在WB实验中为什么需要使用内参抗体?
在WB实验中为什么需要使用内参抗体?进口内参抗体——在WB实验中为什么需要使用内参抗体? 要检测一个基因的表达产物是否正确,或者比较表达产物量的相对变化,首选方法是Western Blot。虽然,顺利的时候Western Blot做起来很简单,可不顺的时候也很令人心烦――做不出结果啦、假阳性啦、结果出现多条带啦、到底是一抗有问题还是二抗有问题啦……毕竟,作为一种有活性的生物大分子,抗体和抗原的反应毕竟不象1+1那么明确,而用这种不确定的试剂来测定同样知之甚少的表达产物,确实是有一定的不确定性的。所以,严谨的Western Blot实验设计中要求有良好的参照体系,对实验结果分析是非常有用的。 我们知道,要用Western Blot比较不同条件下或者不同组织中,目的蛋白表达量的相对多少,前提条件是等量的细胞上样,才有比较的基础......阅读全文
在WB实验中为什么需要使用内参抗体?
要检测一个基因的表达产物是否正确,或者比较表达产物量的相对变化,首选方法是Western Blot。虽然,顺利的时候Western Blot做起来很简单,可不顺的时候也很令人心烦――做不出结果啦、假阳性啦、结果出现多条带啦、到底是一抗有问题还是二抗有问题啦……毕竟,作为一种有活性的生物大分子
在WB实验中为什么需要使用内参抗体?
在WB实验中为什么需要使用内参抗体?进口内参抗体——在WB实验中为什么需要使用内参抗体? 要检测一个基因的表达产物是否正确,或者比较表达产物量的相对变化,首选方法是Western Blot。虽然,顺利的时候Western Blot做起来很简单,可不顺的时候也很令人心烦――做不出结果啦、假阳性
进口内参抗体——在WB实验中为什么需要使用内参抗体?
要检测一个基因的表达产物是否正确,或者比较表达产物量的相对变化,首选方法是Western Blot。虽然,顺利的时候Western Blot做起来很简单,可不顺的时候也很令人心烦――做不出结果啦、假阳性啦、结果出现多条带啦、到底是一抗有问题还是二抗有问题啦……毕竟,作为一种有活性的生物大分子
进口内参抗体:在WB实验中为什么需要使用内参抗体?
要检测一个基因的表达产物是否正确,或者比较表达产物量的相对变化,首选方法是Western Blot。虽然,顺利的时候Western Blot做起来很简单,可不顺的时候也很令人心烦――做不出结果啦、假阳性啦、结果出现多条带啦、到底是一抗有问题还是二抗有问题啦……毕竟,作为一种有活性的生物大分子,抗
βTubulin抗体—做出漂亮WB和IHC图片的内参
Tubulin即微管蛋白,是细胞的一种骨架蛋白。Tubulin分为α、β、γ、δ、ε等多种tubulin,其中α-Tubulin和β-Tubulin可以形成异源二聚体,是形成微管的最主要的两种Tubulin。α-tubulin和β-tubulin分子量分别为55kDa和50kDa,其实际检测条带均在
western中目标抗体出现,内参出不来是为什么
那就算你的内参抗体有问题了,你们购买的哪家的产品呢?放置了多久,既然你自己的抗体可以出条带,那么组织提取的蛋白肯定是没有问题的,就只有是你的内参抗体有问题了
real-time-PCR实验为什么要使用内参基因
这个是根据定量PCR算法决定的,如果是相对定量,就需要内参,内参主要是使样品均一化,你做实验的时候,可能提取RNA时所用的样品是相同的,反转录时所用的mRNA的量是相同的,做定量PCR时所加的cDNA量也是相同的。但是你的样品是新长的部分,还是老的部分?反转录时是加相同的体积还是相同打质量,这些对结
线粒体内参抗体—克隆号为14Y2的COX-IV单克隆抗体
细胞色素c氧化酶(Cytochrome c oxidase,简称COX)是一种异源寡聚酶,通常含有13个亚基,定位于线粒体内膜,是线粒体呼吸链的酶复合物。细胞色素c氧化酶中形成催化中心的3个最大的亚基由线粒体DNA编码,其余10个亚基包括COX IV由细胞核内的基因组DNA编码。细胞色素
wb-蛋白在重复实验时还需要煮吗
蛋白样品的制备是蛋白质组研究的第一步,无论后续采用怎样的分离或鉴定手段,样品制备都是关键步骤。因此,为了完全分析所有的细胞内蛋白,组织与细胞必须进行有效的破碎。本文在此介绍几种较为常见的方法。变性条件——SDS LB直接裂解:用常温或者高温预热过(预热更有利于阻止蛋白水解或者磷酸酶去磷酸化,但容易遗
wb-蛋白在重复实验时还需要煮吗
wb 蛋白在重复实验时还最好是再煮一下在第一次wb时候,蛋白样品加入上样缓冲液并煮沸。如果重复实验是重新取样加上样缓冲液的话,应该是要重复之前的步骤,煮沸后上样如果重复实验没有重新取样用了之前的样品,那么因为SDS温度较低是可能会有部分析出,所以重复实验前最好还是再煮一下
核内参PCNA抗体用于细胞核内参的PCNA单抗
增殖细胞核抗原(Proliferating Cell Nuclear Antigen简称PCNA)由Miyachi等于1978年在 SLE(系统性红斑狼疮)患者的血清中首次发现并命名,因其只存在于正常增殖细胞及肿瘤细胞内而得名。PCNA是一种分子量为36KD的蛋白质,在细胞核内合成,并存在于
GAPDH抗体推荐—Abbkine高性价比GAPDH内参抗体的选择
在Western Bloting实验中,可能存在总蛋白浓度测定不准确,或者蛋白质样品在电泳前上样时产生的样品间的操作误差;这些误差可以通过测定每个样品中实际转到膜上的内参,比如内参GAPDH的含量来进行校正。GAPDH(甘油醛-3-磷酸脱氢酶)是参与糖酵解的一种关键酶,由4个30-40kDa的亚基组
为什么通过elisa、WB能检测到的蛋白在itraq实验中没有检测..
为什么通过elisa、WB能检测到的蛋白在itraq实验中没有检测到?人血浆中的蛋白是有上万种的,而一般质谱只能检测到五六百种,也就是说只占了其中的百分之几,这是普遍现象,说明咱们的方法是不存在问题的;其次,ELISA/WB与质谱相对来说灵敏度不一样,前者具有放大效应,因为其间会用到相应的抗体,所以
βActin抗体推荐—Abbkine高效价的BetaActin内参抗体
Actin即肌动蛋白,是细胞的一种重要骨架蛋白。Actin大致可分为六种,其中四种是不同肌肉组织特异性的,其余两种广泛分布于各种组织中,包括 β-actin和γ-non-muscle actin。β-actin作为内参是得到了公认的,这是针对大多数组织和细胞来说的,它广泛分布于细胞浆内,表达
怎么选择适合的GAPDH内参抗体?
在Western Bloting实验中,在遇到总蛋白浓度测定不准确时候,或者蛋白质样品在电泳前上样时产生的样品间的操作存在误差;这些误差可以通过测定每个样品中实际转到膜上的内参,比如内参GAPDH的含量来进行校正。 GAPDH(甘油醛-3-磷酸脱氢酶)是参与糖酵解的一种关键酶,由4个30-40kD
为什么选择组蛋白H3为细胞核的内参指标?
为什么选择组蛋白H3为细胞核的内参指标呢?当实验样品中只是核蛋白,而不是细胞总蛋白提取液时,可以用组蛋白H(Histone H),或者增殖细胞核抗原(PCNA)等为核内参抗体。除了这些,其它常见的核蛋白内参还有K70, K80, Lamin A和B。但是需要注意的问题是核蛋白内参的选择需要考
如何挑选合适的βActin内参抗体?
如何选择合适的β-Actin抗体? 现在市场上对于内参抗体选择是比较多,但是也需要遵循一定的原则,那怎么去找到适合自己实验的β-Actin抗体呢?首先,我们需要考虑目的蛋白的大小,我们推荐内参要与检测的目的蛋白的分子量最好相差5KD以上,因此你需要根据你目的检测蛋白的分子量来选择合适的内参,由于β-
你的-WB-内参选对了么?
你的 WB 内参选对了么? 关键词: 科研 WB 内参 2019-08-14 17:00 来源:CST 点击次数:19 要想底气十足地秀
定量western-blot实验为什么需要用验证抗体
验证抗体对于WB结果的一致性和重复性是至关重要的,即确认抗体能特异性识别感兴趣的蛋白,抗体与其他蛋白的交叉反应性情况。在您的论文提交给期刊发表之前,经常需要验证抗体的特异性,但并非所有人都花时间进行验证。或者很多人都认为他们使用抗体进行了免疫共沉淀验证,因而不需要再通过蛋白质印迹进行验证。然而
定量western-blot实验为什么需要用验证抗体?
验证抗体对于WB结果的一致性和重复性是至关重要的,即确认抗体能特异性识别感兴趣的蛋白,抗体与其他蛋白的交叉反应性情况。在您的论文提交给期刊发表之前,经常需要验证抗体的特异性,但并非所有人都花时间进行验证。或者很多人都认为他们使用抗体进行了免疫共沉淀验证,因而不需要再通过蛋白质印迹进行验证。然而,抗体
定量western-blot实验为什么需要用验证抗体
验证抗体对于WB结果的一致性和重复性是至关重要的,即确认抗体能特异性识别感兴趣的蛋白,抗体与其他蛋白的交叉反应性情况。在您的论文提交给期刊发表之前,经常需要验证抗体的特异性,但并非所有人都花时间进行验证。或者很多人都认为他们使用抗体进行了免疫共沉淀验证,因而不需要再通过蛋白质印迹进行验证。然而,抗
Western-blot如何进行实验质控
WB实验总做不好,那么如何进行WB实验质控呢? 做过WB实验的小伙伴都经历过成像时忐忑不安,出来结果时的彷徨无措,为什么条带没有出啦,为什么背景这么高,为什么受伤的总是我,看着旁边小伙伴漂亮的结果图,心生羡慕嫉妒,那么小编给大家整理总结了如何进行WB的质控和注意哪些检查点。 蛋白样品
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WB实验总做不好,那么如何进行WB实验质控呢?做过WB实验的小伙伴都经历过成像时忐忑不安,出来结果时的彷徨无措,为什么条带没有出啦,为什么背景这么高,为什么受伤的总是我,看着旁边小伙伴漂亮的结果图,心生羡慕嫉妒,那么小编给大家整理总结了如何进行WB的质控和注意哪些检查点。蛋白样品:准备好裂解液后,使
如何选择Lamin-B1抗体?
Lamin B1是一种蛋白质,在人类由LMNB1基因编码,核纤层由位于内核膜旁边的蛋白质的二维基质组成,层系蛋白家族构成基质并在进化过程中高度保守的。在有丝分裂过程中,板矩阵是可逆拆卸核纤层蛋白蛋白质磷酸化。核纤层蛋白的蛋白质被认为是参与核稳定、染色质结构和基因表达。脊椎动物核纤层蛋白包括两种类型,
Western实验中内参基因的选择及使用方法
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Western Blot实验常用于检测蛋白表达量、蛋白表达产物的正确性等。相对于其他检测蛋白的方法而言Western Blot实验在蛋白的定性定量分析、与目的蛋白量的比较方面更简单一些。虽然,顺利的时候Western blot做起来很简单,可不顺的时候也很令人心烦――做不出结果啦、假阳性啦、结果出现
常用内参抗体和标签抗体
Anti-β-Tubulin,Anti-β-Actin,Anti-GAPDH,Anti-GFP Tag,Anti-RFP Tag 等Epitope Biotech Inc. 公司定制生产高品质的对特定表位有特异性的小鼠单克隆抗体,与其他公司生产的同类产品相比,具有最高的灵敏度和最高的特异性,并且性价
PH电极在使用前需要浸泡么?为什么?
PH电极使用前必须浸泡,因为pH球泡是一种特殊的玻璃膜,在玻璃膜表面有一很薄的水合凝胶层,它只有充分湿润的条件下才能与溶液中的H+离子良好的响应。同时,玻璃电极经过浸泡,可以使不对称电势大大下降并趋向稳定。 PH玻璃电极一般可以用蒸馏水或pH4缓冲溶液浸泡。通常使用PH4缓冲液更好一些,浸泡时间8小
WB检测中二抗的选择方法
WB检测之二抗 二抗选择 二抗是用一抗免疫动物制备的抗一抗的抗体,选择范围较窄,基本是商品化的,在不考虑二抗修饰类型的前提下,二抗的选择需要遵循以下原则:二抗来源种属、一抗来源种属和抗原来源种属互不相同。例如如果研究对象是人的蛋白X,选择了鼠抗X一抗,则可选择兔抗鼠二抗或者羊抗鼠二
WB检测中二抗的选择方法
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