SSH抑制性消减杂交文库构建方法介绍
SSH是一项可以快速获取两个不同生物材料中差异表达基因的分子生物学技术,是快速筛选差异表达基因的有效方法,也是寻找新基因的重要手段。该技术尤其适合以genome尚不完全清晰的物种或者以特殊材料为研究对象的科研工作者。是基因芯片技术的有效补充。基本流程:通过差减文库构建,文库验证和筛选(逆向斑点杂交),获得阳性克隆,对阳性克隆测序及生物信息分析,可判定差异基因的情况。另外结合RACE技术可进一步克隆所获得的差异基因的cDNA全长序列,并可用Northern blot 或Real-Time PCR加以验证。抑制性消减杂交文库技术 是一种革命性的差异表达基因筛选技术。该方法结合了抑制性PCR和消减杂交技术,即御用PCR反应链内退火有限于链间退火的特点和分子杂交二级动力学原理,经过体系不断优化建立起来的快捷、有效的差异基因筛选方法。与传统的DD—PCR、SAGE及cDNA—RNA等技术相比,具有低丰度mRNA富集效率高、假阳性低、灵敏度......阅读全文
消减-cDNA-或基因组-DNA-文库的制备实验
试剂、试剂盒 缓冲液、溶液和试剂酶和酶缓冲液核酸和寡核苷酸放射性化合物酚仪器、耗材 热循环仪水浴箱琼脂糖凝胶电泳所需的试剂与设备实验步骤 第1阶段:RNA和DNA的分离一次双向消减,需要总量为2ug的基因组DNA或cDNA。大多数分离RNA和基因组DNA的方法都适用于本实验(Sambrooketal
消减-cDNA-或基因组-DNA-文库的制备实验
试剂、试剂盒 缓冲液、溶液和试剂 酶和酶缓冲液 核酸和寡核苷酸 放射性化合物 酚 仪器、耗材
31项与免疫学有关的分子生物学实验技术(二)
十二、大肠杆菌感受态细胞(E.coli DH5α)制备E.coli DH5α制备主要操作步骤:1)挑取受体菌(DH5或DH10B)的单菌落于LB培养基中37℃摇床培养过夜(约16小时);2)取1ml过夜培养物转接于100ml LB培养基中,在37℃摇床上剧烈振荡培养约2.5-3小时(250-30
盘点:31项与免疫学有关的分子生物学实验技术
现代分子生物学和免疫学的进展加深了我们对许多疾病的了解,并且导致了免疫新策略的产生,免疫学检测方法可分为体液免疫和细胞免疫测定。本文盘点了与免疫学有关的分子生物学实验技术汇总。 一、GST pull-down实验 GST是指谷胱甘肽巯基转移酶,GST pull-down实验是一个行之有效的验
辽宁生态工程职业学院公布近3000万元采购意向,包含多种分析仪器
2023年08月10日,辽宁生态工程职业学院发布《辽宁生态工程职业学院2023年政府采购意向》公告,预计花费26678300.00元,采购项目包含多种分析仪器。详细信息如下:意向公示辽宁生态工程职业学院2023年6(至)9月政府采购意向为便于供应商及时了解政府采购信息,根据《财政部关于开展政府采购意