PCR检测方法(一)

PCR反应的最大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性,但令人头痛的问题是易污染,极其微量的污染即可造成假阳性的产生。污染原因一、标本间交叉污染:标本污染主要有收集标本的容器被污染,或标本放置时,由于密封不严溢于容器外,或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染;标本核酸模板在提取过程中,由于吸样枪污染导致标本间污染;有些微生物标本尤其是病毒可随气溶胶或形成气溶胶而扩散,导致彼此间的污染。二、PCR试剂的污染:主要是由于在PCR试剂配制过程中,由于加样枪、容器、双蒸水及其它溶液被PCR核酸模板污染。三、PCR扩增产物污染:这是PCR反应中最主要最常见的污染问题。因为PCR产物拷贝量大(一般为1013拷贝/ml),远远高于PCR检测数个拷贝的极限,所以极微量的PCR产物污染,就可造成假阳就可形成假阳性。还有一种容易忽视,最可能造成PCR产物污染的形式是气溶胶污染。在空气与液体面摩擦时就可形成气溶胶,在操作时比较剧烈地摇动反应管,开盖时、吸......阅读全文

PCR检测方法

PCR反应的zui大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性,但令人头痛的问题是易污染,极其微量的污染即可造成假阳性的产生。污染原因一、标本间交叉污染:标本污染主要有收集标本的容器被污染,或标本放置时,由于密封不严溢于容器外,或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染;标本核酸模板在提取过程中,由于吸样枪污染

移动PCR方舱实验室及配套设备清单

  移动PCR方舱实验室又称为基因扩增PCR实验室,它利用分子生物科学技术,对核酸片段进行高精度检测。实验室采用标准集装箱体,其运输方便,功能齐全,采集完样品后可就地进行检测,减少了样本流转的时间。方舱实验室的启动真正实现了重点人群“应检尽检”,其他人群“愿检尽检”,全力满足了群众核酸检测的需求。

洋奶粉:检测方称“失误”

  三大洋品牌婴儿奶粉被指“添香”的事件,昨天出现戏剧性一幕。昨天,作为此次事件的关键人——湖南农业大学营养与食品安全检测中心发布声明称,宣称 “该中心对三大洋奶粉的检测报告存在失误,本批次委托检测样品的结果均无效。”同时,该检测中心对相关企业表示道歉。不过,对于该检测中心的“误判”之

PCR产物的检测PCRELISA法

在一个引物的5’端标记上生物素以便使其能与包被板上的亲合素结合而固定PCR产物,而在另一引物的5’端标记FITC,用HRP标记的抗FITC抗体与之结合显色,即可进行常规ELISA检测。如设立标准对照,此技术还可用于定量分析。 【试剂与配置】 包被液:4.3mmol/L Na2HPO4,

什么是PCR检测

聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction ,PCR)是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。它具有特异、敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点;能在一个试管内将所要研究 的目的基因或某一DNA片段于数小时内扩增至十万乃至百万倍,使肉眼能直接观察和判断;可从一

现场PCR检测方案

春暖花开,万物复苏,无论是自然界还是科学界,都在发生着日新月异的变化,近年来医疗诊断及食品安全监测领域的技术创新更是层出不穷,而这一切都离不开分子生物学检测手段的支持。目前大家对于即时现场检测的需求也十分多样化,比如,技术不太熟练的基层人员需要在短时间内能够得到准确的检测结果,或是在野外条件下需要携

PCR检测方法(二)

3.实验操作注意事项:尽管扩增序列的残留污染大部分是假阳性反应的原因,样品间的交叉污染也是原因之一。因此,不仅要在进行扩增反应是谨慎认真,在样品的收集、抽提和扩增的所有环节都应该注意:(1)戴一次性手套,若不小心溅上反应液,立即更换手套。(2)使用一次性吸头,严禁与PCR产物分析室的吸头混用,吸头不

什么是PCR检测

聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction ,PCR)是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。它具有特异、敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点;能在一个试管内将所要研究 的目的基因或某一DNA片段于数小时内扩增至十万乃至百万倍,使肉眼能直接观察和判断;可从一

什么是PCR检测?

PCR(聚合酶链反应):类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。基本原理:PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性主要依赖于和靶序列两端互补的寡核苷酸引物,它由变性——复性——延伸三个基本反应步骤构成。所需材料:模板DNA正二价镁离子引物反应缓冲液T

PCR检测方法(一)

PCR反应的最大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性,但令人头痛的问题是易污染,极其微量的污染即可造成假阳性的产生。污染原因一、标本间交叉污染:标本污染主要有收集标本的容器被污染,或标本放置时,由于密封不严溢于容器外,或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染;标本核酸模板在提取过程中,由于吸样枪污染导致

什么叫pcr检测

聚合酶链反应(PCR)的基本原理是一种酶促合成反应。即在模板DNA、引物和脱氧核糖核苷酸存在下,在DNA聚合酶的作用下,使DNA链扩增延伸。试验先通过加热变性,使DNA双螺旋的氢链断裂,解离成单链DNA;然后通过退火,突然降温使引物与其互补的模板在局部形成杂交链;然后再在DNA聚合酶、脱氧核糖核苷三

多重PCR核酸检测

2020年3月11日,世卫组织总干事谭德赛在日内瓦召开的新闻发布会上宣布,新冠肺炎(COVID-19)疫情已经构成全球性大流行(pandemic)。截止到目前,中国的疫情在国内联防联控机制下已基本得到控制,而国外的情况却不容乐观。新冠肺炎疫情爆发于呼吸道疾病高发的季节,有各类呼吸道病原体单一感染或合

PCR检测主要优势?

其实每一种检测方法都有其擅长的应用场景。以病毒检测为例,通常的免疫学检测方法(胶体金、ELISA、化学发光等)的检测对象是病毒的抗原或抗体,相当于“侧面描绘”。由于人体从感染到抗原或抗体可检测到存在一个时间窗口期,因此免疫学检测方法一般不合适作为早期诊断。而核酸检测的检测对象是病毒的核酸分子,则是“

第三方医学检测拥抱“检测+”

  国务院总理李克强在2015年6月4日主持召开国务院常务会议,督促部署了社会办医的健康发展,其中提到“要探索以公建民营、民办公助等方式建立区域性检验检查中心”。这对我国的第三方医检行业来说是重大利好。近十年来,我国第三方医检行业发展迅猛,也已然成为医疗健康事业的中坚力量。  2015年8月4日,我

PCR(RTPCR)反转录-定性检测方法

  1、试剂  (1)10倍 RT 缓冲液:500mmol/L Tris·Cl(pH8.0),0.60 mmol/L MgCl2,400mmol/L KCl,10mmol/L DTT。  (2)10倍 PCR 缓冲液:100mmol/L Tris·Cl(pH8.3),500mmol/L kCl,15

方兰德拟设石油装备检测公司

  方兰德(830952)8月21日晚间公告,公司拟以自有资金投资1000万元设立全资子公司山东方兰德石油装备检测技术服务有限责任公司。公司表示,此举意在将母公司的服务业项目剥离至新设立的子公司,建设高端石油装备检测公共服务平台项目。  公告称,此次设立的新公司经营范围为石油机械设备产品研发、检测及

免疫PCR(ImmunoPCR)概念、组成和免疫PCR产物的检测

(一) 免疫PCR技术的概念免疫PCR是一种抗原检测系统,将一段已知序列的DNA片段标记到抗原抗体复合物上,再用PCR方法将这段DNA扩增,然后用常规方法检测PCR产物。免疫PCR集PCR的高灵敏度与抗体和抗原反应的特异性于一体。其突出的特点是指数级的扩增效率带来了极高的敏感度,能检出浓度低至2ng

PCR法检测支原体

实验方法原理PCR法的基本原理是酶促DNA合成反应,即在DNA模板、引物和脱氧核糖核酸存在下,经DNA聚合酶的作用,使DNA链扩增延伸。实验材料细胞样品试剂、试剂盒dNTPTapDNA聚合酶琼脂糖矿物油支原体检测试剂盒仪器、耗材超净工作台PCR仪电泳仪凝胶成像分析系统台式离心机旋涡混悬器实验步骤1.

弓形体的PCR检测

  弓形体有广泛的自然疫原性,人体多为隐性感染,抵抗力低时可以有临床表现。弓形体的诊断较困难,血清学方法敏感性较高但有交叉性出现假阳性而且无法确定近期感染、远期感染或一过性感染。确诊的方法是活组织检查或动物接各,这些方法阳性率太低不能推广。PCR检测可以检出样本中1-2个病原体而且准确性高,是目前对

PCR法检测支原体

PCR法是20世纪80年代中期建立起来的一种体外DNA扩增技术,其基本原理是酶促DNA合成反应,即在DNA模板、引物和脱氧核糖核酸存在下,经DNA聚合酶的作用,使DNA 链扩增延伸。该方法具有灵敏度高、特异性强、快速的特点,但其对实验环境的要求严格,实验成本较高,有时还有假阳性的现象出现。1、仪器设

实时荧光PCR检测技术

实时荧光PCR检测技术众所周知,PCR(聚合酶链反应)技术自从1985年问世以来,经过十几年的发展,已成为实验室的常规技术。它是现代分子生物学研究中不可缺少的手段,是一种极为敏感的放大系统。相比于传统的临床诊断方法,核酸诊断是分子水平上的诊断技术,可以弥补传统临床诊断方法的某些缺陷,比如,核酸诊断能

多重PCR法检测STEC

产志贺毒素大肠杆菌(STEC)具有很强的致病性,全球范围内由其引发的食物中毒和其他公共卫生事件呈逐年升高之势,严重威胁人类的健康。开发快速可靠的检测手段对其引发的食源性疾病的监测、控制和预防意义重大。本文结合对STEC分子生物学特征的研究,着重介绍了多重PCR检测技术在检测食品中STEC方面的

PCR法检测支原体

PCR法是20世纪80年代中期建立起来的一种体外DNA扩增技术,其基本原理是酶促DNA合成反应,即在DNA模板、引物和脱氧核糖核酸存在下,经DNA聚合酶的作用,使DNA 链扩增延伸。该方法具有灵敏度高、特异性强、快速的特点,但其对实验环境的要求严格,实验成本较高,有时还有假阳性的现象出现。1、仪

荧光定量PCR检测方法

  所谓实时荧光定量PCR技术,是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。  检测方法  1.SYBRGreenⅠ法:  在PCR反应体系中,加入过量SYBR荧光染料,SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后,发射荧光信

数字PCR检测技术介绍

数字PCR(Digital PCR-dPCR)技术是一种新的核酸检测和定量方法,又称单分子PCR,它的原理是将一个标准PCR反应分配到大量微小的反应器中,在每个反应器中包含或不包含一个或多个拷贝的目标分子( DNA模板) ,实现“单分子模板PCR扩增”。 扩增结束后,通过阳性反应器的数目“数出”目标

什么是荧光PCR检测

荧光定量PCR是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针,对PCR产物进行标记跟踪,实时在线监控反应过程,结合相应的软件可以对产物进行分析,计算待测样品模板的初始浓度。原理: PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探

PCR产物的电泳检测

PCR产物的电泳检测时间一般为48h以内,有些最好于当日电泳检测,大于48h后带型不规则甚致消失。常见问题如下:    一、假阴性,不出现扩增条带    PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备,②引物的质量与特异性,③酶的质量及, ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。    模板

土壤检测第三方机构

农业生产离不开土壤,而不论是科技发达的今天还是之前,人们都一直没有停止做土壤进行种植、嫁接,品种培育,杀虫,疏枝,等行为。于是土壤检测成了现代农业生产过程中的一项重要工作。通过土壤检测我们可以很好的知道土壤的养分含量、酸碱度、污染情况等等。现在能够提供做这项服务的机构有很多,可以咨询一下中科检测,收

伯乐发布实时PCR检测系统

伯乐 Laboratories 推出了 CFX Opus Deepwell 实时 PCR 检测系统。 该系统有一个 96 孔模块,反应体积高达 125 微升。 该系统较深的样品孔设计用于样品汇集、某些样品制备程序或其他特殊方案,例如食品和工业测试,以及需要大量样品的人类和兽医病原体检测。 该系统可以

PCR检测的那点事儿(一)

聚合酶链式反应(PCR技术)又称无细胞分子克隆法,它的鼎鼎大名在分子生物学领域可谓如雷贯耳,近年来无论是如日中天的精准医疗,还是稳步发展的基因诊断都离不开PCR技术这位“老母亲”。对于检验检测行业的小伙伴来说,PCR技术也绝对能够称得上是我们的“好帮手”了。尤其是致病菌检测、动物源性