设计cas9条件性基因敲除小鼠
其关键是构建带有两个Loxp位点的小鼠，即flox(flanked by loxP)小鼠。今天我们就来详细介绍一下如何设计。共分三步：第一步，选择外显子。第二步，设计sgRNA。第三步，设计SSODN。听起来蛮简单的哈？下面我们详细讲讲。第一步，选择外显子。1. 尽量选择敲除所有转录本共用的外显子。我们都知道，真核生物的基因是有外显子和内含子的，利用这些内含子和外显子，一个基因可以剪接出多个转录本，翻译后得到多个蛋白。设计条件性敲除的时候，首先要搞清楚这个基因有几个转录本，一般敲除所有转录本共用的外显子。2. 该外显子的碱基数一定不要是3的倍数。这样才能造成整个基因编码的所有蛋白都移码突变，起到敲除基因的效果。3. 最好不要选择第一个外显子。为啥？ 因为基因可能利用附近其它地方的起始密码子来起始转录。这样你辛苦敲掉了第一个外显子，而蛋白可以从别的地方重新开始翻译。就不能达到基因敲除的效果。第二步，设计sgRNA。在选定了外显子后......阅读全文
基因编辑CRISPR/Cas9技术构建转基因小鼠的优势
当当当！敲黑板！！看这里！！！ 2016年国家自然科学基金放榜已经有一段时间啦！各位老师是不是还沉浸在喜悦中不能自拔呢？O(∩_∩)O清醒一下，我们的目标是：基金年年有，明年中更多！ 每年的国家自然科学基金都是中国科研领域的风向标！通过分析国自然，可以看出最新的研究热点、目前国家重视
旅美华裔学者直接参与“基因敲除小鼠”试验
70岁的意大利裔美国人卡佩基等美英三位学者本月8号获得今年的诺贝尔生理学或医学奖。旅美华裔学者邓初夏当年曾是卡佩基科研团队的成员。日前他在接受本台驻美国记者采访时，谈到了自己参与“基因敲除小鼠”试验的感受。 1986年，邓初夏考入犹他大学研究生院，师从卡佩基，成为从事“基因敲除”试验的第一个研究
新一批敲除小鼠序列数据存入基因银行
美国得克萨斯州基因组医学研究所将其敲除小鼠库的超过275000个核苷酸序列信息存入了美国国立卫生研究院的基因银行。 以休斯敦为根据地的得克萨斯州基因组医学研究所于今年5月加入国际敲除小鼠协会。在美国国立卫生研究院号召在国际科学界广泛分享小鼠研究信息后，该研究所表示愿意向美国健康研究院提供基因序列
应用优化CRISPR技术建立基因完全敲除的小鼠及猴
6月6日，《细胞研究》在线发表了一项成果，应用改进的“C-CRISPR”技术可以获得单基因或多基因功能完全敲除的小鼠及猴。这项研究由中国科学院上海生命科学研究院神经科学研究所、脑科学与智能技术卓越创新中心的杨辉研究组、熊志奇研究组以及神经所苏州非人灵长类研究平台孙强团队合作完成。该研究通过将多个
TetraOne－KO——基因敲除技术进展
TetraOne KO——基因敲除技术的重大突破 近日，赛业生物科技（Cyagen Biosciences）宣布推出其全球ZL技术TetraOne基因敲除，一种不仅在速度上媲美TALEN、CRISPR/Cas9（把ES打靶基因敲除/敲入鼠的定制周期降低至6个月），而且避免了TALEN、CRISP
ACE2人源化小鼠在SARSCoV2疫苗研发和药物筛选的应用
赛业生物作为模式动物领域的领军企业，在新冠肺炎疫情爆发初期，便组织研发团队全力开发新冠小鼠模型。我们利用自主研发的TurboKnockout技术和经过优化的CRISPR-Pro技术同步开展BALB/c、C57BL/6J、C57BL/6N三种背景品系的人源化ACE2小鼠制备，并综合考虑不同基因编辑方式
PNAS：CRISPRCas9系统构建心脏衰竭小鼠模型
突变体小鼠模型为我们研究个别基因对发育、生理以及疾病发生等科学问题提供了极大的便利。然而，传统的小鼠突变体模型构建是一项十分耗时耗力的工程。最近的CRISPR-Cas9系统对于动物体的遗传修饰是一项革命性的突破。 CRISPR系统首先被发现于细菌抗病毒侵染的免疫系统，通过一类sgRNA的介导，
利用CRISPR/CAS9对人类干细胞系进行可诱导基因敲除
近日，来自美国威斯康星大学的华人科学家Su-Chun Zhang在国际学术期刊Cell Stem Cell发表了一项最新研究进展，他们利用CRISPR/CAS9技术实现了对人类干细胞系进行可诱导基因敲除，这一方法的成功对于研究基因在干细胞及分化不同阶段中的作用具有重要推动作用。 对基因表达进行
TetraOne－KO——基因敲除技术的重大突破
近日，赛业生物科技（Cyagen Biosciences）宣布推出其全球ZL技术TetraOne基因敲除，一种不仅在速度上媲美TALEN、CRISPR/Cas9（把ES打靶基因敲除/敲入鼠的定制周期降低至6个月），而且避免了TALEN、CRISPR/Cas9脱靶效应困扰的革命性技术。TetraO
基因敲除技术
一．概述：基因敲除是自80年代末以来发展起来的一种新型分子生物学技术，是通过一定的途径使机体特定的基因失活或缺失的技术。通常意义上的基因敲除主要是应用DNA 同源重组原理，用设计的同源片段替代靶基因片段，从而达到基因敲除的目的。随着基因敲除技术的发展，除了同源重组外，新的原理和技术也逐渐被应用，比较
基因敲除简介
基因敲除是自80年代末以来发展起来的一种新型分子生物学技术，是通过一定的途径使机体特定的基因失活或缺失的技术。通常意义上的基因敲除主要是应用DNA同源重组原理，用设计的同源片段替代靶基因片段，从而达到基因敲除的目的。随着基因敲除技术的发展，除了同源重组外，新的原理和技术也逐渐被应用，比较成功的有基因
基因敲除技术
一．概述：基因敲除是自80年代末以来发展起来的一种新型分子生物学技术，是通过一定的途径使机体特定的基因失活或缺失的技术。通常意义上的基因敲除主要是应用DNA 同源重组原理，用设计的同源片段替代靶基因片段，从而达到基因敲除的目的。随着基因敲除技术的发展，除了同源重组外，新的原理和技术也逐渐被应用，比较
TetraOne－KO——基因敲除技术的重大突破
TetraOne KO——基因敲除技术的重大突破 近日，赛业生物科技（Cyagen Biosciences）宣布推出其全球ZL技术TetraOne基因敲除，一种不仅在速度上媲美TALEN、CRISPR/Cas9（把ES打靶基因敲除/敲入鼠的定制周期降低至6个月），而且避免了TALEN、
上海生科院完整染色体敲除研究获进展
11月25日，中国科学院上海生命科学研究院神经科学研究所、脑科学与智能技术卓越创新中心杨辉研究组与北京大学胡家志实验室合作完成的研究论文，以《CRISPR/Cas9介导的基因编辑技术敲除目标染色体》为题，发表在《基因组生物学》上。该研究介绍了CRISPR/Cas9技术的新型应用，即在细胞、胚胎或
基因修饰小鼠（GEM）模型在肿瘤学研究中的应用（二）
最近，CRISPR/Cas9系统也应用于靶基因的抑制（CRISPRi）或激活（CRISPRa)的遗传修饰。这类修饰系统可用于研制相应致癌基因，和/或抑制TSGs基因的诱导和可逆激活小鼠模型。比如借助CRISPRa为基础的系统，通过激活致癌基因的转录，达到研究其致癌潜力的目的。虽然CRISPR/Cas
中国专家解读诺贝尔医学奖：“基因敲除小鼠”缘何获奖
首都医科大学宣武医院细胞治疗中心主任张愚８日介绍，本年度诺贝尔生理学或医学奖得主的最大贡献在于，他们创造了一套完整的“基因敲除小鼠”的方式，把任意改变小鼠基因变为现实，不仅可以研究单个基因在动物体内的功能，而且为人类攻克某些遗传因素引发的疾病，提供了药物试验的动物模型。 张愚介绍，所谓“基因敲除小鼠
CRISPR技术如何带火了基因编辑小鼠？
2013年，一种名为的“CRISPR”的基因编辑技术出现后，“基因编辑”这个词汇不经意间火了，传遍了整个学术圈、生活圈，甚至是朋友圈。它的出现让“编辑生命”变得触手可及，它似乎可以斗过癌症（白血病）和艾滋病，还有各种遗传病。我们知道，目前这些人类疾病都没有办法从根本上治疗，而它们几乎都和基因突变相关
如何让基因敲除效率提升3倍，价格降低一半？
CRISPR/Cas9基因编辑技术以它效率高、操作简便、成本低等特点被广泛应用于基因敲除小鼠实验中，但是在将RNAs注入受精卵的环节中，传统的显微注射技术需要借助显微操作系统人工逐个进行受精卵注射，十分耗时。同时，想要提高基因敲除的成功率，需要获得更多受精卵，再加上人工设计基因打靶方案耗时费力，
基因靶向的基因敲除
实验步骤构建重组基因载体绝大多数的基因敲除策略都是基于同源重组的机制，其基因载体包括载体骨架、靶基因同源序列和突变序列及选择性标记基因等非同源序列，其中同源序列是影响同源重组效率的关键因素。用电穿孔显微注射方法把重组DNA转入受体细胞（一般是胚胎干细胞）核内。同源重组基因重组时以载体的同源序列取代染
CRISPR/Cas9和ES打靶选择的优劣比较
近年随着生物医药技术快速迭代，靶向药物、免疫疗法、基因治疗等个性化治疗方式成为生物药创新的主要方向，这其中离不开基因编辑技术的发展。从一年前的ZL之争，到基因编辑公司Editas人类基因编辑的临床试验获FDA批准可知，基因编辑技术的发展备受期待。 目前动物模型基因编辑技术大抵分为两类：ES细胞打靶
如何让基因敲除效率提升3倍，价格降低一半？
CRISPR/Cas9基因编辑技术以它效率高、操作简便、成本低等特点被广泛应用于基因敲除小鼠实验中，但是在将RNAs注入受精卵的环节中，传统的显微注射技术需要借助显微操作系统人工逐个进行受精卵注射，十分耗时。同时，想要提高基因敲除的成功率，需要获得更多受精卵，再加上人工设计基因打靶方案耗时费力，
如何选择基因敲除动物模型制备技术？
动物模型是现代生命科学研究的重要工具，特别是基因工程小鼠和大鼠，在基因功能研究、人类生理病理机制研究及新药研发中起着不可替代的作用。近几年来，制 备动物模型的基因修饰技术层出不穷，这不仅包括传统ES打靶、TALEN、CRISPR/Cas9， 还有TetraOne基因敲除新技术。如此繁 多的技
基因敲除的不简单论p53基因的重要性
p53基因位于17号染色体p13，全长16-20kb，含有11个外显子，转录2.8kb的mRNA，编码一种分子量为43.7KDa的P53蛋白质，是一种核内磷酸化蛋白。因蛋白条带出现在Marker所示53KDa处，命名为P53。p53基因是人体一种肿瘤抑制基因（tumor suppressor gen
李劲松，于翔最新文章：CRISPR技术构建基因功能分析方法
来自中科院生物化学与细胞生物学研究所李劲松研究组和中国科学院神经科学研究所于翔研究组合作发表了最新成果：利用CRISPR/Cas9技术和细胞谱系示踪技术对小鼠两细胞胚胎中的单个卵裂球进行了基因敲除，一步法获得了Tet3基因敲除的健康嵌合小鼠，并对Tet3基因敲除后大脑皮层和海马神经元的突触传递进
CRISPR/Cas9设计工具，让基因编辑不再高冷！
CRISPR/Cas9已经成为最常用的基因编辑系统。CRISPR/Cas9包括2部分：Cas9核酸内切酶和sgRNA(single guide RNA)，sgRNA由天然的tracrRNA (transactivating crRNA)和crRNA (CRISPR RNA)融合而来。 使用
基因敲除小鼠模型－竟然发现了关节炎生长机制？
关节炎是运动系统最常见的疾病，也是导致病患丧失行动能力的重要原因之一。据统计，我国约有骨关节炎患者1.8亿，医疗费用占GDP的0.5%，给家庭和社会造成沉重负担，已成为世界性重大公共卫生问题和临床医学难题。关节内成分复杂，有滑膜、软骨、软骨下骨等多种组织结构，至今关节炎的发病机制尚未完全明确。
控制基因敲除法
【探针技术用于检测由siRNA介导的基因调制】 为了研究基因功能，科学家们常常会有针对性地关断某些特定的基因。 而要验证这种基因沉默的有效性, 就需要运用适当的具特异性的检测方法。理想的检测方法不仅要测量准确, 而且还要能让细胞保持完好无损。 利用诸如RNA(核糖核酸)技
基因敲除技术简介
动物实验和实验动物都要求达到实验室操作规范（good laboratory practice, GLP）和标准操作程序（standard operating procedure, SOP）这些规范和操作对实验动物和实验室条件，工作人员素质，技术水平和操作方法都要求标准化。所有药物的安全评价试
基因敲除技术简介
基因敲除是自80年代末以来发展起来的一种新型分子生物学技术，是通过一定的途径使机体特定的基因失活或缺失的技术。通常意义上的基因敲除主要是应用DNA同源重组原理，用设计的同源片段替代靶基因片段，从而达到基因敲除的目的。随着基因敲除技术的发展，除了同源重组外，新的原理和技术也逐渐被应用，比较成功的有基因
基因敲除技术简介
基因敲除是一种遗传工程技术，是指通过一定的途径使机体特定的基因失活或缺失的技术。基因敲除针对某个序列已知但功能未知的序列，改变生物的遗传基因，令特定的基因功能丧失作用，从而使部分功能被屏蔽，并可进一步对生物体造成影响，进而推测出该基因的生物学功能。基因敲除技术克服了随机整合的盲目性和偶然性，是一种理