WesternBlot一抗二抗去除液（酸性）使用说明
ECL 化学发光法是目前最常用、最灵敏的 Western Blot 检测方法。由于这些底物不会在膜表面沉淀、牢牢结合在膜上，因此可以通过一抗二抗去除液(Stripping buffer)将亲和结合的一抗和二抗去除。一抗二抗去除液既要足够强烈而有效解离结合的抗体，也要足够温和使转移的目标蛋白仍能完整地留在 NC 膜或 PVDF 膜上。通过使用一抗二抗去除液，充分去除一抗二抗，可以非常方便地重新利用使用过的膜检测其它蛋白。和重新跑一次 SDS-PAGE 胶相比，不仅省时省力，而且可以消除重新上样而带来的误差，使可比性更强。一、 使用方法1. 用本产品覆盖经 ECL 发光的膜，室温孵育 5 - 10 分钟。2. 弃去去除液，再加入新鲜的去除液覆盖经ECL发光的膜，室温孵育5 - 10分钟。3. 弃去去除液，用 PBS 洗涤 10 分钟两次。4. TBST洗涤5分钟。可用于接下来的封闭、孵育。二、注意事项1. 如使用辣根......阅读全文
western一抗和二抗的稀释倍数一般是多少
一般抗体的说明上，都给出了一个范围，一抗为1:200-2000，二抗为1:1000-10000。western blot 的原理：本质是抗原抗体反应。第一抗体就是能和非抗体性抗原(特异性抗原)特异性结合的蛋白。种类包括单克隆抗体和多克隆抗体。第二抗体是能和抗体结合，即抗体的抗体，其主要作用是检测抗体
western一抗和二抗的稀释倍数一般是多少
一般根据抗体的特异性和亲和度。一抗的浓度范围比较大，从1:200到1:1000都有，这个要多做几次才能确定。二抗的稀释倍数打，一般用1:5000到1:10000就可以了。
western－blot－一抗孵育4小时有影响吗
western blot 一抗孵育4小时当然有影响的，一抗孵育时间太长容易导致非特异性吸附加深一般可以室温孵育三十分，然后四度过夜。或者选择室温孵育2小时直接二抗。因为洗膜洗去的是未结合的抗体，抗体结合上就不容易洗掉了。洗膜不完全背景会深，但洗膜时间延长并不能完全去除背景。
western－blot－一抗孵育4小时有影响吗
western blot 一抗孵育4小时当然有影响的，一抗孵育时间太长容易导致非特异性吸附加深一般可以室温孵育三十分，然后四度过夜。或者选择室温孵育2小时直接二抗。因为洗膜洗去的是未结合的抗体，抗体结合上就不容易洗掉了。洗膜不完全背景会深，但洗膜时间延长并不能完全去除背景。
western－blot－一抗孵育4小时有影响吗
western blot 一抗孵育4小时当然有影响的，一抗孵育时间太长容易导致非特异性吸附加深一般可以室温孵育三十分，然后四度过夜。或者选择室温孵育2小时直接二抗。因为洗膜洗去的是未结合的抗体，抗体结合上就不容易洗掉了。洗膜不完全背景会深，但洗膜时间延长并不能完全去除背景。
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western blot 一抗孵育4小时当然有影响的，一抗孵育时间太长容易导致非特异性吸附加深一般可以室温孵育三十分，然后四度过夜。或者选择室温孵育2小时直接二抗。因为洗膜洗去的是未结合的抗体，抗体结合上就不容易洗掉了。洗膜不完全背景会深，但洗膜时间延长并不能完全去除背景。
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western如何孵一抗
将抗体稀释到推荐浓度，这要是看你放膜的容器大小，如果容器刚好和膜差不多，只要配少量的一抗溶液就可以完全覆盖膜，但是如果容器较大，就需要事先看多少ml的溶液才能够用。抗体溶液倒到膜上后，将容器放到一个水平摇床，或者是染色摇床上，缓慢的摇动。可以在4C过夜孵育，也可以在室温孵育1h即可。
没有注明可以用来做Western－blot的一抗可以用来做Western－...
没有注明可以用来做Western blot的一抗，可以用来做Western blot吗？不一定，因为有的抗体是识别线性表位的，有的是识别构象型表位，识别构象型表位的抗体不能用于Western blot，因为在Western blot中抗体识别的是完全变性的蛋白质抗原，而蛋白质抗原的构象型表位变性时被
western－blot－一抗孵育过夜具体是指孵育多少小时
一抗孵育过夜操作方法：下班时间——孵育一抗——放置在4℃冰箱内——第二天上班拿来孵育二抗时间8~10个小时，都行，
western－blot－一抗孵育过夜具体是指孵育多少小时
一抗孵育过夜操作方法：下班时间——孵育一抗——放置在4℃冰箱内——第二天上班拿来孵育二抗时间8~10个小时，都行，
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一抗、二抗如何保存
工作液根据需要稀释在5%奶粉里，再加入少量叠氮化钠（大约0.01% w/v），4度保存。Alisa_lin(站内联系TA)分装，-20度保存。不要反复冻融，没有用过粉末的二抗，按说明书呗石头2011(站内联系TA)液体的一抗没加甘油的话尽量不要放在负二十，因为用的时候反复冻融不好。粉末状的二抗负二十
Western－Blot实验（二）
小巧的体格，却一应俱全，可以灵活控制多种应用程序，包括化学发光，荧光，DNA/蛋白胶。可以满足对实验室各种样品成像的要求。是目前市面上唯一的一款既可进行Cy3, Cy5, Cy2 多色荧光LED成像，又可在700和800nm处进行近红外激光定量荧光western 成像系统。这达到对成像最完美
Western－Blot详解（二）
11、NaN3 0.02% 叠氮钠(有毒，戴手套操作)，溶于磷酸缓冲盐溶液(PBS)。12、Tris缓冲盐溶液(TBS):20mmol/LTris/HCL(pH7.5)，500mmol/LnaCl。13、Tween20(15)鼠抗人-MMP-9(16)鼠抗人-TIMP-1。14、过氧化物酶标记的第二