蛋白等电聚焦凝胶电泳技术（一）
原理等电聚焦凝胶电泳是依据蛋白质分子的静电荷或等电点进行分离的技术，等电聚焦中，蛋白质分子在含有载体两性电解质形成的一个连续而稳定的线性pH梯度中电泳。载体两性电解质是脂肪族多氨基多羧酸，在电场中形成正极为酸性，负极为碱性的连续的pH梯度。蛋白质分子在偏离其等电点的pH条件下带有电荷，因此可以在电场中移动；当蛋白质迁移至其等电点位置时，其静电荷数为零，在电场中不再移动，据此将蛋白质分离。等电聚焦中，只有在凝胶两端给以高电压时，才能获得较好的蛋白质条带分辨率，这就需要非常有效的凝胶冷却系统（否则会导致烧胶），即凝胶同期周围液体之间的热传递效率要高。由于平板胶热传递能力高，并可方便的同时比较多种蛋白质样品，所以平板胶用在等电聚焦上的居多。由于等电聚焦对蛋白质的电荷差异非常敏感，若要好的重复性，制备蛋白样品时一定要小心，要避免任何对蛋白质化学组成和结构的修饰。另外，蛋白质－脂类、蛋白质－蛋白质相互作用可引起电荷改变，进而导致等电点迁移......阅读全文
蛋白等电聚焦凝胶电泳技术（一）
原理等电聚焦凝胶电泳是依据蛋白质分子的静电荷或等电点进行分离的技术，等电聚焦中，蛋白质分子在含有载体两性电解质形成的一个连续而稳定的线性pH梯度中电泳。载体两性电解质是脂肪族多氨基多羧酸，在电场中形成正极为酸性，负极为碱性的连续的pH梯度。蛋白质分子在偏离其等电点的pH条件下带有电荷，因此可以在电场
蛋白等电聚焦凝胶电泳技术（一）
1.原理等电聚焦凝胶电泳是依据蛋白质分子的静电荷或等电点进行分离的技术，等电聚焦中，蛋白质分子在含有载体两性电解质形成的一个连续而稳定的线性pH梯度中电泳。载体两性电解质是脂肪族多氨基多羧酸，在电场中形成正极为酸性，负极为碱性的连续的pH梯度。蛋白质分子在偏离其等电点的pH条件下带有电荷，因此可以在
蛋白等电聚焦凝胶电泳技术
蛋白等电聚焦凝胶电泳技术可应用于：(1)蛋白质的分离提纯；（2）蛋白质组学研究。实验方法原理等电聚焦凝胶电泳是依据蛋白质分子的静电荷或等电点进行分离的技术，等电聚焦中，蛋白质分子在含有载体两性电解质形成的一个连续而稳定的线性pH梯度中电泳。载体两性电解质是脂肪族多氨基多羧酸，在电场中形成正极为酸性，
蛋白等电聚焦凝胶电泳技术
1.原理等电聚焦凝胶电泳是依据蛋白质分子的静电荷或等电点进行分离的技术，等电聚焦中，蛋白质分子在含有载体两性电解质形成的一个连续而稳定的线性pH梯度中电泳。载体两性电解质是脂肪族多氨基多羧酸，在电场中形成正极为酸性，负极为碱性的连续的pH梯度。蛋白质分子在偏离其等电点的pH条件下带有电荷，因此可以在
蛋白等电聚焦凝胶电泳技术
1.原理等电聚焦凝胶电泳是依据蛋白质分子的静电荷或等电点进行分离的技术，等电聚焦中，蛋白质分子在含有载体两性电解质形成的一个连续而稳定的线性pH梯度中电泳。载体两性电解质是脂肪族多氨基多羧酸，在电场中形成正极为酸性，负极为碱性的连续的pH梯度。蛋白质分子在偏离其等电点的pH条件下带有电荷，因此可以在
蛋白等电聚焦凝胶电泳技术
实验方法原理 等电聚焦凝胶电泳是依据蛋白质分子的静电荷或等电点进行分离的技术，等电聚焦中，蛋白质分子在含有载体两性电解质形成的一个连续而稳定的线性pH梯度中电泳。载体两性电解质是脂肪族多氨基多羧酸，在电场中形成正极为酸性，负极为碱性的连续的p
蛋白等电聚焦凝胶电泳技术（二）
6．电泳聚焦后处理测定pH梯度：1）将凝胶条切成0.5cm或1cm的小片；2）将每小片凝胶在1ml 10mM KCl中 浸泡30min；3）测读此KCl溶液的pH值、凝胶的固定：1）将凝胶于10%三氯乙酸中浸泡10min；2）换成1%三氯乙酸溶液继续浸泡至少2h以上，以去除载体两性电解质，浸泡过夜可
蛋白等电聚焦凝胶电泳技术（四）
9．其他要注意的事项1）等电聚焦后可用一根染色的细线（0.1mm）标出染料前沿的位置；2）不同品牌的载体两性电解质性质上有细微的差别，使用不同来源的载体两性电解质凝胶时候蛋白质分离样式略有差异，若要获得好的重复性一般不要更换载体两性电解质的品牌；3）通常，窄范围的pH梯度可以提高分辨率，但是需要时间
蛋白等电聚焦凝胶电泳技术（三）
8.常见问题及解释1） 若产生模糊条带则证明聚焦不完全，这可能是由于电泳中的问题或大分子蛋白质限制了其在凝胶中的迁移能力。若聚焦时间过长或过短，条带的分辨率会下降。增加电压梯度可以使带形更加锐利。高分子量蛋白质在琼脂糖凝胶中可以聚焦的更好。2） 产生歪斜的条带通常由于不正确的pH梯度，检查电极是否洁
蛋白等电聚焦凝胶电泳技术（二）
5.电泳操作步骤：1）将蛋白样品于等体积的2×上样缓冲液混合，10000×g离心5min以除去蛋白质沉淀；2）用微量注射器将蛋白质样品加入到上样空底部，注意不要溢出来。注意：对于考马斯亮蓝染色液来说，每个泳道10-30ug的蛋白混合粗提物（我们俗称粗抗原）或者5-10ug单一蛋白组分是较合理的上样浓
蛋白质技术专题：蛋白等电聚焦凝胶电泳技术（一）
等电聚焦凝胶电泳是依据蛋白质分子的静电荷或等电点进行分离的技术，等电聚焦中，蛋白质分子在含有载体两性电解质形成的一个连续而稳定的线性pH梯度中电泳。载体两性电解质是脂肪族多氨基多羧酸，在电场中形成正极为酸性，负极为碱性的连续的pH梯度。蛋白质分子在偏离其等电点的pH条件下带有电荷，因此可以在电场
蛋白质技术专题：蛋白等电聚焦凝胶电泳技术（二）
1） 若产生模糊条带则证明聚焦不完全，这可能是由于电泳中的问题或大分子蛋白质限制了其在凝胶中的迁移能力。若聚焦时间过长或过短，条带的分辨率会下降。增加电压梯度可以使带形更加锐利。高分子量蛋白质在琼脂糖凝胶中可以聚焦的更好。 2） 产生歪斜的条带通常由于不正确的pH梯度，检查电极是否洁净，是
蛋白质技术专题：蛋白等电聚焦凝胶电泳技术（二）
8.常见问题及解释1） 若产生模糊条带则证明聚焦不完全，这可能是由于电泳中的问题或大分子蛋白质限制了其在凝胶中的迁移能力。若聚焦时间过长或过短，条带的分辨率会下降。增加电压梯度可以使带形更加锐利。高分子量蛋白质在琼脂糖凝胶中可以聚焦的更好。2） 产生歪斜的条带通常由于不正确的pH梯度，检查电极是否洁
什么是等电聚焦电泳技术？
等电聚焦（IEF）是利用有pH梯度的介质分离等电点不同的蛋白质的电泳技术，特别适合于分离分子量相近而等电点不同的蛋白质组分，在区带电泳中分辨率最好。常用的pH梯度支持介质有聚丙烯酰胺凝胶、琼脂糖凝胶、葡聚糖凝胶等。
等电聚焦（isoelectric－focusing，IEF）电泳技术
等电聚焦（isoelectric focusing，IEF）是60年代中期问世的一种利用有pH梯度的介质分离等电点不同的蛋白质的电泳技术。由于其分辨率可达0.01pH单位，因此特别适合于分离分子量相近而等电点不同的蛋白质组分。⒈IEF的基本原理 在IEF的电泳中，具有pH梯度的介质其分布是从阳极
等电聚焦凝胶电泳原理
等电聚焦凝胶电泳是依据蛋白质分子的静电荷或等电点进行分离的技术，等电聚焦中，蛋白质分子在含有载体两性电解质形成的一个连续而稳定的线性pH梯度中电泳。载体两性电解质是脂肪族多氨基多羧酸，在电场中形成正极为酸性，负极为碱性的连续的pH梯度。蛋白质分子在偏离其等电点的pH条件下带有电荷，因此可以在电场中移
电泳分析常用方法等电聚焦电泳技术
等电聚焦(isoelectric focusing,IEF)是60年代中期问世的一种利用有pH 梯度的介质分离等电点不同的蛋白质的电泳技术。由于其分辨率可达0.01pH单位,因此特别适合于分离分子量相近而等电点不同的蛋白质组分。⒈IEF的基本原理 在IEF的电泳中,具有pH梯度的介质其分布是从阳极到
蛋白质印迹实验——从等电聚焦凝胶上转移蛋白
试剂、试剂盒甘氨酸TrisSDS甲醇实验步骤1. 溶液配置不连续缓冲系统阳极缓冲液Ⅰ：0.3 mol/L Tris，pH 10.4。阳极缓冲液Ⅱ：0.1 mol/L Tris，pH 10.4。阴极缓冲液：0.1 mol/L 精氨酸，0.01% ( W/V）SDS，pH 10.5。SDS 的存在有利于
等电聚焦和二维凝胶电泳实验（一）
试剂、试剂盒 样品缓冲液羟乙基二硫化物细胞裂解缓冲液SDS-PAGE 现成溶液二硫苏糖醇碘乙酰胺仪器、耗材 等电聚焦电泳系统二维SDS-PAGE 多凝胶系统恒温循环器IPG 干胶条溶胀盘上样杯旋转摇动混合器实验步骤 一、等电聚焦的基本原理等电聚焦 (IEF) 是一种能根据分子内的质子接受点的 p
聚丙烯酰胺凝胶平板等电聚焦电泳测定蛋白质等电点
一、目的：学习聚丙烯酰胺凝胶平板等电聚焦电泳测定蛋白质等电点的原理及方法。二、原理：等电点聚焦（isoelectric focusing, IEF）或简称电聚焦（electrofocusing），也曾称等电点分离聚焦电泳等。它是60年代中期出现的技术，克服了一般电泳易扩散的缺点。近年来，等电点聚
等电聚焦电泳（IEF）分离蛋白及测定蛋白质等电点
一、原理等电点聚焦（IEF）是在电场中分离蛋白质技术的一个重要发展，等电聚焦是在稳定的pH梯度中按等电点的不同分离两性大分子的平衡电泳方法。在电场中充有两性载体和抗对流介质，当加上电场后，由于两性载体移动的结果，在两极间逐步建立稳定的pH梯度，当蛋白质分子或其他两性分子存在于这样的pH梯度中时，这种
等电聚焦电泳法测定蛋白质的等电点
实验方法原理 实验原理蛋白质分子是典型的两性电解质分子。它在大于其等电点的 pH 环境中解离成带负电荷的阴离子，向电场的正极泳动，在小于其等电点的 pH 环境中解离成带正由荷的阳离子，向电场的负极泳动。这种泳动只有在等于其等电点的 pH 环境中，即蛋白质所带的净电荷为零时才能停止。如果在一个
等电聚焦电泳法测定蛋白质的等电点
等电聚焦（Isoelectric focusing，简称 IEF）是六十年代中期出现的新技术。近年来等电聚焦技术有了新的进展，已迅速发展成为一门成熟的近代生化实验技术。目前等电聚焦技术已可以分辨等电点（pI）只差 0.001pH 单位的生物分子。由于其分辨力高，重复性好，样品容量大，操作简便迅速，在
等电聚焦电泳法测定蛋白质的等电点
等电聚焦电泳法测定蛋白质的等电点 实验方法原理 实验原理蛋白质分子是典型的两性电解质分子。它在大于其等电点的 pH 环境中解离成带负电荷的阴离子，向电场的
双向凝胶电泳的等电聚焦相关介绍
蛋白质是两性分子，在不同的pH环境中可以带正电荷、负电荷或不带电荷。对每个蛋白质来说都有一个特定的pH，此时蛋白质的静电荷为零，此pH值即该蛋白质的等电点(pI)。将蛋白质样品加载至pH梯度介质上进行电泳时，它会向与其所带电荷相反的电极方向移动。在移动过程中，蛋白分子可能获得或失去质子，并且随着
固相pH梯度等电聚焦实验——等电聚焦
试剂、试剂盒丙烯酰胺单体贮液过硫酸铵贮液实验步骤打开循环水浴，设置冷却温度，一般为 10℃。将制好的固相 pH 梯度凝胶铺在冷却板上，注意正负极。其间涂以液体石蜡或煤油，避免气泡陷入，以保证胶板和冷却板之间的良好接触。用合适的电极溶液（参见表 7.7) 润湿滤纸电极条，分别放置凝胶的酸、碱侧。有的仪
载体两性电解质等电聚焦电泳技术介绍
载体两性电解质等电聚焦电泳技术是蛋白质理化性质研究的核心技术之一，载体两性电解质等电聚焦电泳的基本原理是利用蛋白质分子或其他两性分子等电点的不同，在一个稳定、连续的线性的p H梯度中进行蛋白质的分离和分析电泳检测方法。 是1966年由2位瑞典科学家Harry Rilbe和OlovVesterb
等电聚焦和二维凝胶电泳实验
等电聚焦和二维凝胶电泳实验 试剂、试剂盒 样品缓冲液 羟乙基二硫化物 细胞裂解缓冲液
等电聚焦和二维凝胶电泳实验
对于复杂混合物，如全细胞裂解物或富集的亚细胞组分，通过两步正交的分离 (orthogonalseperation)，二维凝胶 (2D 胶）电泳可以很好地分离成几百个至上千个单个蛋白质。第一次分离基于电荷，即使用变性等电聚焦电泳; 第二次分离基于表观分子质量，即使用变性十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电
等电点聚焦分离蛋白质实验
蛋白质可以在包被或非包被的毛细管柱分离，分离方案的选择取决于靶蛋白的特异属性。最重要的属性就是pl，这由一般的凝胶电泳或CE决定。等电点聚焦分离是CE分离的一种。实验方法原理等电点聚集（IEF） 分离可以通过 CE 轻易地达到，这也是选择随后用于蛋白质分离的缓冲液系统的有效的第一步。蛋白质和多肽是两