如何进行pcr结果分析

1、如果有标准曲线,按照标准曲线计算。 2、一般都是相对量,则用delta delta CT方法来计算。 3、举例如下:对照组基因A的CT值为20, 内参(比如βactin)CT值15。实验组基因A CT值18,内参CT值14。 4、首先算加样量:delta CT=15-14=1。2的1次方是2。也就是说实验组的加样量是对照组的2倍。基因A: delta CT=20-18=2。2的2次方是4。也就是说基因A的量在实验组是对照组的4倍。但是由于加样量是2倍,所以4处以2=2,最后的相对量是2倍。 5、几点注意:必须确定扩增的特异性,只有相同目标的CT值才能相减(扩增效率有可能不同),2的某次方只是理论值,实际扩增效率低于2,最好不用Syber Green。 扩展资料: PCR原理: 1、PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物e799bee5baa6e58685......阅读全文

实时荧光定量PCR的结果该怎样分析

1、如果有标准曲线,按照标准曲线计算;2、一般都是相对量,则用delta delta CT方法来计算;3、引物或探针降解:可通过PAGE电泳检测其完整性;4、模板量不足:对未知浓度的样品应从系列稀释样本的最高浓度做起;5、看CT值是分析荧光定量PCR最直观的一个数据,CT值一般在35左右就失去参考价

实时荧光定量PCR的结果该怎样分析

如果有标准曲线,按照标准曲线计算。一般都是相对量,则用delta delta CT方法来计算。举例如下:对照组基因A的CT值为20, 内参:比如βactin)CT值15。实验组基因A CT值18,内参CT值14。如果是realtime做表达量,用excel的制图,将每个个体的Ct值平均数做出柱状图就

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如果有标准曲线,按照标准曲线计算。一般都是相对量,则用delta delta CT方法来计算。举例如下:对照组基因A的CT值为20, 内参:比如βactin)CT值15。实验组基因A CT值18,内参CT值14。如果是realtime做表达量,用excel的制图,将每个个体的Ct值平均数做出柱状图就

如何解读实时荧光定量pcr结果分析?

  实时荧光定量PCR技术是在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。  基线在PCR扩增反应的最初数个循环里,荧光信号变化不大,接近一条直线,这样的直线即基线。光域值threshold的设定,一般将PCR反应前15个循环的

实时定量PCR的结果是怎样分析

1、如果有标准曲线,按照标准曲线计算。2、一般都是相对量,则用delta delta CT方法来计算。3、举例如下:对照组基因A的CT值为20, 内参(比如βactin)CT值15。实验组基因A CT值18,内参CT值14。4、首先算加样量:delta CT=15-14=1。2的1次方是2。也就是说

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1、如果有标准曲线,按照标准曲线计算;2、一般都是相对量,则用delta delta CT方法来计算;3、引物或探针降解:可通过PAGE电泳检测其完整性;4、模板量不足:对未知浓度的样品应从系列稀释样本的最高浓度做起;5、看CT值是分析荧光定量PCR最直观的一个数据,CT值一般在35左右就失去参考价

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实时定量PCR的结果是怎样分析的

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pcr结果怎么看

  辛辛苦苦提完 RNA,逆转录后一个个孔加完引物和模板,最后进行 RT-PCR,你以为这样就可以美滋滋地坐等结果了?等到一幅下面这样的结果图,不知道对于刚接触 RT-PCR 的你来说内心是否是崩溃的?  这是啥?怎么看?  别急,让我慢慢跟你介绍,看完后你就能准确的分析出你的 RT-PCR 结果了

荧光定量PCR的原理以及的结果如何分析

不同探针有些许差别,但原理一样。简单说:就是在探针上加上荧光素,在Taq聚合酶作用下合成带有荧光素探针的片段,再给它激发光,释放一光波,仪器检测并分析。至于结果:仪器有自动分析功能,会给出一个阈值线。阈值线与荧光曲线的交叉点就是CT值。根据CT值和你使用的试剂盒说明书来判读结果。

荧光定量PCR仪的操作流程与结果分析方法

  荧光定量PCR仪的操作流程:确立实验方案,样品制备,设计引物及探针,预实验,标准品及标准曲线的建立,定量PCR检测,分析数据。    1、样品的制备    DNA样品,主要是DNA提取,提取的DNA可TE缓冲液溶解后-20度保存;对于RNA样品,抽提RNA后要迅速反转录,将RNA反转录为cDNA

实时荧光定量PCR结果分析,教你从菜鸟到高手

  实时荧光定量PCR技术(Real-Time Quantitative PCR)是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。  在对荧光定量PCR结果进行分析时首先要了解几个概念:  基线(Baseline)指在PCR扩

PCR仪RACE的PCR结果有杂带

  RACE PCR杂带或非特异性PCR条带可能是由于以下原因:  *GSP与其他cDNA的非特异性结合会导致在扩增目的产物时得到无关产物。  *GeneRacer引物和cDNA的非特异性结合会导致产生一端带有GeneRacer引物序列的PCR产物。  *RNA降解。  *PCR管或试剂污染。  注

PCR琼脂糖凝胶电泳结果的分析介绍

  实验设计的引物扩增Myc 3种基因,经PCR扩增,喉癌组织及正常组织细胞DNA在琼脂糖凝胶上均可见2条小于300 bp 的电泳带。第1条带为N-myc( 230bp)和L-myc(227 bp)2个DNA片段合成带,因两者只相差3 bp,故琼脂糖凝胶电泳不能将其分开而呈现1条带;第2条电泳带为C

PCR反应出现假阴性结果无扩增条带原因分析

PCR 反应的关键环节有 : ① 模板核酸的制备; ② 引物的质量与特异性; ③ 酶的质量; ④ PCR循环条件; 寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究 , 可能出现的原因有以下几点: 1 ) 模板: ① 模板中含有杂蛋白质; ② 模板中含有Taq酶抑制剂; ③

实时荧光定量PCR扩增和结果分析的标准操作程序

1 目的:保证扩增及结果分析的标准化、规范化。 2 该SOP变动程序:本文件的变动,可由任一使用该文件的工作人员提出,报经室技术负责人,由季度组长会议决定。如通过则公布实行。 3 使用范围:使用GeneAmp 5700型扩增仪的实时荧光定量PCR实验室。     4 标准程序4.1 核酸扩增标准程序