生化实验讲义(理论部分)——层析技术（三）
3.1 层析技术概述3.1.1 引言层析法又称色层分析法或色谱法（Chromatography），它是在1903-1906年由俄国植物学家M. Tswett首先系统提出来的。他将叶绿素的石油醚溶液通过CaCO3管柱，并继续以石油醚淋洗，由于CaCO3对叶绿素中各种色素的吸附能力不同，色素被逐渐分离，在管柱中出现了不同颜色的谱带或称色谱图（Chromatogram）。当时这种方法并没引起人们的足够注意，直到1931年将该方法应用到分离复杂的有机混合物，人们才发现了它的广泛用途。随着科学技术的发展以及生产实践的需要，层析技术也得到了迅速的发展。为此作出重要贡献的当推英国生物学家Martin和Synge。他们首先提出了色谱塔板理论。这是在色谱柱操作参数基础上模拟蒸馏理论，以理论塔板来表示分离效率，定量的描述、评价层析分离过程。其次，他们根据液－液逆流萃取的原理，发明了液－液分配色谱。特别是他们提出了远见卓识的预言：一、流动相可用气......阅读全文
层析技术
层析技术概述引言层析法又称色层分析法或色谱法（Chromatography），它是在1903~1906年由俄国植物学家M. Tswett首先提出来的。他将叶绿素的石油醚溶液通过CaCO3管柱，并继续以石油醚淋洗，由于CaCO3对叶绿素中各种色素的吸附能力不同，色素被逐渐分离，在管柱中出现了不
层析技术介绍
层析技术概述引言层析法又称色层分析法或色谱法（Chromatography），它是在1903~1906年由俄国植物学家M. Tswett首先提出来的。他将叶绿素的石油醚溶液通过CaCO3管柱，并继续以石油醚淋洗，由于CaCO3对叶绿素中各种色素的吸附能力不同，色素被逐渐分离，在管柱中出现了不
层析技术分类
1. 按两相所处物理状态分类 气相层析：气液层析（固定相为液体）和气固层析（固定相为固体），流动相为气体。 液相层析：液液层析（固定相为液体）和液固层析（固定相为固体），流动相为液体。 2. 按层析方式分类 柱层析：固定相装于柱内，使样品沿着一个方向移动而分离。 薄层层析：将适当粘度的
层析技术及离心技术
（一)层析技术层析法是利用不同物质理化性质的差异而建立起来的技术。可分为吸附层析法、分配层析法、离子交换层析法、凝胶层析法、亲和层析法、高效液相层析法等。在层析法中，根据层析峰的位置及峰高或峰面积，可以定性及定量。层析法与光学、电学或电化学仪器连用，可检测出层析后各组分的浓度或质量，同时绘出层析图。
层析技术概念、原理、分类（凝胶层析和离子交换层析）
一．概念利用混和物中各组分理化性质（吸附力、分子形状、大小、分子极性、分子亲和力以及分配系数）的差异，在物质经过两相中进行分离的一种技术。本世纪初（1903年），俄国植物学家M.C.Jber发现并使用这一技术证明了植物的叶子中不仅有叶绿素，还含有其他色素，实际上他使用的吸附层析。现在层系法已成为生化
柱层析技术的技术特点
柱层析技术(Column chromatography) 又称柱色谱技术，主要原理是根据样品混合物中各组分在固定相和流动相中分配系数不同，经多次反复分配将组分分离开来。
层析技术的背景
层析技术早在1903年就应用于植物色素的分离提取，各种颜色的色素从上到下在吸附柱上排列成色谱，也称色谱分离法。1931年有人用氧化铝柱分离了胡萝卜素的两种同分异构体，显示了这一分离技术的高度分辨力，从此引起了人们的广泛注意。随着人们认识和实践的提高以及物理化学技术的发展，应用范围更加广泛，没有颜
什么免疫层析技术？
免疫层析技术就是根据免疫抗体-抗原的相互吸附原理设计出的一种制备收集或检测分析的色谱技术。一般情况就是将已知抗体或抗原欧联到微球或介质上，使样品通过，能够与介质上抗原或抗体吸附的相应分子会被吸附在介质上，之后进行冲洗，洗脱即可得到希望获得的物质。检测的原理和收集类似，只是加入检测部分，一般和EL
柱层析技术简介
柱层析技术(Column chromatography) 又称柱色谱技术，主要原理是根据样品混合物中各组分在固定相和流动相中分配系数不同，经多次反复分配将组分分离开来。
柱层析技术特点
柱层析操作时，先在圆柱管中填充不溶性基质，形成一个固定相。将样品加到柱子上，用特殊溶剂洗脱，溶剂组成流动相。在样品从柱子上洗脱下来的过程中，根据样品混合物中各组分在固定相和流动相中分配系数不同，经多次反复分配将组分分离。
反相层析技术介绍
在吸附层析中，高极性物质在层析柱上吸附较牢，洗脱时发生拖尾现象和保留时间长的问题。如果在支持物上涂上一层高碳原子的疏水性强的烷烃类，洗脱液用极性强的溶剂，如甲醇和水的混合物。则被分离样品中的极性强的物质不被吸附，最先洗下来，得到较好的分离效果。这种层析法与普通的吸附层析法相反，故称为反相层析。用HP
同系层析技术介绍
在核酸分析中，将样品经核酸酶部分裂解成不同长度的核苷酸片段，用同位素标记后，在DEAE纤维素薄层上分离，用含有未标记的相同的核苷酸片段作展层溶剂，这样，未标记的核苷酸把标记过的核苷酸推进，使按分子量大小不同把标记核苷酸片段，按由小到大的次序排列，达到分离的目的。于是把这种层析法称为同系层析。同系层析
现代层析法技术特点
色谱法或是层析法是简单点说，就是依据被分离物的物理、化学及生物学特性的不同，使它们在某种基质中移动速度不同而进行分离和分析的方法。
层析分离技术概述
一、层析分离技术原理：层析分离技术是利用混合物中各组份物理化学性质的差别（如分子吸引力、分子亲和力、分子形状、分子大小、分子极性和分配系数等），使各组分以不同的分配比例分布在固定相和流动相中，从而达到分离目的。层析分离技术常与离心机分离技术结合使用。二、层析分离技术发展历程：1903年利用层析分离技
层析技术的概念
利用混和物中各组分理化性质（吸附力、分子形状、大小、分子极性、分子亲和力以及分配系数）的差异，在物质经过两相中进行分离的一种技术。本世纪初（1903年），植物学家M.C.Jber发现并使用这一技术证明了植物的叶子中不仅有叶绿素，还含有其他色素，实际上他使用的吸附层析。现在层系法已成为生化、分子生物学
层析分离技术概述
一、层析分离技术原理：层析分离技术是利用混合物中各组份物理化学性质的差别（如分子吸引力、分子亲和力、分子形状、分子大小、分子极性和分配系数等），使各组分以不同的分配比例分布在固定相和流动相中，从而达到分离目的。层析分离技术常与离心机分离技术结合使用。二、层析分离技术发展历程：1903年利用层析分离技
层析技术概念原理
层析法是利用不同物质理化性质的差异而建立起来的技术。所有的层析系统都由两个相组成：一是固定相，另一是流动相。当待分离的混合物随流动相通过固定相时，由于各组分的理化性质存在差异，与两相发生相互作用（吸附、溶解、结合等）的能力不同，在两相中的分配（含量比）不同，且随流动相向前移动，各组分不断地在两相
层析技术的原理
层析法是利用不同物质理化性质的差异而建立起来的技术。所有的层析系统都由两个相组成：固定相：大多是固体物质或是固定于固体上的成分。流动相：由水和各种溶媒组成（液体或气体）。当待分离的混合物随流动相通过固定相时，由于各组分的理化性质存在差异，与两相发生相互作用（吸附、溶解、结合等）的能力不同，在两相中的
层析技术的应用
层析又叫色谱色谱法的应用可以根据目的分为制备性色谱和分析性色谱两大类。 制备性色谱的目的是分离混合物，获得一定数量的纯净组分，这包括对有机合成产物的纯化、天然产物的分离纯化以及去离子水的制备等。相对于色谱法出现之前的纯化分离技术如重结晶，色谱法能够在一步操作之内完成对混合物的分离，但是色谱法分离
纸层析技术介绍
以滤纸为支持物的分配层析。组成滤纸的纤维素是亲水物质，能形成水相和展层溶剂的两相系统，被分离物质在两相中的分配保持平衡关系。纸层析用于分析简单的混合物时可做单向层析。对于复杂的混合物，可做双向层析。1944年A．J．P．马丁第一次用纸层析分析氨基酸，得到很好的分离效果，开创了近代层析的发展和应用的新
层析技术概述（二）
分辨率： 由上式可见，Rs值越大，两种组分分离的越好。当Rs = 1时，两组分具有教好的分离，互相沾染约2%，即每种组分的纯度约为98%。当Rs=1.5时，两组分基本完全分开，每种组分的纯度可达到99.8%。如果两种组分的浓度相差较大时，尤其要求较高的分辨率。 为了提高分辨率Rs 的值，可采用以下方
亲和层析技术
亲和层析 （一）原理 亲和层析是一种吸附层析，抗原（或抗体）和相应的抗体（或抗原）发生特异性结合，而这种结合在一定的条件下又是可逆的。所以将抗原（或抗体）固相化后，就可以使存在液相中的相应抗体（或抗原）选择性地结合在固相载体上，借以与液相中的其他蛋白质分开，达到分离提纯的目的。
层析技术的分类
分类1. 按两相所处物理状态分类气相层析：气液层析（固定相为液体）和气固层析（固定相为固体），流动相为气体。液相层析：液液层析（固定相为液体）和液固层析（固定相为固体），流动相为液体。2. 按层析方式分类柱层析：固定相装于柱内，使样品沿着一个方向移动而分离。薄层层析：将适当粘度的固定相均匀铺在薄
层析技术概述（三）
柱层析的基本装置及基本操作目前，最常用的层析类型是各种柱层析，下面就简述柱层析的基本装置及操作方法，薄层层析的装置和操作将在后面详细讨论。1. 柱层析的基本装置柱层析的基本装置示意图如图3－3 所示：2. 柱层析的基本操作柱层析的基本操作包括以下一些步骤：⑴ 装柱柱子装的质量好与差，是柱层析法能否成
层析技术概述（一）
层析法又称色层分析法或色谱法（Chromatography），它是在1903-1906年由俄国植物学家M. Tswett首先系统提出来的。他将叶绿素的石油醚溶液通过CaCO3管柱，并继续以石油醚淋洗，由于CaCO3对叶绿素中各种色素的吸附能力不同，色素被逐渐分离，在管柱中出现了不同颜色的谱带或称
层析技术概述（四）
⑷ 洗脱当我们选定好洗脱液后，洗脱的方式可分为简单洗脱、分步洗脱和梯度洗脱三种。简单洗脱：柱子始终用同样的一种溶剂洗脱，直到层析分离过程结束为止。如果被分离物质对固定相的亲合力差异不大，其区带的洗脱时间间隔（或洗脱体积间隔）也不长，采用这种方法是适宜的。但选择的溶剂必须很合适方能使各组分的分配系数较
层析新知：层析技术进步发展期
上世纪60、70年代是色谱/层析技术快速发展的时代，首先是层析介质有了飞速的发展，各种人工合成的介质出现，如硅胶、聚苯乙烯二乙烯基树脂、琼脂糖、葡聚糖、聚丙烯酰胺等树脂或凝胶的出现，极大地拓展了层析技术的应用领域和范围，基于不同介质的层析方法也如雨后春笋般不断涌现。如Bio-Rad公司于上世纪50年
层析新知：层析技术进步发展期
上世纪60、70年代是色谱/层析技术快速发展的时代，首先是层析介质有了飞速的发展，各种人工合成的介质出现，如硅胶、聚苯乙烯二乙烯基树脂、琼脂糖、葡聚糖、聚丙烯酰胺等树脂或凝胶的出现，极大地拓展了层析技术的应用领域和范围，基于不同介质的层析方法也如雨后春笋般不断涌现。如Bio-Rad公司于上世纪50
凝胶层析技术中的主体——层析柱
凝胶是一类多孔性高分子聚合物，每个颗粒犹如一个筛子。当样品溶液通过凝胶柱时，相对分子质量较大的物质由于直径大于凝胶网孔而只能沿着凝胶颗粒间的空隙，随着溶剂流动，因此流程较短，向前移动速度快而首先流出层析柱；反之，相对分子质量较小的物质由于直径小于凝胶网孔，可自由地进出凝胶颗粒的网孔，在向下移动过
离子交换层析实验离子交换层析技术
离子交换层析实验可应用于：（1）分离纯化蛋白质；（2）分离氨基酸；（3）分离核酸、核苷酸及其它带电荷的生物分子。实验方法原理离子交换层析（Ion Exchange Chromatography简称为IEC）是以离子交换剂为固定相，依据流动相中的组分离子与交换剂上的平衡离子进行可逆交换时的结合力大小的