realtime／qPCR常遇到的那些疑问
通常来讲，real-time PCR（ qPCR）的反应程序不需要像常规的 PCR 那样，要变性、退火、延伸 3 步。由于其产物长度在 80～150 bp 之间，所以只需要变性和退火就可以了。 SYBR@Green 等染料法，好在 PCR 扩增程序结束后，加一个溶解程序，来形成溶解曲线，判断 PCR 产物的特异性扩增。而溶解程序，仪器都有默认设置，或稍有不同，但都是一个在产物进行溶解时候，进行荧光信号的收集。 1、无 Ct 值出现 检测荧光信号的步骤有误：一般 SG 法采用 72℃ 延伸时采集，Taqman 法则一般在退火结束时或延伸结束采集信号。 引物或探针降解：可通过 PAGE 电泳检测其完整性。 模板量不足：对未知浓度的样品应从系列稀释样本的高浓度做起。 模板降解：避免样品制备中杂质的引入及反复冻融的情况。 2、Ct 值出现过晚（Ct>38） ......阅读全文
realtime/qPCR－常遇到的那些疑问
通常来讲，real-time PCR（ qPCR）的反应程序不需要像常规的 PCR 那样，要变性、退火、延伸 3 步。由于其产物长度在 80～150 bp 之间，所以只需要变性和退火就可以了。 SYBR@Green 等染料法，好在 PCR 扩增程序结束后，加一个溶解程序，来形成溶解曲
滴定分析中可能遇到的常见疑问及解答！
滴定分析法，作为一种简便、快速和应用广泛的定量分析方法，在常量分析中有较高的准确度，滴定分析可算是实验室中最最常用的定量方法。然而，在滴定分析中，你可能会遭遇各种疑惑，今天就来为你盘点滴定分析中常见Q&A。01如果滴定分析结果总是超出了误差范围怎么办 总的来说，对于任何滴定分析，都要首先了解什么样的
滴定分析中可能遇到的常见疑问及解答
滴定分析法，作为一种简便、快速和应用广泛的定量分析方法，在常量分析中有较高的准确度，滴定分析可算是实验室中最最常用的定量方法。然，滴定分析中，你可能会遭遇各种疑惑，今天就来为你盘点滴定分析中常见Q&A——滴定分析 1、如果滴定分析结果总是超出了误差范围怎么办 总的来说，对于任何滴定分析，都要
RTPCR、QPCR、Realtime－PCR、realtime－RTPCR你真的区分的开吗？
多少同学能将 RT-PCR、Realtime-PCR、QPCR区分开？有多少同学还在犯晕？今儿这贴，师兄就带你区分区分，拨开那扇 PCR 迷雾。什么是 RT-PCR？RT-PCR就是逆转录 PCR（reverse transcription PCR）或者称反转录PCR(reverse transcr
金属拉力试验机常遇到的问题
金属拉力试验机在塑性局限和直至规则强度（规则非比例延长强度、规则总延长强度和规则剩余延长强度）应变速度不该超越0.0025/s。”。这里面有一个很要害的问题，就是应力速度与应变速度的切换点的问题。是在弹性段完毕的点进行应力速度到应变速度的切换。在切换的进程中要包管没有冲击、没有失落力。金属拉力试验机
实时荧光定量PCR（Quantitative－Realtime－PCR－，qPCR）技术介绍
荧光定量PCR也叫Real-Time PCR，是美国PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出来的一种新的核酸定量技术。荧光定量PCR的发展史是一部ABI、罗氏和伯乐等巨头的荡气回肠的斗争史，感兴趣的可以去查查。该技术是目前最成熟，使用最广泛的半定量PCR技术。 荧光染料法（SYBR
RealTime－PCR－(qPCR)常见问题及解决方案
Real Time PCR(qPCR)，即实时荧光定量核酸扩增检测系统，是一种利用荧光染剂检测每次PCR循环后产物总量的方法技术，是常规PCR的衍生反应。主要是通过荧光信号的变化实时监测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化，通过ct值和标准曲线的关系对起始模板进行定量分析。因其具有灵敏、特异、
RTqPCR需要注意的那些事
rt-qpcr需要注意的那些事，你都了解吗？在rt-qpcr实验中不论是实验小白还是老司机，都会遇到各种不同的实验问题。解决问题不仅要浪费额外的样品和试剂，还要占用大量的时间一遍遍的重复和分析，真是被实验折磨得焦头烂额。那实验过程中应该注意哪些细节呢？小翊精心为大家总结了rt-qpcr实验的注意事项
细胞培养常遇到的问题都在这了
养细胞是一件戳心戳肺的事。你要像照顾小孩一样仔细对待，爱护她，呵护她。上篇提到细胞培养的注意事项，反响热烈，这次就来讲讲细胞培养常见问题的原因及对策。1. 培养液 pH 值变化太快原因：CO2 张力不对培养瓶盖拧得太紧NaHCO3 缓冲系统缓冲力不足培养液中盐浓度不正确细菌、酵母或真菌污染对策：
新手常遇到的旋光仪使用难题分析
旋光仪是测定物质旋光度的仪器，通过对样品旋光度的测定，可分析物质的浓度、含量、纯度等，广泛应用于制糖、制药、石油、化工、食品、医疗等生产、检验和科研部门。由于计量性能易发生变化，而且故障相当高，下面我们来说一些新手常见的难题及解决方法。 1、开机后无反应 一般为旋光仪电源故障，用万用表顺电源线
Realtime－qPCR手册手把手教你从菜鸟到高手
3.3 SYBR@Green 法SYBR@Green I是一种结合于小沟中的双链DNA结合染料，与双链DNA结合后，其荧光大大增强。这一性质使其用于扩增产物的检测非常理想。SYBR@Green I 的最大吸收波长约为497nm，发射波长最大约为520nm。在PCR反应体系中，加入过量SYBR@Gre
实时荧光定量PCR（Realtime－PCR，QPCR，荧光定量）分类以...
实时荧光定量PCR（Real-time PCR，QPCR，荧光定量）分类以及实验步骤介绍实时荧光定量PCR（Real-time PCR，QPCR，荧光定量）技术（Real-time quantitative PCR），是指在（QPCR，荧光定量）反应体系中加入荧光基因，利用荧光信号积累实时监测整个（
高效液相色谱仪常遇到的5个问题
高效液相色谱仪(HPLC)是分析实验室常用的测试仪器之一，其应用越来越广泛。此种仪器在使用过程中，难免会出现各种各样的问题，并将直接影响到所测数据的准确性和仪器的正常工作。操作者如果能了解故障的成因，即可清楚预防和排除这些故障的发生，就可正确地使用仪器并最大限度地发挥仪器的性能。今天我们要从以下几
qPCR那些奇奇怪怪的曲线都代表啥
奇怪的曲线就代表基因扩增的有问题，可以检测基因的表达量、模板质量、引物有没有降解等等，其次试剂本身的灵敏度也有关系。我用的是ChamQ SYBR qPCR Master Mix，灵敏度就很高，一年前我们实验室就开始用了。
实验室常遇到的小问题和解决办法
实验室常遇到的小问题跟解决办法，比如，马弗炉在使用工程中发出警报，我们注意看一下温度仪表上数显的是不是“-----”，说明温度传感器断路了，拧紧传感器上的固定螺丝，或者更换新的传感器就可以了。实验室中常常会遇到一些意想不到的“小麻烦”，如，瓶塞粘固打不开，仪器上的污垢难以除去，分液时发生乳化现象
金属拉力试验机常遇到的误差及解决方法
金属拉力试验机常用于金属线材、钢筋、铝合金等等。是金属制品用来检测质量的常用设备，金属材料受到外力作用时对金属材料有一定的破坏作用。因此要求金属材料具有抵抗外力的作用而不被破坏的性能，这种性能称为机械性能。金属材料的机械性能主要包括：强度、塑性、硬度、冲击韧性和疲劳强度等。它们的具体数值是可以用金属
pH电极使用过程中Z常遇到的问题
pH电极是日常工业水质监测中zui常用到的探头，平时我们也注意到电极有它的使用寿命，电极属于消耗品，不同的工况条件对电极的寿命有不同的影响。有些工况条件，电极可以用1-3年，有些工况条件，电极只能用3-6个月甚至更短。其实这不是电极本身的质量问题，绝大多数情况下是工况条件影响了电极的寿命。但我们也可
实验室常遇到的11个小问题的解决办法
1、打开粘固的玻璃磨口当玻璃仪器的磨口部位因粘固而打不开时，可采取以下几种方法进行处理。(1)敲击用木器轻轻敲击磨口部位的一方，使其因受震动而逐渐松动脱离。对于粘固着的试剂瓶、分液漏斗的磨口塞等，可将仪器的塞子与瓶口卡在实验台或木桌的棱角处，再用木器沿与仪器轴线成约70°角的方向轻轻敲击，同时间歇地
Realtime－PCR
实验概要The exponential amplification via reverse transcription polymerase chain reaction provides for a highly sensitive technique in which a very low
qPCR的原理
这一期关注点在qPCR的原理上，我会将每一环节拆开掰碎展示给大家。 上期讲过，要对样本中的靶标进行定量，就要将靶标的数量和一定的信号反馈建立联系。这一点比较容易理解，比如我们要对一种荧光物质定量，那么一定范围内荧光信号的强度（吸光度）就与物质的数量成正比；对某种底物定量，那么在酶浓度一定且过
应用常见疑问
(1) 与其他原位修复技术相比的主要优势与原位化学氧化（ISCO）、气相抽提（SVE）等原位技术相比，原位热脱附技术优势包括：1） 能实现较严格的修复目标；2） 耗时短，能在3~6个月内去除90%以上的污染物；3） 可同时处理多种污染物，并同时处理污染的土壤与地下水；4） 对地质条件的适用范围广，能
qPCR－Protocol－for－SNP－Genotyping
实验概要Platinum® qPCR SuperMix for SNP Genotyping is a ready-to-use reaction mix for the amplification and identification of single-nucleotide polymorp
RealTime－or－Kinetic－PCR
The DNA Facility houses the “real-time” or kinetic PCR instrument, the Applied Biosystems Model 7700 sequence detection system (the TaqMan instrument)
miRNA的qPCR检测
测序技术的引入促使miRNA研究领域进入快速发展阶段，然而qPCR仍是验证测序数据的重要标准。本文将为您介绍使用qPCR进行miRNA分析的基本要点，希望能帮助新人快速入门。什么是miRNA？miRNA是一类小的非编码RNA，能够与RNA诱导沉默复合物（RISC）结合，通过作用于mRNA，进而介导转
qPCR的优缺点
qPCR就是定量PCR。最常用的就是real-time PCR优点就是能够测定模板的绝对量。
realtime－PCR体系的优化
实时定量PCR以其精确、快速、方便，越来越多的应用在科研、临床及检验检疫的各个领域。但是定量PCR是对精确性要求很高的实验，实验的条件对实验结果的影响非常大。在此谈谈体系优化的问题，希望对做相关试验研究的朋友有所帮助。1、基本参数的优化：1）MgCl2的浓度：在PCR反应中，MgCl2的浓度对酶的活
球磨机日常操作疑问
1、球磨工如何正确操作球磨机这是选矿过程中的重要问题。现在矿业开发较热，技术工人也相对匮乏，许多没有经过长期正式培训而就上岗，无形中给矿山企业造成了较大的经济损失。另外，磨矿的操作属于生产实际经验技术，许多工程技术人员也不是很明白，而这方面的技术经验在各类书籍上也不能找到。为此，根据作者多年在生产调
什么是QPCR
QPCR的英文全名是Real-time Quantitative PCR Detecting System。即实时荧光定量核酸扩增检测系统，也叫实时定量基因扩增荧光检测系统，简称QPCR。
什么是QPCR
QPCR的英文全名是Real-time Quantitative PCR Detecting System。即实时荧光定量核酸扩增检测系统，也叫实时定量基因扩增荧光检测系统，简称QPCR。
如何借助epMotion－5073l移液工作站完成微量体积的...（一）
如何借助epMotion 5073l移液工作站完成微量体积的qPCR反应体系构建在进行微量体系的液体操作时，如何避免人为误差与日间变化，如何保证结果的一致性提高实验效率？如果减少冗长枯燥的重复操作，减少昂贵试剂的使用，提升操作体验节省实验经费？本篇应用旨在介绍如何用10 μL分液工具实现全自动的微量