蛋白质间相互作用研究方法2：免疫共沉淀
相互作用在生理上的证实和探索l 通过免疫共沉淀确定结合蛋白1．用磷酸盐缓冲液洗30块10 cm培养板上的适宜细胞。刮去每块板上的细胞到1 ml冰冷的EBC裂解缓冲液中。2．将每毫升细胞悬液转移到微量离心管中，在微量离心机上4℃以最大速度离心15 min。3．收集上清（约30 ml）并加入30μg的适当抗体，4℃摇动免疫沉淀物1 h。4．加入0.9 ml的蛋白质A-Sepharose 悬液，4℃摇动免疫沉淀物30 min。5．用含900 mmol/L NaCl的NETN洗蛋白A-Sepharose混合物，再重复洗5次。最后，用NETN洗一次。6．吸出混合物的液体部分。加入800μl的1×SDS胶加样缓冲液到球珠中，煮沸4 min。7．将样品加入到大孔的不连续SDS-PAGE梯度胶中，在10 mA的恒定电流下电泳过夜。8．通过考马斯蓝染色观察蛋白质泳带。9．从胶上切下目标带，将其放到微量离心管中，用1ml 50%......阅读全文
蛋白质间相互作用研究方法2：免疫共沉淀
相互作用在生理上的证实和探索l 通过免疫共沉淀确定结合蛋白1．用磷酸盐缓冲液洗30块10 cm培养板上的适宜细胞。刮去每块板上的细胞到1 ml冰冷的EBC裂解缓冲液中。2．将每毫升细胞悬液转移到微量离心管中，在微量离心机上4℃以最大速度离心15 min。3．收集上清（约30 ml）并加入3
蛋白质间相互作用研究方法：免疫共沉淀
相互作用在生理上的证实和探索l 通过免疫共沉淀确定结合蛋白1．用磷酸盐缓冲液洗30块10 cm培养板上的适宜细胞。刮去每块板上的细胞到1 ml冰冷的EBC裂解缓冲液中。2．将每毫升细胞悬液转移到微量离心管中，在微量离心机上4℃以最大速度离心15 min。3．收集上清（约30 ml）并加入3
蛋白质间相互作用研究方法1
LY: 宋体; mso-ascii-font-family: 'Times New Roman'; mso-hansi-font-family: 'Times New Roman'">融合蛋白进行Far Western印迹来检测蛋白质-蛋白质相互作用 放射标记蛋白探
蛋白质间相互作用研究方法1
确定各种可能与目标蛋白相互作用的蛋白质，“撒大网” l 双杂交和其他双成分系统 第一阶段：诱饵-LexA融合蛋白的鉴定 诱饵-LexA融合蛋白的构建 1．将编码诱饵蛋白的靶DNA克隆到LexA融合载体的多聚接头处，以合成一种框架内的LexA融合基因。确定诱饵序列的羧基端存在翻
蛋白质间相互作用研究方法3：BIAcore
快速分析过去已确定的相互作用l 利用BIAcore通过表面胞质基因共振光谱学分析相互作用的蛋白质RAMc通过伯氨基与CM-5传感芯片表面的结合1．将CM-5传感芯片模块嵌入BIAcore仪器。2．全部采用过滤并除气的HEPES缓冲盐溶液。3．将分别含有NHS、EDC、乙醇胺和RAM Fc以
蛋白与蛋白相互作用分析—免疫共沉淀
实验原理免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，Co-IP）是以抗体和抗原之间的特异性结合以及细菌蛋白质的“protein A/G"特异性地结合抗体Fc段的现象而开发出来的方法，是研究蛋白质相互作用的经典方法，主要用于确定两种蛋白质在完整细胞内是否存在生理性相互作用。其原理是：当
免疫共沉淀实验方法
免疫共沉淀（co-immunoprecipitation）是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。 其原理是：当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质－蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质x
不用做免疫共沉淀也能检测间接相互作用？
生物被膜是由细菌胞外大分子包裹形成的有组织的细菌群体，其通常由细胞外聚合物组成，包括蛋白质、DNA和多糖，生物被膜能够帮助细菌抵御抗生素和宿主的免疫防御机制。值得注意的是，生物被膜会附着于导尿管、心脏植入物、消毒不充分的外科手术工具等医疗器械上，从而引起医院获得性感染。绿脓杆菌广泛分布于自然界及正常
染色质免疫共沉淀研究
真核生物的基因组DNA以染色质的形式存在，研究蛋白质与DNA在染色质环境下的相互作用是阐明真核生物基因表达机制的基本途径。与传统的EMSA技术相比，染色质免疫沉淀技术（ChIP）能真实完整地反映结合在DNA序列上的调控蛋白，是目前研究体内DNA与蛋白质相互作用的最佳方法。染色质免疫沉淀技术（chro
新方法能预测蛋白质与环境间的相互作用
众所周知，蛋白质是生命的基石，在所有的生物过程中发挥着关键的作用。因此，了解它们如何与环境相互作用，对于开发有效的治疗方法和设计人工细胞的基础至关重要。图片来源：Laura Persat / 2019 EPFL 近日，由瑞士联邦理工学院（EPFL）生物工程研究所蛋白质设计与免疫工程实验室(LP