采用AgilentFemtoPulse系统对不同基因组DNA提取进...(二)
Femto Pulse 系统使用基因组 DNA 165 kb扩展法来分离大于 80 kb 的提取 gDNA(图 1)。使用 Agilent ProSize 数据分析软件上的 Smear Analysis 选项卡分析 gDNA 的分子量分布。弥散条带分子量分布包含整个弥散条带范围内的浓度分布。酵母 gDNA 的弥散条带分子量分布和完整性随使用的提取方法不同而变化。使用提取方法 A、B、C、D、E 得到的基因组 DNA 样品的弥散条带分子量依次减小(表 1)。液相提取法 A 和 B 得到了分子量最大的完整 gDNA 弥散条带。用传统液体苯酚-氯仿提取法 (A) 提取的基因组 DNA 产生的完整 gDNA 较长,平均为163670 bp,而另一种液相提取方法 B 为103111 bp。方法 C 离心柱 gDNA 提取方法和方法 D 膜 gDNA 提取方法,在五种不同提取方法中表现出相似的弥散条带分子量分布结果。在使......阅读全文
动物组织基因组DNA提取试剂盒使用说明(二)
六、方案1. 动物组织DNA提取该方案适合于从1~20mg动物组织,如肝脏、脾脏、肾脏、老鼠尾巴等组织样品中提取DNA,以下离心操作都在室温进行。把1~20 mg组织样品(或10 mg肝脏、肺或脾脏)剪切成尽量小的碎片,并转移至1.5ml离心管中。加入230µl Buffer MTL和20µl
BIOG血清、血浆游离DNA提取试剂盒(病毒基因组DNA提取)...
BIOG血清、血浆游离DNA提取试剂盒(病毒基因组DNA提取)使用说明特点◎操作简便快速,可在半小时内获得理想的DNA;◎提取DNA纯度高,无抑制剂,A260/A280为1.7-1.9;◎产量更高,较国内同类产品高出20%;◎可用于血清、血浆等游离样本中DNA的提取;◎不含苯酚和氯仿等有毒溶剂,安全
动物组织细胞基因组DNA提取
一、实验原理真核生物的一切有核细胞(包括培养细胞)都能用来制备基因组 DNA。真核生物的DNA是以染色体的形式存在于细胞核内,因此,制备DNA的原则是既要将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离,又要保持DNA分子的完整。提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含SDS(十二烷基硫酸钠)和蛋白酶K的溶液
酵母基因组DNA简易高效提取方案
1. 10ml菌液过夜培养至饱和(OD600值为2-3) 2. 离心沉降细胞(Sorvall中以2000rpm的速度),然后以冷的、等体积的无菌蒸馏水洗涤 3. 将细胞沉淀在200μl 裂解缓冲液中重悬浮,然后加入约300μl 玻璃珠和200μl的1:1苯酚:氯仿混和液 4. 漩涡摇匀1-2min
单头昆虫基因组DNA的提取
实验概要一种简单快速提取单头小型昆虫基因组DNA的方法。主要试剂1. 蛋白酶K[美国Merck公司]2. 三羟甲基氨基甲烷(Tris)[美国Amresco公司]3. Taq DNA聚合酶及dNTP[NEB公司]4. 琼脂糖及溴化乙锭(EB)[美国Amresco公司]5. 乙二胺四乙酸钠(Na2EDT
动物细胞基因组DNA提取实验
实验原理真核生物的DNA是以染色体的形式存在于细胞核内,制备DNA将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离,同时保持DNA分子的完整。提取DNA的过程是指将分散好的组织细胞在含SDS(十二烷基硫酸钠)和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质,再用酚和氯仿/异戊醇抽提分离蛋白质,得到的DNA溶液经乙醇沉淀使DNA从
基因组DNA提取与PCR扩增技术
一、基因组DNA提取实验目的基因组DNA的制备是基因分析的前提。 本实验要求掌握基因组DNA提取的基本方法。实验原理 DNA在生物体内是与蛋白质形成复合物的形式存在的。核酸与蛋白质之间的结合力包括离子键、氢键、范德华力等,破坏或降低这些结合力就可把核酸与蛋白分开。 DNA、RNA所含有的嘌呤环和嘧啶
动物组织细胞基因组DNA提取
一、实验原理真核生物的一切有核细胞(包括培养细胞)都能用来制备基因组 DNA.真核生物的DNA是以染色体的形式存在于细胞核内,因此,制备DNA的原则是既要将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离,又要保持DNA分子的完整。提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含SDS(十二烷基硫酸钠)和蛋白酶K的溶液
利用CTAB法提取植物基因组DNA
一、实验原理 CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)是一种去污剂,可溶解细胞膜并能与核酸形成复合物,该复合物在高离子强度(0.7mol/L)的溶液里是可溶的,通过离心可将复合物同蛋白质、多糖类物质分开。在酚仿变性的条件下,去除残留的CTAB和蛋白质等杂质,然后利用异戊醇或无水乙醇将DNA分
提取基因组DNA的方法有哪些
1、苯酚氯仿抽提法优点是采用了实验室常见的试剂和药品,做起来成本比较低廉。缺点是由于使用了苯酚、氯仿等试剂,毒性较大,长时间操作对人员健康有较大影响,而且核酸的回收率较低,损失量较大,由于操作体系大,不同实验人员操作重复性差,不利于保护RNA,很难进行微量化的操作。 2、离心柱法离心柱法DNA提取它
植物和动物DNA提取方法有何不同
后面的步骤都一样,就是前处理所用的方法和试剂不太一样,植物需用机械或酶去壁,动物需用胰蛋白酶去膜。当然这里的动物DNA提取指的是动物组织DNA的提取,如果用动物血就要简单的多了。所谓前处理,指的就是裂解的过程,让细胞破碎,使DNA跑出来,然后对DNA进行收集。
分离基因组DNA和质粒DNA有哪些不同之处
分离质粒时,可以将质粒去得很干净。方法为:先用TE之类的试剂将菌液悬浮起来,再用NaOH和SDS将菌液裂解(起裂解作用的主要是NaOH,但此时,SDS可以与蛋白很好的结合)。第三步,加入酸中合第二步中的碱,并且将SDS沉淀下来,同时,SDS和蛋白也一起沉淀下来,而基因组上面有很多的蛋白,这样基因组就
提取基因组dna后,怎样判断dna的纯度和质量
用紫外分光光度计测od值a260/a280正常1.8左右如果制备的dna样品a260/a2802,说明样品中rna过高,可用rnase消化后,用酚、氯仿、异戊醇抽提,再用乙醇沉淀dna
三代测序的DNA提取和宏基因组学分析(二)
优势与局限这种DNA提取方法已被优化用于从人类粪便样本中提取高分子量(HMW)DNA,但也已在模拟微生物群落和细菌分离株上得到验证。我们希望该方案可以适用于其他样品类型,尽管可能需要对裂解前和裂解后步骤进行修改以解释特定于样品的制备和污染物清除的问题是必要的。机械裂解方法(如珠子击打)仍然是连续裂解
动物、植物、微生物中提取高质量的基因组DNA(二)
5. 仔细移取上清液至另一50ml离心管,加入1倍体积异丙醇,混匀,室温下放置片刻即出现絮状DNA沉淀。 6. 在1.5ml eppendorf中加入1ml TE。用钩状玻璃棒捞出DNA絮团,在干净吸水纸上吸干,转入含TE的离心管中,DNA很快溶解于TE。 7. 如DNA不形成絮状沉淀,则可用500
磁珠法提取基因组DNA的原理
(a) 磁珠法中的细胞裂解液是一种蛋白变性剂,可使动植物的细胞裂解,并使与DNA结合的蛋白质变性,DNA游离释放,磁球可以特异地吸附DNA,通过洗涤,去除DNA以外的RNA、蛋白质等杂质,再因洗脱液解离吸附在磁珠上的DNA,得到纯度和浓度均很高的DNA,可用于PCR扩增、酶切、分子杂交等。(b) 生
磁珠法提取基因组DNA的原理
a) 磁珠法中的细胞裂解液是一种蛋白变性剂,可使动植物的细胞裂解,并使与DNA结合的蛋白质变性,DNA游离释放,磁球可以特异地吸附DNA,通过洗涤,去除DNA以外的RNA、蛋白质等杂质,再因洗脱液解离吸附在磁珠上的DNA,得到纯度和浓度均很高的DNA,可用于PCR扩增、酶切、分子杂交等。(b) 生物
磁珠法提取基因组DNA的原理
(a) 磁珠法中的细胞裂解液是一种蛋白变性剂,可使动植物的细胞裂解,并使与DNA结合的蛋白质变性,DNA游离释放,磁球可以特异地吸附DNA,通过洗涤,去除DNA以外的RNA、蛋白质等杂质,再因洗脱液解离吸附在磁珠上的DNA,得到纯度和浓度均很高的DNA,可用于PCR扩增、酶切、分子杂交等。(b) 生
酵母菌基因组DNA的提取实验
实验材料 酵母菌试剂、试剂盒 SE缓冲液山梨醇EDTA溶菌酶PVP蛋白酶K缓冲液 Tris仪器、耗材 高速冷冻离心机台式离心机恒温水浴低温冰箱冷冻真空干燥器取液器电泳仪水平电泳槽紫外观测仪实验步骤 1. 1.5 ml 对数生长期细菌细胞。2. 离心,12 000 rpm,1-2 min。3.
如何从粪便中快速提取基因组DNA
粪便基因组DNA快速提取方法,无抑制物,可直接做PCR。采用硅胶膜技术从新鲜或冷冻人类粪便或其他样品类型(混有高浓度的PCR抑制剂)中抽提多至30μg 的基因组、细菌、病毒和寄生物DNA。独特的吸附树脂配合经优化的缓冲液可去除PCR抑制剂。方便的Aidlab 离心柱纯化过程只需40分钟,用于
使用离心机提取植物基因组DNA
植物基因组DNA提取使用什么样的离心机做?具体步骤怎么样?植物组织提取基因组DNA 一、材料 幼嫩叶子。 二、设备 移液器,冷冻高速离心机,台式高速离心机,水浴锅,陶瓷研钵,50ml离心管(有盖)及5ml和1.5ml离心管,弯成钩状的小玻棒。(这时选择设备的时候注意选择那种通用性强的,可以一机配多种
磁珠法提取基因组DNA的原理
(a) 磁珠法中的细胞裂解液是一种蛋白变性剂,可使动植物的细胞裂解,并使与DNA结合的蛋白质变性,DNA游离释放,磁球可以特异地吸附DNA,通过洗涤,去除DNA以外的RNA、蛋白质等杂质,再因洗脱液解离吸附在磁珠上的DNA,得到纯度和浓度均很高的DNA,可用于PCR扩增、酶切、分子杂交等。(b) 生
基因组DNA提取纯化的注意事项
大多数动物组织可以用裂解缓冲液和蛋白酶/蛋白酶 K 进行高效裂解。在加入裂解液之前需要将组织切成小块,有条件的话建议使用 TissueLyser 或研钵等提前进行均质化。骨骼肌,心脏,皮肤等组织含有收缩蛋白,结缔组织和胶原蛋白,所以利用蛋白酶 / 蛋白酶 K 进行充分消化是必须的。FFPE
GenStar基因组DNA提取纯化产品选择指南
基因组DNA相对稳定,故其提取方法也相对简单。通常细胞通过表面活性剂处理,释放出基因组DNA,经过蛋白酶和RNA酶消化后,经有机溶剂抽提和乙醇沉淀或过柱纯化即可获得一定量的基因组DNA。目前商品化的基因组DNA提取试剂盒分为溶液型和离心吸附柱型两种。溶液型产品价格经济,产率高,可获取适用于建立文库的
微量基因组DNA提取试剂盒说明
本试剂盒提供了高效、快速从各种微量生物样本中纯化得到较高浓度基因组DNA的方法,例如:微量血液、细胞、动物组织、干燥血迹、临床棉签、毛囊等。采用本公司特有的DNA-only硅胶膜离心柱和配方,搭配Foregene Protease,可以在20-80分钟提取到较高浓度、高质量的基因组DNA。专
酵母菌基因组DNA的提取实验
基本方案 实验材料 酵母菌 试剂、试剂盒
知识分享:动物细胞基因组DNA提取
实验原理 真核生物的DNA是以染色体的形式存在于细胞核内,制备DNA将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离,同时保持DNA分子的完整。提取DNA的过程是指将分散好的组织细胞在含SDS(十二烷基硫酸钠)和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质,再用酚和氯仿/异戊醇抽提分离蛋白质,得到的DNA溶液经乙醇沉
怎样对基因组DNA质量检测
怎样对基因组DNA质量检测用凝胶电泳看,有没有质白质和RNA等物质的污染,还可以测OD,用OD260/280来判断,当OD260/OD280< 1.8,表示蛋白质含量较高当OD260/OD280> 2.0,表示RNA含量较高当OD260/OD280=1.2.0,表示DNA较纯
采用带质谱功能的ACQUITY-Arc系统对果汁等饮料中...(二)
样品前处理所有样品均购自当地。所分析的果汁样品包括橙汁、苹果汁、菠萝汁、石榴汁和葡萄汁。所分析的酒精性饮料包5种啤酒、3种窖藏啤酒(其中1种不含酒精)、1种柠檬风味啤酒、1种烈性苹果酒、1种雪利酒、1种红葡萄酒和4种威士忌。啤酒样品经超声处理去碳酸化。所有样品均采用0.22 µm PVDF注射式过滤
方法三:酵母菌基因组DNA的提取
方法三:酵母菌基因组DNA的提取一:仪器:同方法一二:试剂:SE缓冲液(1M山梨醇,0.1MEDTA pH7.5);溶菌酶(50mg/ml);20%PVP;蛋白酶K缓冲液(10mM Tris pH7.6 0.5% SDS 1mM EDTA);其余同前三:操作 1.5ml 对数生长期细菌细胞