速降至0后，把柱子两边的PEAK头拧下来，用配套的塞子将换下的柱子两头堵上，密封保存更换新的色谱柱时，应先将需换上的柱子两边的塞子旋开。确定好柱子标示的方向后，先接柱子入口端，并使柱子出口端略高于入口端，这
高效液相色谱怎么分析
计算含量的方法很多：面积归一化法,外标法,内标法常用的：面积归一化法那很简单,配制一个供试品,进样分析.一个色谱峰代表一个物质,最大的那个通常是你的主峰,其余的基本都是杂质.杂质（%）=杂质的峰面积/主峰峰面积*100%（这个数值在你的分析报告中应该可以看到）如果是外标法或者内标法,你需要有对照品.
液相色谱理论发展简况
色谱法的分离原理是:溶于流动相 (mobile phase)中的各组分经过固定相时，由于与固定相(stationary phase) 发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和)的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。又称为色层法、层析法。 色谱法最早是由植物学家茨维
液相色谱温度如何设定
液相分离的依据和气象不一样液相是根据物质的极性的大小分离的，而不是像气象室根据物质的沸点进行分离的，所以知道物质的沸点对于液相来说是没有用的，用液相进行分离，你要知道你的物质的极性的比较，然后要注意流动相的流速和柱压等等方面，你还要注意你的检测方法，我通常是用紫外检测的，所以要注意是不是有紫外吸收如
液相色谱柱影响因素
液相色谱柱影响因素A:物理因素1.硅胶纯度--填料硅胶的纯度与残留金属离子浓度2.色谱柱尺寸--填料床的长度和内径3.颗粒形状--球型或不规则型4. 粒径--平均颗粒直径, 通常3-10µm5.表面积--颗粒外表面和内部孔表面的总和, 以m2/gram表示6.孔径--颗粒的孔或腔的平均尺寸, 范围8
液相色谱柱使用误区
色谱柱在色谱仪分析系统中起着分离作用，是色谱分析的核心部件。正确使用和维护色谱柱尤为重要，使用不当就会降低柱效、缩短使用寿命甚至损坏。以下从几个方面简答介绍液相色谱柱在使用过程中应当着重注意的问题。 一、避免压力和温度的急剧变化 温度的突然变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充状况
液相色谱柱相关推荐
液相色谱柱相关推荐在选择色谱柱之前，先多了解自己的样品和杂质，他们的类型结构、极性、酸碱性、分子量大小等等， 1.样品是极性的且弱酸性的;就可以选择C18在100%酸性水溶液条件下检测，即要选择承受100%纯水且对极性化合物保留很好的色谱柱 2. 如果样品极性太强，或酸性太强;可以选择CN，NH2，