大分子量蛋白200KD，在做WB要注意什么？
1）做200kd蛋白的WB时要注意，分离胶最好选择>7%的；剥胶时要小心；2）转移时间需要相应延长；要做分子量参照（否则出现杂带不知道如何分析）；3）转膜液中甲醇含量可适当降低，推荐使用湿装转膜效率更高！......阅读全文
尿蛋白有“+”要注意！
尿常规检查主要看两个指标是否患有肾小球肾炎，一是看蛋白质，二是看红细胞。正常尿常规检查通常无蛋白，或仅有微量，当蛋白质有“+”号就要立即去专科就诊。 正常人尿中有微量蛋白，正常范围内定性为阴性，记为（-）。尿中蛋白质含量多达0.15g/24h以上时，如检测尿蛋白﹥150mg/d，说明人
如何挑选合适的βActin内参抗体？
如何选择合适的β-Actin抗体？ 现在市场上对于内参抗体选择是比较多，但是也需要遵循一定的原则，那怎么去找到适合自己实验的β-Actin抗体呢？首先，我们需要考虑目的蛋白的大小，我们推荐内参要与检测的目的蛋白的分子量最好相差5KD以上，因此你需要根据你目的检测蛋白的分子量来选择合适的内参，由于β-
蛋白质的分子量是多少
一般来说，蛋白质的分子量需在8000以上。若分子量再小一些就属于多肽的范围了。分子质量：设氨基酸的平均相对分子质量为a，含b个二硫键，蛋白质的相对分子质量=ma-18(m-n)-2b，也即氨基酸的平均分子量x氨基酸总的分子数（肽链数+肽键数）-18x脱水缩合的水分子数（和肽键数相等）。
使用BiopharmaLynx软件分析蛋白完整分子量
对蛋白药的分子量进行测定，可以在完整蛋白水平，对其进行宏观表征，以初步确定蛋白的表达是否正确。BiopharmaLynxTM软件中，专门设计了对蛋白整体分子量测定及表征的多种功能，它具有以下特点。 ■ 通过原始质谱数据，计算出蛋白分子量。■ 自动标注蛋白的各种不同修饰形态。■ 以直观方式，比较样品与
怎么算蛋白质的分子量
蛋白质的分子量可以通过多种方法计算，包括使用在线工具、软件或手动计算。蛋白质是由氨基酸残基通过肽键连接的大分子，其分子量是蛋白质的一个重要理化参数，通常以道尔顿（Da）为单位。下面将详细探讨计算蛋白质分子量的不同方法和步骤：基础估算法氨基酸数量估算：一个基本的估算方法是将氨基酸的数量乘以一个平均分子
GAPDH抗体|GAPDH抗体大全指导您购买合适的GAPDH抗体
GAPDH抗体大全——总有一款合适的GAPDH抗体在Western Bloting实验中，可能存在总蛋白浓度测定不准确，或者蛋白质样品在电泳前上样时产生的样品间的操作误差；这些误差可以通过测定每个样品中实际转到膜上的内参，比如内参GAPDH的含量来进行校正。当然除了GAPDH抗体，β-Actin抗体
wb电泳为什么不在一条线上
wb电泳不在一条线上的原因：1、样本本身含有高盐。2、积层胶长度不足，一般样品1-2cm足矣。但是如果样本含有高盐可以考虑将积层胶加长到4cm左右。3、缓冲液需要更换。使用多次的Buffer缓冲能力会大打折扣，如果样品珍贵难得推荐用新鲜配制电泳缓冲液，反之用3次就丢弃。4、上样量有关。5、电压不要太
WB条带大小和蛋白预测八字不合？
实验室玄学千千万，预测和结果不符占一半。WB实验是各位小伙伴们，时常光顾的一个实验。但就是这样一个初级又常用的实验，却会出现各种稀奇古怪的问题。怎么我的条带每次都不一样！ 比如在WB实验鉴定蛋白时，我们得到的蛋白质条带大小常常会和预测值有所偏差。这是身患“强迫症”的小伙伴们不能忍的。猛男落泪，谁来看
wb－蛋白在重复实验时还需要煮吗
wb 蛋白在重复实验时还最好是再煮一下在第一次wb时候，蛋白样品加入上样缓冲液并煮沸。如果重复实验是重新取样加上样缓冲液的话，应该是要重复之前的步骤，煮沸后上样如果重复实验没有重新取样用了之前的样品，那么因为SDS温度较低是可能会有部分析出，所以重复实验前最好还是再煮一下
【锐赛小课堂】WB生物样本总蛋白抽提
锐赛小课堂1222-158 一、贴壁细胞蛋白提取 A 1..将水浴锅的温度调至100℃，等水浴锅达到100℃温度后，取出需要收样的细胞的培养皿或者孔板。 2.将缓冲液（1Xloading buffer）置于100℃水浴锅中预热10min。 （loding buffe
wb－蛋白在重复实验时还需要煮吗
蛋白样品的制备是蛋白质组研究的第一步，无论后续采用怎样的分离或鉴定手段，样品制备都是关键步骤。因此，为了完全分析所有的细胞内蛋白，组织与细胞必须进行有效的破碎。本文在此介绍几种较为常见的方法。变性条件——SDS LB直接裂解：用常温或者高温预热过（预热更有利于阻止蛋白水解或者磷酸酶去磷酸化，但容易遗
简单两步改善WB中膜蛋白的检测
俄罗斯科学院的研究人员近日开发出一种简单的方法，可改善免疫印迹中膜蛋白的检测。他们在新一期的《BioTechniques》上介绍了这个成果。 利用Western blot，人们可精确鉴定复杂样品中的特定蛋白质。然而，每条泳道可加入的蛋白总量是有限的，这就限制了低丰度蛋白的检测。因此，低丰度蛋白
半干转印与湿式转印的区别－|－WEALTEC－威泰克
刚接触 Western Blot 不久的用户，在选购 WB 设备时，经常会遇到仪器选型的问题：为什么常见的蛋白质电泳的转膜有两种方式可以选择，干式和湿式，那么哪种方法更适合我们呢？这里我们结合美国 WEALTEC 公司的 E-Blotter 湿转槽和 YRDIMES 快速半干转印槽举例说明。
βActin抗体推荐—Abbkine高效价的BetaActin内参抗体
Actin即肌动蛋白，是细胞的一种重要骨架蛋白。Actin大致可分为六种，其中四种是不同肌肉组织特异性的，其余两种广泛分布于各种组织中，包括 β-actin和γ-non-muscle actin。β-actin作为内参是得到了公认的，这是针对大多数组织和细胞来说的，它广泛分布于细胞浆内，表达
蛋白质分子量测定的相关介绍
随着质谱技术的发展，分子量的测定已从传统的有机小分子扩展到了生物大分子。MALDI-MS技术以及极高的灵敏度、精确度在蛋白质分析中得到了广泛的应用。该技术不仅可测定各种疏水性、亲水性和糖蛋白的分子量，还可以测定蛋白质混合物的分子量。这可认为是蛋白质分析领域的一项重大突破。
单向电泳小分子量蛋白无条带原因
小分子量的蛋白质比较容易扩散，所以不容易聚集成清楚的条带，可以试着将分离胶的电压加大，电压大可以使条带聚集的比较好，但是也会出现另外一个问题，就是分辨率会降低，可能会出现多条带挤在一起，不容易分开，应该多摸索一下，找出最适合你的蛋白的电泳条件。
如何查找蛋白质的分子量大小
www.uniprot.orgUniProt是一个集中收录蛋白质资源并能与其它资源相互联系的数据库，也是目前为止收录蛋白质序列目录最广泛、功能注释最全面的一个数据库。 UniProt是由欧洲生物信息学研究所（European Bioinformatics Institute）、美国蛋白质信息资源（P
如何查找蛋白质的分子量大小
www.uniprot.orgUniProt是一个集中收录蛋白质资源并能与其它资源相互联系的数据库，也是目前为止收录蛋白质序列目录最广泛、功能注释最全面的一个数据库。 UniProt是由欧洲生物信息学研究所（European Bioinformatics Institute）、美国蛋白质信息资源（P
测定蛋白质分子量的常用方法
知道蛋白质分子量、氨基酸组成计算器http://www.proteomics.com.cn/tools/mwcal/一般的方法：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的分子量[原理]十二烷基硫酸钠（Sodium dodecyl sulfate, 简称SDS）-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的分子量，
SDSPAGE蛋白质电泳常见问题分析
Q：SDS-PAGE电泳的基本原理? A：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS(十二烷基硫酸钠)，SDS会与变性的多肽，并使蛋白带负电荷，由于多肽结合SDS的量几乎总是与多肽的分子量成正比而与其序列无关，因此SDS多肽复合物在丙稀酰胺凝胶电泳中的迁移率只与多肽的大小有
告别黑白迎接色彩荧光技术在WesternBlot显影上的应用2
4.一致性和可重复性高 荧光信号是仅取决于目标抗原的量的静态值，而许多变量影响通过膜曝光获得的化学发光信号。一些变量（例如，酶底物反应）难以控制导致不一致和不可重复的结果。 Schutz-geschwender等（2004）报道了荧光蛋白印迹实验重复的标准偏差
核内参PCNA抗体用于细胞核内参的PCNA单抗
增殖细胞核抗原（Proliferating Cell Nuclear Antigen简称PCNA）由Miyachi等于1978年在 SLE（系统性红斑狼疮）患者的血清中首次发现并命名，因其只存在于正常增殖细胞及肿瘤细胞内而得名。PCNA是一种分子量为36KD的蛋白质，在细胞核内合成，并存在于
全自动Wes蛋白印迹让大分子量蛋白不再“难测”
不管是基础研究还是转化医学，特定样本中特定蛋白质的表达情况可为研究者提供丰富的生物学信息。如临床样品中疾病特异性Biomarker的检测定量可作为疾病诊断、病患分型及疗效评估的重要参考依据；药物筛选活动中，也常常通过药物靶标及其下游通路蛋白的表达量或修饰状态来评估潜在的药效。著名的抗白血病药物G
转膜时大分子量和小分子量蛋白，该如何选择膜孔径
对所有的蛋白，我们推荐用 Nitrocellulose Sandwiches #12369（0.2 μm）的杂交膜去转膜，尤其是分子量低于 30 KD 的蛋白，建议使用较高浓度（12-15%）的蛋白分离胶并缩短转膜的时间，建议在 1 小时以内。大分子量蛋白（> 150 kDa）推荐使用 tris-a
WB跑胶后没有条带是什么原因
提取细胞蛋白加1ml裂解液实在是有点多，你可以减少到200-300ul试试，提取蛋白后做个BCA蛋白定量，在做后续的考蓝染色，确定蛋白没有问题再电泳转膜
在WB实验中为什么需要使用内参抗体？
要检测一个基因的表达产物是否正确，或者比较表达产物量的相对变化，首选方法是Western Blot。虽然，顺利的时候Western Blot做起来很简单，可不顺的时候也很令人心烦――做不出结果啦、假阳性啦、结果出现多条带啦、到底是一抗有问题还是二抗有问题啦……毕竟，作为一种有活性的生物大分子
在WB实验中为什么需要使用内参抗体？
在WB实验中为什么需要使用内参抗体？进口内参抗体——在WB实验中为什么需要使用内参抗体？ 要检测一个基因的表达产物是否正确，或者比较表达产物量的相对变化，首选方法是Western Blot。虽然，顺利的时候Western Blot做起来很简单，可不顺的时候也很令人心烦――做不出结果啦、假阳性
蛋白质免疫印迹（Western－Blot，WB－）——Western印迹法
实验材料蛋白质样品试剂、试剂盒裂解液PBSG 250考马斯亮蓝溶液NaClSDS上样缓冲液电泳缓冲液转移缓冲液丽春红染液封闭液TBSTTBS洗脱抗体缓冲液显影液定影液抗体化学发光试剂仪器、耗材高压锅玻璃匀浆器高速离心机分光光度仪-20℃低温冰箱垂直板电泳转移装置恒温水浴摇床多用脱色摇床实验步骤一、操
关于WB实验中蛋白样品制备的常见问题分析
WB实验又称免疫印迹实验，是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。该法是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的免疫生化技术，具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性，现已成为蛋白分析的一种常规技术。 对于一直都在做蛋白研究的你，在样品制备
告别黑白迎接色彩荧光技术在WesternBlot显影上的应用1
说起免疫印迹（Western Blot）检测，想必大家都很熟悉了，不就是WB吗？每天都做啊，白底黑带，但是最近经常阅读SCI文献（特别是高分的）小伙伴可能会发现，近两年发表很多高影响因子的文献的WB结果图发生了大变样：白底变成了黑底，条带从黑色变成了：红，橙，黄，绿，蓝等各种颜色了