设计cas9条件性基因敲除小鼠
其关键是构建带有两个Loxp位点的小鼠，即flox(flanked by loxP)小鼠。今天我们就来详细介绍一下如何设计。共分三步：第一步，选择外显子。第二步，设计sgRNA。第三步，设计SSODN。听起来蛮简单的哈？下面我们详细讲讲。第一步，选择外显子。1. 尽量选择敲除所有转录本共用的外显子。我们都知道，真核生物的基因是有外显子和内含子的，利用这些内含子和外显子，一个基因可以剪接出多个转录本，翻译后得到多个蛋白。设计条件性敲除的时候，首先要搞清楚这个基因有几个转录本，一般敲除所有转录本共用的外显子。2. 该外显子的碱基数一定不要是3的倍数。这样才能造成整个基因编码的所有蛋白都移码突变，起到敲除基因的效果。3. 最好不要选择第一个外显子。为啥？ 因为基因可能利用附近其它地方的起始密码子来起始转录。这样你辛苦敲掉了第一个外显子，而蛋白可以从别的地方重新开始翻译。就不能达到基因敲除的效果。第二步，设计sgRNA。在选定了外显子后......阅读全文
中科院学者连发两篇Cell－Res文章获CRISPR技术重要突破
基因编辑工具的快速发展令整个生物学研究领域疯狂，目前第三代DNA剪刀的主角是CRISPR，这是一种比其前身更快更便宜的工具。近期来自中科院神经科学研究所的杨辉研究组与多个研究组合作，在Cell Research杂志上发表了多篇文章，获得了CRISPR-Cas9技术的重要突破。 研究组成员通过与
点突变大小鼠在体内体外临床研究的应用（二）
研究点突变疾病的利器——点突变模式动物依靠同源重组，可以将含有突变碱基的DNA片段整合到基因组中，但过低的重组效率以及种属局限限制了点突变的研究。随着各种核酸酶技术在2009-2013年之间井喷式的发展及以后的不断完善，尤其是Crispr/Cas9技术的发明，使得基因编辑的效率大幅提高，难度和成本也
基因敲除技术简介
基因敲除是一种遗传工程技术，是指通过一定的途径使机体特定的基因失活或缺失的技术。基因敲除针对某个序列已知但功能未知的序列，改变生物的遗传基因，令特定的基因功能丧失作用，从而使部分功能被屏蔽，并可进一步对生物体造成影响，进而推测出该基因的生物学功能。基因敲除技术克服了随机整合的盲目性和偶然性，是一种理
基因敲除技术简介
动物实验和实验动物都要求达到实验室操作规范（good laboratory practice, GLP）和标准操作程序（standard operating procedure, SOP）这些规范和操作对实验动物和实验室条件，工作人员素质，技术水平和操作方法都要求标准化。所有药物的安全评价试
什么是基因敲除？
基因敲除(gene knock-out)是利用细胞染色体DNA可与外源性DNA同源序列发生同源重组的性质，使特定靶基因失活，以研究该基因的功能.基因敲入(gene knock-in)是通过同源重组用一种基因替换另一种基因，以便在体内测定它们是否具有相同的功能，或将正常基因引入基因组中置换突变基因以达
控制基因敲除法
【探针技术用于检测由siRNA介导的基因调制】 为了研究基因功能，科学家们常常会有针对性地关断某些特定的基因。 而要验证这种基因沉默的有效性, 就需要运用适当的具特异性的检测方法。理想的检测方法不仅要测量准确, 而且还要能让细胞保持完好无损。 利用诸如RNA(核糖核酸)技
基因敲除技术简介
基因敲除是自80年代末以来发展起来的一种新型分子生物学技术，是通过一定的途径使机体特定的基因失活或缺失的技术。通常意义上的基因敲除主要是应用DNA同源重组原理，用设计的同源片段替代靶基因片段，从而达到基因敲除的目的。随着基因敲除技术的发展，除了同源重组外，新的原理和技术也逐渐被应用，比较成功的有基因
基因敲除的定义
基因敲除(geneknockout),是指对一个结构已知但功能未知的基因,从分子水平上设计实验,将该基因去除,或用其它顺序相近基因取代,然后从整体观察实验动物,推测相应基因的功能。这与早期生理学研究中常用的切除部分-观察整体-推测功能的三部曲思想相似。基因敲除可中止某一基因的表达外,还包括引入新基因
生物物理所发现Epg5基因敲除小鼠出现选择性神经系统缺陷
中科院生物物理研究所张宏研究组以Mice deficient in Epg5 exhibit selective neuronal vulnerability to degeneration为题，在Journal of Cell Biology在线发表了最新研究成果，文中报道了自体吞噬基
刘小乐、张锋CRISPR最新论文
最近，来自哈佛大学医学院Dana-Farber癌症研究院、哈佛大学统计系和麻省理工学院-哈佛大学布罗德研究所的研究人员，在国际基因组研究权威期刊《Genome Research》发表题为“Sequence determinants of improved CRISPR sgRNA design”
crispr/cas9到底是什么东西
最近几年基因编辑技术异常火爆，CRISPR/Cas9技术面世以后，弥补了传统基因编辑技术的诸多不足，使得基因的“任意编辑”变得越来越容易。也因此，CRISPR/Cas9技术当仁不让的成为基因编辑技术的“王牌”，大有一副取而代之的势头。所以这里就给大家简单介绍一下CRISPR/Cas9的技术原理！一、
CRISPRCas9技术及其在肿瘤研究中的应用
CRISPR的前世今生1987年，日本科学家在研究大肠杆菌的时候发现其基因组上存在一些看起来“奇怪”的重复结构：有一段29碱基的序列反复出现了5次，且两两之间被32个碱基形成的序列隔开了！但这个发现在当时并没有引起科学界的很大关注，毕竟在自然界的生物体内，各种奇奇怪怪的发现实在太多。然后仅仅几年后，
如何用Western－blot法验证PCR结果？
往期我们已经为大家详细介绍了利用CRISPR/Cas9构建编辑小鼠和细胞系的全部过程，相信大家在了解从sgRNA设计、表达载体构建至显微注射、小鼠鉴定等一系列过程的同时，常会为这样的难题所困扰：历经3-6个月得到的基因敲除的小鼠/细胞，PCR鉴定的结果居然和WB蛋白结果不一致？竟开始怀疑自己这几个月
BEX电转化仪高效转染mRNA入卵助力CRISPR/Cas9基因编辑
BEX电转化仪高效转染mRNA入卵助力CRISPR/Cas9基因编辑摘要近期，CRISPR/Cas9系统被广泛地应用于突变体小鼠的构建，但是借助于微注射方法很大程度上限制了基因编辑于高通量上的应用。这篇文章中，我们阐述了一个简单，高效，大规模的基因编辑方法：即借助于电转染将RNAs转入卵，而不是通过
倚天屠龙，谁与争锋——且看基因敲除与RNA干扰的关系
研究历史 20世纪80年代初，胚胎干细胞分离和体外培养的成功为基因敲除奠定了技术基础。1985年，首次证实的哺乳动物细胞中同源重组(homology recombination, HR)的存在为基因敲除奠定了理论基础[2]。为了编辑基因，传统的靶向特定等位基因的同源重组技术被使用，但是，这
CRISPR–Cas9基因组编辑可用于耳聋小鼠模型恢复听觉
一篇论文称，研究将CRISPR–Cas9基因组编辑技术用于恢复人类遗传性耳聋小鼠模型的听力。这项于12月21日发表于《自然》的研究凸显了CRISPR-Cas9用于治疗某些显性遗传性听觉损失疾病的潜力。 将近一半的耳聋是由遗传因素造成的，但能治疗遗传性听觉损失的方法却有限。美国马萨诸塞州哈佛大学
借助电转方法将Cas9蛋白质/sgRNA导入小鼠原核受精卵生...
借助电转方法将Cas9蛋白质/sgRNA导入小鼠原核受精卵生成非嵌合体突变体胚胎基因编辑解析：借助电转方法将Cas9蛋白质/sgRNA导入小鼠原核受精卵生成非嵌合体突变体基因编辑技术指能够让人类对目标基因进行“编辑”，实现对特定DNA片段的敲除、加入等。而CRISPR/Cas9技术自问世以来，就有着
基因修饰小鼠（GEM）模型在肿瘤学研究中的应用（一）
前沿相对于过去常用的肿瘤细胞接种和免疫缺陷小鼠模型，基因修饰小鼠（GEM）模型是建立在天然完整免疫条件下的原发（de novo）肿瘤。因此，作为肿瘤学研究的工具，GEM模型更能模拟人肿瘤的组织病理学和分子学特征，表现为有更好的遗传异质性，其优势在于能反映肿瘤细胞自身，以及肿瘤微环境中细胞等相互作
南京大学黄行许：连发CRISPR/Cas9重要研究成果
南京大学模式动物研究所的黄行许（Xingxu Huang）教授，是近年来基因组编辑领域的风云人物之一。其实验室不仅首次在世界上利用CRISPR/Cas9进行了大鼠的条件性基因敲除，还通过原核注射实现了世界上首次猴基因敲除。这些成果在国际上受到广泛的瞩目。 近期黄行许教授课题组接连在CRISPR
青年华人科学家Science建立CRISPR人细胞敲除体系
来自麻省理工学院，哈佛医学院，Broad研究院等处的研究人员完成了人类细胞全基因组范围内CRISPR-Cas9敲除筛选，这对于CRISPR-Cas9技术的发展具有重要意义。这一研究成果公布在12月13日Science杂志在线版上。 文章的通讯作者是麻省理工学院脑与认知科学助理教授、McGo
基因敲除技术最新研究进展
基因敲除技术最新研究进展—|基因敲除技术|转基因研究|基因克隆|基因靶向操作| 基因敲除 技术是建立在基因同源重组技术以及胚胎干细胞技术的基础上而发展起来的一种分子生物学技术。1987年Thompsson建立了完整的ES细胞基因敲除的小鼠模型 。近年来新兴起了ZFNs、TALENS、Cas9
研究发现CRISPRCas9在非人灵长类中不会导致明显脱靶效应
CRISPR-Cas9基因编辑系统已被广泛应用于生物和医学研究，研究人员正在尝试利用它进行人类疾病的基因治疗，然而，它在临床前的安全性方面还缺少全面评估。记者从中科院昆明动物研究所了解到，近期该所多个课题组合作，发现这一基因编辑系统在非人灵长类中不会导致明显脱靶效应，因而有较高安全性。研究成果发
基因敲除技术最新研究进展
基因敲除技术最新研究进展—|基因敲除技术|转基因研究|基因克隆|基因靶向操作|基因敲除技术是建立在基因同源重组技术以及胚胎干细胞技术的基础上而发展起来的一种分子生物学技术。1987年Thompsson建立了完整的ES细胞基因敲除的小鼠模型 。近年来新兴起了ZFNs、TALENS、Cas9等多
华中农业大学团队找到动物冠状病毒药物研发新靶标
近日，华中农业大学教授彭贵青团队和赵书红团队合作，鉴定出冠状病毒复制所需的关键宿主因子TMEM41B并阐明了其分子机制，为动物冠状病毒的药物研发和抗病育种提供新的靶标。 冠状病毒“利用”和“劫持”宿主因子来调节细胞内环境，并在细胞内修建一个病毒复制的“老巢”（双层囊泡DMVs）来实现高效复制
彭贵青团队等鉴定出冠状病毒复制所需的关键宿主因子
近日，华中农业大学彭贵青教授团队和赵书红教授团队合作，鉴定出冠状病毒复制所需的关键宿主因子TMEM41B并阐明了其分子机制，为动物冠状病毒的药物研发和抗病育种提供新的靶标。 冠状病毒“利用”和“劫持”宿主因子来调节细胞内环境，并在细胞内修建一个病毒复制的“老巢”（双层囊泡DMVs）来实现高效复
获生物大奖－青年华人科学家Cell解析基因组编辑
来自麻省理工学院，哈佛医学院，Broad研究院等处的研究人员揭示了一种增加基因组编辑特异性的新方法，即利用RNA导向的CRISPR-Cas9系统形成双切口，在未影响靶向切割效率的前提下，方便小鼠受精卵基因敲除研究。这一研究成果公布在Cell杂志在线版上。 文章的通讯作者是麻省理工学院脑与认
CRISPR/Cas9－技术，热度背后的冷思考
近年来，CRISPR/Cas9 基因编辑技术正在给整个科研界带来革命性变化，该技术使用 CRISPR 系统将 Cas9 蛋白和向导 RNA 注入小鼠受精卵，就能轻松实现基因敲除，同时，注入 Donor DNA 则可实现基因敲入，甚至国际著名学术期刊 Genome Biology 有文章指出这
CRISPR/Cas9技术，热度背后的冷思考
近年来，CRISPR/Cas9基因编辑技术正在给整个科研界带来革命性变化，该技术使用CRISPR系统将Cas9蛋白和向导RNA注入小鼠受精卵，就能轻松实现基因敲除，同时，注入Donor DNA则可实现基因敲入，甚至国际著名学术期刊Genome Biology有文章指出这项新技术将很快取代使用胚胎
RNAi引起的基因敲除
RNAi引起的基因敲除：由于少量的双链RNA就能阻断基因的表达，并且这种效应可以传递到子代细胞中，所以RNAi的反应过程也可以用于基因敲除。
基因敲除技术的分类
基因敲除分为完全基因敲除和条件型基因敲除（又称不完全基因敲除）两种。完全基因敲除是指通过同源重组法完全消除细胞或者动物个体中的靶基因活性，条件型基因敲除是指通过定位重组系统实现特定时间和空间的基因敲除。噬菌体的Cre/LoxP系统、Gin/Gix系统、酵母细胞的FLP/FRT系统和R/RS系统是现阶