HPLC应用
一、样品测定1．流动相比例调整：由于我国药品标准中没有规定柱的长度及填料的粒度，因此每次新开检新品种时几乎都须调整流动相（按经验，主峰一般应调至保留时间为6~15分钟为宜）。所以建议第一次检验时请少配流动相，以免浪费。弱电解质的流动相其重现性更不容易达到，请注意充分平衡柱。2．样品配制：①溶剂；②容器：塑料容器常含有高沸点的增塑剂，可能释放到样品液中造成污染，而且还会吸留某些药物，引起分析误差。某些药物特别是碱性药物会被玻璃容器表面吸附，影响样品中药物的定量回收，因此必要时应将玻璃容器进行硅烷化处理。3．记录时间：第一次测定时，应先将空白溶剂、对照品溶液及供试品溶液各进一针，并尽量收集较长时间的图谱（如30分钟以上），以便确定样品中被分析组分峰的位置、分离度、理论板数及是否还有杂质峰在较长时间内才洗脱出来，确定是否会影响主峰的测定。4．进样量：药品标准中常标明注入10ml，而目前多数HPLC系统采用定量环（10ml、20ml和5......阅读全文
HPLC基础知识（四）
4．柱的使用和维护注意事项 色谱柱的正确使用和维护十分重要，稍有不慎就会降低柱效、缩短使用寿命甚至损坏。在色谱操作过程中，需要注意下列问题，以维护色谱柱。① 避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动。温度的突然变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充状况；柱压的突然升高或降低也会冲动柱内
HPLC的故障及处理
（一) 保留时间变化1.柱温变化 柱恒温2.等度与梯度间未能充分平衡 至少用10倍柱体积的流动相平衡柱3.缓冲液容量不够 用>25mmol/L的缓冲液4.柱污染 每天冲洗柱5.柱内条件变化 稳定进样条件,调节流动相6.柱快达到寿命 采用保护柱(二) 保留时间缩
HPLC基础知识（七）
V．HPLC应用一、样品测定1．流动相比例调整：由于我国药品标准中没有规定柱的长度及填料的粒度，因此每次新开检新品种时几乎都须调整流动相（按经验，主峰一般应调至保留时间为6~15分钟为宜）。所以建议第一次检验时请少配流动相，以免浪费。弱电解质的流动相其重现性更不容易达到，请注意充分平衡柱。2．样品配
HPLC基础知识（六）
三、流动相1．流动相的性质要求 一个理想的液相色谱流动相溶剂应具有低粘度、与检测器兼容性好、易于得到纯品和低毒性等特征。 选好填料（固定相）后，强溶剂使溶质在填料表面的吸附减少，相应的容量因子k降低；而较弱的溶剂使溶质在填料表面吸附增加，相应的容量因子k升高。因此，k值是流动相组成的函数
纯水对于HPLC的影响
纯水对于HPLC的影响液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography \ HPLC）是一种有效可靠的技术，目前已成为许多实验室研究的重要工具。HPLCzui常见的一个问题就是溶剂中的污染物对分析结果的影响。颗粒颗粒可以损坏泵和注射器。颗粒也可以堵塞色谱柱并且
什么是HPLCUV
高效液相色谱HPLC紫外检测器UV用紫外检测器的高效液相色谱
HPLC基础知识（一）
鉴于HPLC应用在药品分析中越来越多，因此每一个药品分析人员应该掌握并应用HPLC。I．概论 一、液相色谱理论发展简况色谱法的分离原理是：溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时，由于与固定相(stationaryphase)发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和
HPLC基础知识（三）
3．柱外效应速率理论研究的是柱内峰展宽因素，实际在柱外还存在引起峰展宽的因素，即柱外效应（色谱峰在柱外死空间里的扩展效应）。色谱峰展宽的总方差等于各方差之和，即： σ2＝σ2柱内＋σ2柱外＋σ2其它柱外效应主要由低劣的进样技术、从进样点到检测池之间除柱子本身以外的所有死体积所引起。为了减少柱外
HPLC的故障及处理
(一) 保留时间变化 1.柱温变化 柱恒温。 2.等度与梯度间未能充分平衡 至少用10倍柱体积的流动相平衡柱。 3.缓冲液容量不够 用>25mmol/L的缓冲液。 4.柱污染 每天冲洗柱。 5.柱内条件变化 稳定进样条件，调节流动相。 6.柱快达到寿命 采用保护柱。 (二) 保留时间缩短 1.流速增
水质对HPLC的影响
高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography \ HPLC）是一种有效可靠的技术，目前已成为许多实验室研究的重要工具。HPLC最常见的一个问题就是溶剂中的污染物对分析结果的影响。 1、颗粒 颗粒可以损坏泵和注射器。颗粒也可以堵塞色谱柱并
如何提高HPLC柱效？
要提高液相色谱的效率可从以下几方面入手。 以下介绍了几种国际上流行的测量和计算柱效值的方法。 1、提高液相色谱柱柱效的方法要提高液相色谱的效率可从以下几方面入手。 （1）降低移动相的流速,但会使分析时间延长。 （2）减少固定相的量,但色谱柱中样品的负载量也随之减小。 （3）减小固定相的颗粒度,但不能
HPLC－故障及排除方法
诊状 可能的原因 解 决 方 法 （ 一 ） 保留时间变化 1. 柱温变化柱恒温2. 等度与梯度间未能充分平衡至少用 10 倍柱体积的流动相平衡柱3. 缓冲液容量不够用 >25mmol/L 的缓冲液4. 柱污染每天冲洗柱5. 柱内条件变化稳定进样条件 , 调节流动相6. 柱快达到寿命采用保护柱（ 二
HPLC如何计算样品含量
你是用什么样的定量方法呢？如果面积归一化法的话就直接用你的待检峰面积除上你的样品所有峰面积和再乘100就是你的样品中待检成分的百分比浓度了。如果是内标或外标法应该要进标准溶液
HPLC流动相如何选择
对于一般的反相柱，用甲醇/水或乙腈/水作流动相。甲醇/水作流动相时，如果得到的色谱图出的峰分的不完全，可以加大水的比例。如果出得峰太靠后而分离效果又不错，可加大甲醇的比例，可使峰出的早一些。对于一些难分离的物质，要选用乙腈/水作流动相。由于高效液相色谱中流动相是液体，它对组分有亲和力，并参与固定相对
Waters－HPLC故障排除指南
Waters公司的，HPLC故障排除指南1. Column Life-Time 2. Variable Retention Times 3. Drifting Retention Times 4. Column-to-Column and Batch-to-Batch Reprodu
HPLC直接液体导入接口
直接液体导入接口（DLI）是将HPLC的流动相沿着进样杆流动，然后通过一个直径为3-5μm的针孔，使液体射入质谱计的CI离子源中。仅仅大约10-50μl/min的液流，就如小液滴流一样可进入离子源（是传统HPLC流量的1%-5%），否则质谱计的泵系统将被损伤。当它通过一个加热的去溶剂区域时，溶剂蒸发
HPLC基础知识（五）
4．与检测器有关的故障及其排除1）流动池内有气泡 如果有气泡连续不断地通过流动池，将使噪音增大，如果气泡较大，则会在基线上出现许多线状“峰”，这是由于系统内有气泡，需要对流动相进行充分的除气，检查整个色谱系统是否漏气，再加大流量驱除系统内的气泡。如果气泡停留在流动池内，也可能使噪音增大，可采
GC和HPLC的区别
Gas Chromatography 气相色谱法气相色谱系统由盛在管柱内的吸附剂(表1) 或惰性固体上涂着液体的固定相和不断通过管柱的气体的流动相组成。将欲分离、分析的样品从管柱一端加入后，由于固定相对样品中各组分吸附或溶解能力不同，即各组分在固定相和流动相之间的分配系数有差别，当组分在两相中反复多
HPLC基础知识（二）
3．离子交换色谱法 固定相是离子交换树脂，常用苯乙烯与二乙烯交联形成的聚合物骨架，在表面未端芳环上接上羧基、磺酸基（称阳离子交换树脂）或季氨基（阴离子交换树脂）。被分离组分在色谱柱上分离原理是树脂上可电离离子与流动相中具有相同电荷的离子及被测组分的离子进行可逆交换，根据各离子与离子交换基团具有不同的
HPLC峰变宽的原因
原因：a.在使用过程中柱本身退化，逐渐降低柱效; b.柱外峰宽效应。一根很好的专用柱用于另一液相色谱系统引起塔板数降低，说明新系统有很大的柱外峰宽效应; c.化学效应，多数是流动相和固定相相互作用所致，改变流动相可使宽峰有所改善。
HPLC－故障及排除方法
详细说明: 诊状 可能的原因 解 决 方 法 一 保留时间变化 1.柱温变化 柱恒温 2.等度与梯度间未能充分平衡 至少用10倍柱体积的流动相平衡柱 3.缓冲液容量不够 用>25mmol/L的缓冲液 4.柱污染 每天冲洗柱 5.柱内条件变化 稳定进样条件,调节流动相 6.柱快达到寿命 采
HPLC与FPLC的异同
FPLC全称为快速蛋白液相色谱（Fast protein liquid chromatography），其原理与GX液相色谱理论类似，是由经典的液体柱层析引入气相色谱理论，并且对相体进行了改革，配用高压输液泵，采用高灵敏检测器、梯度洗脱装置、自动收集装置和微机等发展起来的现代液相色谱。 近些年
HPLC方法开法哪些事！
开发方法或方法验证时最重要的一步就是流动相的选择和比例的调整。我想大家肯定都遇到过分离度不好或峰形不好的情况，大部分原因就是流动相没调好，那到底该怎么调，怎么选择呢？看完下文可能你就知道答案了。 01、由强到弱 一般先用90%的乙腈(或甲醇)/水(或缓冲溶液)进行试验，这样可以很快地得到分离
HPLC良好的连接方略
毛细管对高效液相色谱分离的影响 若高效液相色谱 (HPLC) 系统采用了不适当的连接方式或者应用不正确的毛细管，均可能导致均可能导致不良的峰扩宽，色谱柱的最佳分离效率就更无从谈起。甚至还可能发生使用的柱子越细，其洗脱峰的扩宽反而越大的情况。本文将详细介绍毛细管对高效液相色谱分离的影响，
HPLC流动相如何选择
对于一般的反相柱，用甲醇/水或乙腈/水作流动相。甲醇/水作流动相时，如果得到的色谱图出的峰分的不完全，可以加大水的比例。如果出得峰太靠后而分离效果又不错，可加大甲醇的比例，可使峰出的早一些。对于一些难分离的物质，要选用乙腈/水作流动相。由于高效液相色谱中流动相是液体，它对组分有亲和力，并参与固定相对
HPLC保留时间限制多少？
HPLC只是分离的手段，如果保留时间太短，说明被分离物质在固定相上面的保留较差，就有可能与不保留的杂质混在一起而干扰待测物的测定，当然，这只是在使用UV、ELSD等特异性不是很强的检测器时的常见情况，但是如果使用荧光、质谱等特异性较强的检测器时，这种干扰会被大大降低或者排除。保留时间与使用的液相色谱
基于温度梯度的HPLC分析——温度梯度淋洗的HPLC方法
在近年来所开发的一系列液相色谱方法中，温度梯度淋洗方法有着独特的应用，尤其是在要求以纯水为流动相的色谱分析中。本文介绍了如何将已存在保留时间的模型发展成为温度梯度淋洗的HPLC方法。 在高效液相色谱（HPLC）的方法开发中，原则上都是采用反复试验法来建立的，实验室用户根据自己的经验来改变一
HPLC保留时间快速变化现象
1. 流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定2、泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出。3、流动相不合适，解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合
HPLC的故障及处理（二）
(五) 鬼峰1.进样阀残余峰 每次用后用强溶剂清洗阀，改进阀和样品的清洗。2.样品中未知物 处理样品。3.柱未平衡 重新平衡柱，用流动相作样品溶剂（尤其是离子对色谱）。4.三氟乙酸（TFA）氧化（肽谱）每天新配，用抗氧化剂。5.水污染（反相）通过变化平衡时间检查水质量，用HPLC级的水。(六) 基线