焦磷酸测序技术原理及应用
焦磷酸测序技术(pyrosequencing)是由Nyren等人于1987年发展起来的一种新型的酶联级联测序技术,焦磷酸测序法适于对已知的短序列的测序分析,其可重复性和精确性能与SangerDNA测序法相媲美,而速度却大大的提高。焦磷酸测序技术产品具备同时对大量样品进行测序分析的能力,为大通量、低成本、适时、快速、直观地进行DNA甲基化、SNP等单个/连续多个核苷酸变异进行实时定量检测提供了非常理想的技术操作平台。一. 焦磷酸测序技术原理焦磷酸测序技术是由4种酶催化的同一反应体系中的酶级联化学发光反应。焦磷酸测序技术的原理是:引物与模板DNA退火后,在DNA聚合酶(DNA polymerase)、ATP硫酸化酶(ATP sulfurytase).荧光素酶(1uciferase)和三磷酸腺苷双磷酸酶(Apyrase)4种酶的协同作用下,将引物上每一个dNTP的聚合与一次荧光信号的释放偶联起来,通过检测荧光的释放和强度,达到......阅读全文
分子诊断技术、PCR技术、基因测序技术的区别、原理(一)
分子诊断技术是指以DNA和RNA为诊断材料,用分子生物学技术通过检测基因的存在、缺陷或表达异常,从而对人体状态和疾病作出诊断的技术。其基本原理是检测DNA或RNA的结构是否变化、量的多少及表达功能是否异常,以确定受检者有无基因水平的异常变化,对疾病的预防、预测、诊断、治疗和预后具有重要意义。通俗简单
分子诊断技术、PCR技术、基因测序技术的区别、原理(二)
二、核酸序列测定 测序反应是直接获得核酸序列信息的唯一技术手段,是分子诊断技术的一项重要分支。虽然分子杂交、分子构象变异或定量PCR技术在近几年已得到了长足的发展,但其对于核酸的鉴定都仅仅停留在间接推断的假设上,因此对基于特定基因序列检测的分子诊断,核酸测序仍是技术上的金标准。 (一)第1代
一文读懂分子诊断技术、PCR技术、基因测序技术
四、定量PCR(quantitative PCR,qPCR) 相比于其他分子诊断检测技术,qPCR具有2项优势,即核酸扩增和检测在同一个封闭体系中通过荧光信号进行,杜绝了PCR后开盖处理所带来扩增产物的污染;同时通过动态监测荧光信号,可对低拷贝模板进行定量。正是由于上述技术优势,qPCR已经成
简述焦磷酸硫胺素的物化性质
熔点:250 °C (dec.)(lit.) FEMA:3322 储存条件:2-8°C 溶解度:H2O: 0.1 g/mL at 20 °C, clear, colorless 水溶解性:1 g/mL 敏感性:Light Sensitive & Hygroscopic Merck:1
焦磷酸酶的基本信息
焦磷酸酶是作用于双磷酸键上的酸酐水解酶。是一种催化一分子焦磷酸盐转化为两分子磷酸盐离子的酶。
异戊烯焦磷酸的基本信息
中文名称:异戊烯焦磷酸英文名称:isopentenyl pyrophosphate;IPP 定义:所属学科: 生物化学与分子生物学(一级学科) ;新陈代谢(二级学科)中文别名:IPP性质:低温下为白色结晶固体,室温下为无色液体。为游离基型引发剂,用作氯乙烯及其他单体聚合或共聚的低温引发剂。
关于焦磷酸钙的基本介绍
焦磷酸钙,是一种无机化合物,化学式为Ca2P2O7,主要用作营养增补剂、酵母养料、缓冲剂、中和剂,还可用作牙膏磨料、涂料填料、电工器材荧光体。 熔点:1230℃ 密度:3.09g/cm3 外观:白色结晶性粉末 溶解性:不溶于水,溶于稀盐酸和硝酸
电镀级焦磷酸钾的生产步骤
以85%的磷酸与48%的氢氧化钾为原材料,在中和反应釜中进行中和反应,控制料浆pH值在8.5~9.5,经精滤器过滤后,打入料浆储罐,维持储罐料浆温度在70℃~90℃;将储罐料浆打入蒸发浓缩装置进行浓缩,然后将浓缩液打入连续结晶装置进行连续结晶操作,经离心处理后,滤液返回到蒸发浓缩装置,磷酸氢二钾晶体
实时定量焦磷酸序列分析仪
实时定量焦磷酸序列分析仪是一种用于生物学、基础医学、临床医学领域的分析仪器,于2016年11月3日启用。 技术指标 1.样品通量:1-96个样本;2.灵活性:每次实验中,不同样本可进行不同的检测反应;3.无试剂及耗材浪费;4.检测器:CCD;5.检测速度:最快10分钟内完成96个样本的突变序
焦磷酸铁的功效和副作用
功效焦磷酸铁作为营养增补剂(铁质强化剂),用于强化奶粉婴儿食品及其他一般食品。其对胃肠道副作用小,吸收率比较高,铁锈味也比较小,人群接受度也比较高。 副作用焦磷酸铁需要按照推荐剂量进食,过多添加有可能会对肝肾造成损伤。
焦磷酸铜的合成方法介绍
焦磷酸铜合成方法;使用复分解法将硫酸铜和无水焦磷酸钠分别制成一定浓度的溶液,经过滤净化后,把硫酸铜溶液加入反应器中,在搅拌下将规定量的无水焦磷酸钠溶液滴加进行复分解反应,生成焦磷酸铜,控制pH值在5~5.5左右,过滤,用水漂洗,离心分离,干燥,制得焦磷酸铜成品。焦磷酸铜的用途:1. 主要用于无氰电镀
什么是高通量测序
高通量测序技术(High-throughput sequencing)又称“下一代”测序技术("Next-generation" sequencing technology),以能一次并行对几十万到几百万条DNA分子进行序列测定和一般读长较短等为标志。根据发展历史、影响力、测序原理和技术不同等,主要
DNA(脱氧核糖核酸)测序
DNA测序是确定特定DNA片段的核苷酸顺序的过程。到目前为止,大多数的DNA测序都是使用弗雷德里克·桑格开发的链终止方法进行的。这种技术利用修饰的核苷酸底物通过序列特异性终止DNA的合成反应。然而,新的测序技术,如焦磷酸测序正在获得越来越多的测序市场份额。焦磷酸测序比桑格DNA测序产生了更多的基
第一代DNA测序技术
第一代DNA测序技术用的是1975年由桑格(Sanger)和考尔森(Coulson)开创的链终止法或者是1976-1977年由马克西姆(Maxam)和吉尔伯特(Gilbert)发明的化学法(链降解). 并在1977年,桑格测定了第一个基因组序列,是噬菌体X174的,全长5375个碱基[1]。自此,人
五花八门的DNA甲基化检测(上)
近年来涌现出不少DNA甲基化的检测技术,少说也有十几种。大致可以分为两类:特异位点的甲基化检测和全基因组的甲基化分析,后者也称为甲基化图谱分析(methylation profiling)。下面生物通给大家介绍一些常用的方法。 特异位点的甲基化检测 甲基化特异性PCR(MS-PC
艺高人胆大!相当“嚣张”的测序技术——单细胞器测序
线粒体疾病如何诊断和治疗?(运用成熟的单线粒体分离技术在显微镜下挑取单个小鼠线粒体。) 宾夕法尼亚大学医学院James Eberwine领导的研究小组刚开发了一种适用于单个线粒体的分离和测序技术“单线粒体测序(single-mitochondrion sequencing)”利用这种新方法他们
与Sanger测序齐名的另一种测序技术为何消失?
在20世纪70年代中期,两种直接测序DNA的技术被开发出来,其中一种是广为人知且沿用至今的Sanger双脱氧链终止方法,另一种是现在几乎被人遗忘的化学测序方法,Maxam–Gilbert测序。 这种测序方法是由美国哈佛大学的Walter Gilbert和他的学生Allan Maxam开发的。1
三代测序技术实现44倍测序序列连续性提升
2019年9月3日,PNAS(美国科学院院报)在线发表了上海交通大学王文琴副教授团队课题组题为“Plant evolution and environmental adaptation unveiled by long-read whole-genome sequencing of Spirodel
DNA测序技术(非同位素银染测序系统操作技术与T7-DNA聚...
3、质粒膜板制备:参照第一章所述的方法。(二)超螺旋质粒DNA 的碱变性:1、取4mg(约2pmol)超螺旋质粒DNA 至一eppendorf管中,加无离子水到终体积18ml。2、加2ml 2mmol/L NaOH/2mmol/L EDTA 溶液,置于室温(25℃下)保温5分钟。3、加2ml 2mo
高通量测序
高通量测序技术又称“下一代”测序技术,以能一次并行对几十万到几百万条DNA分子进行序列测定和一般读长较短等为标志。高通量测序包括:大规模平行签名测序、聚合酶克隆、454焦磷酸测序、离子半导体测序和DNA 纳米球测序等技术。 高通量测序技术是对传统测序一次革命性的改变,一次对几十万到几百万条DN
基因测序技术产业新浪潮
基因测序也称DNA测序,是现代生物学研究中重要的手段之一。基因测序技术经过了三个发展阶段。第一代DNA测序技术是1975年由桑格(Sanger)和考尔森(Coulson)提出的链终止法。第一代技术准确率高,读取长,是至今唯一可以进行“从头至尾”测序的方法,但存在成本高、速度慢等方面的
新测序技术将加快植物抗病育种
最近,英国剑桥大学塞恩斯伯里实验室(TSL)和基因组分析中心(TGAC)的一个科学家小组,开发出一种新方法,可加速植物抗病基因的分离。该研究小组也在龙葵(Solanum americanum,马铃薯的一个野生近缘种)中发现了一个全新的枯萎病抗性基因。 植物病原体(如晚疫病)能够快速进化以战胜宿
生物芯片技术应用与基因测序
基因芯片利用固定探针与样品进行分子杂交产生的杂交图谱而排列出待测样品的序列,这种测定方法快速而具有十分诱人的前景。研究人员用含135000个寡核苷酸探针的阵列测定了全长为16.6kb的人线粒体基因组序列,准确率达99%。用含有48000个寡核苷酸的高密度微阵列分析了黑猩猩和人BRCA1基因序列差异,
基因测序技术的主要功能
基因测序只是基因检测的方法之一,其又叫基因谱测序,是国际上公认的一种基因检测标准。基因测序广为人知的还有针对唐氏综合征筛查的无创产前基因检测。只需要采集孕妇的外周血,通过对血液中游离DNA(包括胎儿游离DNA)进行测序,并将测序结果进行生物学分析,从而得出胎儿是否患有染色体数目异常的疾病,包括常见的
Science:单细胞分析?并行测序技术可以
近日,一项发表于国际杂志Science上的研究论文中,来自美国的研究者描述了一种新型的大规模并行技术,通过利用新一代测序技术来在单细胞水平上实现对基因表达的监测;研究者表示,单细胞分析对于理解人类造血系统的必要性及重要性不断凸显,如果没有这种分析的话,来自少许细胞的大量表达改变就和来自许多细胞的
Nature-Methods:极准确的新测序技术
传统的高通量测序会产生不少错误,掩盖基因组中的罕见突变。前不久科学家们开发了一种新测序法,能够成功从背景噪音中分离出信号,实现极为准确的测序。 肿瘤是异质性细胞的混合体,测序可以检测其中的罕见突变,但成本较高而且容易出现错误。华盛顿大学的研究团队为此开发了新测序技术,将靶序列纯化与高精度的DN
Nat-Methods发布新的DNA测序技术
最近,英国诺丁汉大学的科学家们首次证明,我们有可能实时地、有选择性地测定DNA序列片段,从而大大减少了分析生物样品所需的时间。 在Nature子刊《Nature Methods》上发表的一篇论文,描述了一种新的技术,可高度选择性的进行DNA测序,这种技术被称为“'Read Until”。这种方
纳米孔技术有望颠覆DNA测序市场
Christopher Mason有一个喜欢在会议上展示的技巧。通过从志愿者手机上收集的化验样本获取DNA,他和同事能在1个小时内现场进行谱系分析,甚至详细描述出捐赠者一天的生活细节。“我们能从手机上的残留物预言谁刚吃了一个橘子或者谁吃了猪肉。”美国纽约威尔康奈尔医学院计算生物学家Mason表示
新测序技术将加快植物抗病育种
最近,英国剑桥大学塞恩斯伯里实验室(TSL)和基因组分析中心(TGAC)的一个科学家小组,开发出一种新方法,可加速植物抗病基因的分离。该研究小组也在龙葵(Solanum americanum,马铃薯的一个野生近缘种)中发现了一个全新的枯萎病抗性基因。 植物病原体(如晚疫病)能够快速进化以战胜宿
DNA测序技术的现状和发展(四)
1.1.3.2 模板制备程序完全的体外大规模模板制备工作是达成高通量、低价格测序技术的前提。已广泛使用的乳液PCR扩增技术就是一种很好的方法。不过,由于很难在热循环测序反应中保证乳液微滴的稳定性,因此最开始实验的模板扩增方法是恒温扩增法(isothermal)。乳液PCR不需要借助细菌的帮助就能扩增