免疫组化实验原理和步骤（一）
实验原理：抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性，免疫组织化学正是利用了这一原理。先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来，以此作为抗原或半抗原，通过免疫动物后获得特异性的抗体，再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。由于抗原与抗体的复合物是无色的，因此还必须借助于组织化学的方法将抗原抗体结合的部位显示出来，以其达到对组织或细胞中的未知抗原进行定性，定位或定量的研究。实验材料：（一）仪器设备18cm不锈钢高压锅或电炉或用微波炉、水浴锅（二）试剂1、PBS缓冲液（ph7.2―7.4）：NaC137mmol/L、KCl 2.7mmol/L 、Na2HPO4 4.3mmol/L、KH2PO4 1.4mmol/L。2、0.01mol/L柠檬酸钠缓冲液（CB,ph6.0,1000ml）：柠檬酸三钠3g、柠檬酸0.4g。3、0.5mol/L EDTA缓冲液（ph8.0）：700ml水中溶解186.1g EDTA& 8226；2......阅读全文
免疫组化实验
实验方法原理 免疫组织化学又称免疫细胞化学，是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来，借助显微镜(包括荧光显微镜、电子显微镜)的显像和放大作用，在细胞、亚细胞水
免疫组化实验原理
首先来谈一下免疫组织化学（IHC, Immunohistochemistry）、免疫细胞化学（ICC, Immunocytochemistry）和免疫荧光(IF, immunofluorescence technic )的共通之处和区别。 平常说的 免疫组化 就是用石蜡切片做的免疫组织
石蜡切片免疫组化实验
即用型(Envision)快速酶免疫组化二步法免疫组化可应用于：（1）确定组织细胞内抗原 (多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究；（2）诊断异常细胞，指导治疗。实验方法原理根据聚合酶技术把辣根过氧化物酶抗鼠或/和抗兔IgG分子结合在多聚酶上形成多聚物分子,其与待检的抗原特异性的结合后，加入
石蜡切片免疫组化实验
即用型(Envision)快速酶免疫组化二步法 链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结SP法 卵白素-生物素-过氧化物酶复合物（ABC）法 链霉亲和素—生物素—过氧化物酶复合物（SABC）法
免疫组化实验方法
一、免疫组化（Immunohistochemistry,IHC/ Immunocytochemistry, ICC）原理免疫组化是应用免疫学基本原理--抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂 （荧光素、酶、金属离子、同位素） 显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质
石蜡切片免疫组化实验
实验方法原理 根据聚合酶技术把辣根过氧化物酶抗鼠或/和抗兔IgG分子结合在多聚酶上形成多聚物分子,其与待检的抗原特异性的结合后，加入底物显色。实验材料 石蜡切试剂、试剂盒 PBS柠檬酸盐缓冲液蒸馏水增强剂酶标抗鼠 兔聚合物苏木素酒精二甲苯树胶盐酸二氨基联苯胺仪器、耗材 烘箱微波盒塑料切片架显微镜胶头
石蜡切片免疫组化实验2
链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结SP法实验方法原理SP（streptavidin-perosidase）法，即链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法。SP法是最常使用的方法。试剂、试剂盒二甲苯酒精PBS双氧水枸橼酸缓冲液羊血清工作液辣根过氧化物酶链霉素卵白素苏木素DAB仪器、耗材冰箱显微镜烧杯玻璃缸
石蜡切片免疫组化实验4
实验方法原理SABC(Strept Avidin-Biotin Complex)法是一种显示组织和细胞中抗原分布的简便而敏感的免疫组化染色方法，是众多免疫组织化学方法的一种。SABC法：一抗+ 生物素标记二抗+ 滴加试剂SABC（链霉卵白素+ 辣根酶标记生物素）+ 辣根酶底物显色。目前常用的亲和素从
石蜡切片免疫组化实验3
卵白素-生物素-过氧化物酶复合物（ABC）法实验材料蜡块切片试剂、试剂盒多聚甲醛蒸馏水蔗糖过氧化氢甲醇PBS酒精KPBS牛血清白蛋白叠氮纳一抗二抗仪器、耗材冰箱显微镜烧杯实验步骤1. 4%多聚甲醛常规灌注固定，取材并置20%蔗糖溶液（4℃）中过夜。蜡块制作。切片，贴片。0.01 M KPBS清洗5
石蜡切片免疫组化实验步骤
脱蜡和水化1. 将切片依次浸入二甲苯Ⅰ10 min，二甲苯Ⅱ（10 min）。2. 再次浸入无水乙醇Ⅰ（5 min）-无水乙醇Ⅱ（5 min）-95%酒精（5 min）-80%酒精（5 min）-70%酒精（5 min），然后去离子水冲洗2次，每次2 min。 抗原修复 (可选)3. 将组织切片放入
免疫组化双染实验protocol
第一抗体的染色： 1、 将切片浸在3％H2O2甲醇溶液（新鲜配制）中10分钟，PBS冲洗2分钟×3次 2、 加100ul（2滴）血清封闭溶液（试剂1）到切片上，室温孵育10分钟，倒掉（不能冲洗） 3、 加入一抗（按照说明推荐浓度和孵育条件） 4、 使用含有0.05％吐温20的PBS( TPB
免疫组化实验注意事项
当免疫组化染色没有出现预期结果时，应系统地查找原因，而每一次只能排除一种可能的原因。那么在做免疫组化实验注意事项有哪些呢？下面我们来详细了解一下： 对照/标本无染色 ① 确认是否忽略了应该加的某种试剂，包括一抗、二抗、三抗及底物等。 ② 确认所有的试剂是否按正确的顺序加入，是否孵育
免疫组化双染实验流程
一、脱蜡和水化方法同SP法。二、第一抗体的染色1、将切片浸在3%H2O2甲醇溶液（新鲜配制）中10 min，PBS冲洗3 min×3次；2、加100 ul（2滴）血清封闭溶液（试剂1）到切片上，室温孵育10 min，倒掉（不能冲洗）；3、加入一抗（按照说明书推荐浓度和孵育条件）；4、使用含有0.05
免疫组化实验原理和步骤
实验原理： 抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性，免疫组织化学正是利用了这一原理。先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来，以此作为抗原或半抗原，通过免疫动物后获得特异性的抗体，再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。由于抗原与抗体的复合物是无色的，因此还必须借助于组织化学的方法将抗原
免疫组化的实验试剂及实验步骤
一、试剂（1）PBS缓冲液（pH7.2～7.4）：NaCl 137mmol/L，KCl 2.7mmol/L，Na2HPO4 4.3mmol/L， KH2PO4 1.4mmol/L。（2）0.01mol/L柠檬酸盐缓冲液（CB，pH6.0，1000ml）：柠檬酸三钠 3g，柠檬酸 0.4g。（3）0.
免疫组化
免疫组织化学又称免疫细胞化学，可以用于：（1）显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应；（2）是对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。实验方法原理带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原进行定性、定位、定量测定的
免疫组化
一，免疫组织化学简介免疫组织化学又称免疫细胞化学，是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应炕原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来，借助显微镜(包括荧光显微镜、电子显微镜)的显像和放大作用，在细胞、亚
免疫组化
一，免疫组织化学简介免疫组织化学又称免疫细胞化学，是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应炕原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来，借助显微镜(包括荧光显微镜、电子显微镜)的显像和放大作用，在细胞、亚
免疫组化技术实验原理及分类
免疫组化技术实验原理： 抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究。 众所周知，抗体与抗原之间的结合具有高度的特异性。免疫组化正是利用这一特性，即先将
免疫组化实验中常用染色方法
根据标记物的不同分为免疫荧光法，免疫酶标法，亲和组织化学法，后者是以一种物质对某种组织成分具有高度亲合力为基础的检测方法。这种方法敏感性更高，有利于微量抗原（抗体）在细胞或亚细胞水平的定位，其中生物素—抗生物素染色法最常用。
免疫组化实验操作步骤有哪些
免疫组化实验所需试剂 1）PBS缓冲液（pH7.2~7.4）：NaCl 137mmol/L,KCl 2.7mmol/L,Na2HPO4 4.3mmol/L, KH2PO4 1.4mmol/L. 2）0.01mol/L柠檬酸盐缓冲液（CB,pH6.0,1000ml）：柠檬酸三钠
免疫组化实验操作步骤有哪些？
免疫组化实验所需试剂 1）PBS缓冲液（pH7.2~7.4）：NaCl 137mmol/L,KCl 2.7mmol/L,Na2HPO4 4.3mmol/L, KH2PO4 1.4mmol/L. 2）0.01mol/L柠檬酸盐缓冲液（CB,pH6.0,1000ml）：柠檬酸三钠 3g,
免疫组化实验原理和步骤（三）
免疫组化技术的关键问题1.组织处理恰当的组织处理是做好免疫组化染色的先决条件，也是决定染色成败的内部因素，在组织细胞材料准备过程中，不仅要求保持组织细胞形态完整，更要保持组织细胞的抗原性不受损戒弥漫，防止组织自溶。如果出现自溶坏死的组织，抗原已经丢失，即使用很灵敏的检测抗体和高超的技术，也很难检出所
如何实现完美的免疫组化实验
（一）、仪器设备1）18cm不锈钢高压锅或电炉或医用微波炉；2）水浴锅（二）、试剂1）PBS 缓冲液（pH7.2～7.4）：NaCl 137mmol/L，KCl 2.7mmol/L，Na2HPO4 4.3mmol/L， KH2PO4 1.4mmol/L。2）0.01mol/L柠檬酸盐缓冲液（CB，p
小鼠组织切片免疫组化实验步骤
材料二甲苯 酒精（100％，95％） EDTA抗原修复工作液（pH8.0，稀释50倍使用） 0.5M Tris-NaCl (TBS) pH7.4（稀释10倍使用） DAB显色液（临用前配制：试剂盒A、B、C各50ul，于1ml水中混匀）。方法1. 石蜡切片置60℃烘箱中烘烤过夜 2.
免疫组化实验原理和步骤（二）
免疫组化问题解答1、染色过强 a 抗体浓度过高戒孵育时间过长 。降低抗体滴度、抗体孵育时间：室温1小时、或4度过夜 b 孵育温度过高超过37度。 一般在室温20-28度 c DAB显色时间过长戒浓度过高 显色时间不超过5-12分钟，以显微镜下观察为准。2、非特异性背景染色a 操作过程中冲洗不充分 ：
小鼠组织切片免疫组化实验步骤
实验概要免疫组化，是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学
免疫组化实验原理和步骤（五）
（6）结果判断免疫组化的结果判断有两种方法：一是对以检测结果阳性细胞指数来定性(如核抗原的标记)，判断方法是以一个规野中阳性细胞数不总细胞癿百分比，再取10个相同视野算取平均指数。另一种方法以染色阳性强度和阳性检出率相结合而定，一般阳性细胞数在0-25为阴性，25-50为十，50-75为十十，75以
免疫组化技术实验原理及分类
免疫组化技术实验原理： 抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究。众所周知，抗体与抗原之间的结合具有高度的特异性。免疫组化正是利用这一特性，即先将组织或细胞中的某
小鼠组织切片免疫组化实验步骤
实验概要免疫组化，是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学