没有注明可以用来做Westernblot的一抗可以用来做Western...
没有注明可以用来做Western blot的一抗,可以用来做Western blot吗?不一定,因为有的抗体是识别线性表位的,有的是识别构象型表位,识别构象型表位的抗体不能用于Western blot,因为在Western blot中抗体识别的是完全变性的蛋白质抗原,而蛋白质抗原的构象型表位变性时被破坏。......阅读全文
没有注明可以用来做Western-blot的一抗可以用来做Western-...
没有注明可以用来做Western blot的一抗,可以用来做Western blot吗?不一定,因为有的抗体是识别线性表位的,有的是识别构象型表位,识别构象型表位的抗体不能用于Western blot,因为在Western blot中抗体识别的是完全变性的蛋白质抗原,而蛋白质抗原的构象型表位变性时被
oct包埋的组织可以做western-blot吗
OCT包埋剂(SAKURA产品,MADE IN USA)包埋流程:1. 将放在蔗糖溶液中的组织块取出,放入20g L-1 蔗糖与OCT包埋剂1:1体积比例混合液中,室温浸泡2h2. 移入OCT包埋剂中室温浸泡4h,更换新的OCT包埋剂,室温浸泡6h.3. 将标本置于托物台,用恒冷箱切片机切片(一般-
做western-blot洗膜时间可以缩短吗
这取决于你的抗体的特异性怎么样。洗膜时间通常是一定的,但是如果你的抗体表现很好,想要缩短也是没有问题的。但是如果做完以后,结果非特异多,或者不干净,那么保证洗膜时间,甚至延长,或者是改进洗膜液的成分都是有必要的。
做western-blot-的一抗孵育的原理
只是简单的抗原抗体反应而已,抗体的氨基酸序列与抗原氨基酸序列相互匹配才能发生反应。所以不同的蛋白质要选择与其相对应的抗体,是特异性反应。
做western-blot-的一抗孵育的原理
只是简单的抗原抗体反应而已,抗体的氨基酸序列与抗原氨基酸序列相互匹配才能发生反应。所以不同的蛋白质要选择与其相对应的抗体,是特异性反应。
western-blot的一抗、二抗可以重复用么
保存得当的话,一抗工作液可重复利用2-3次一般不影响效果,但也不绝对,主要是看你的抗体本身如何,如果第一次做出来效果就不理想就不提倡这么做了。二抗还是算了吧!那么便宜,扔了不可惜。
western-blot的一抗、二抗可以重复用么
保存得当的话,一抗工作液可重复利用2-3次一般不影响效果,但也不绝对,主要是看你的抗体本身如何,如果第一次做出来效果就不理想就不提倡这么做了。二抗还是算了吧!那么便宜,扔了不可惜。
western-blot的一抗、二抗可以重复用么
保存得当的话,一抗工作液可重复利用2-3次一般不影响效果,但也不绝对,主要是看你的抗体本身如何,如果第一次做出来效果就不理想就不提倡这么做了。二抗还是算了吧!那么便宜,扔了不可惜。
外周血单个核细胞可以用来做哪些实验
外周血单个核细胞即外周血中具有单个核的细胞,包括淋巴细胞和单核细胞。体外检测淋巴细胞首先要分离外周血单个核细胞,目前主要的分离方法是Ficoll-hypaque(葡聚糖-泛影葡胺)密度梯度离心法,因为血液中各有形成分的比重存在差异最多12天,但需要刺激。 PBMC(外周血单个核细胞)是原代细胞,单纯
使用胶做western-blot的方法
在经典的Western Blot的世界里,蛋白电泳—转膜—封闭—抗体—显色这个五步骤环环相扣,构成WB完整过程,就象砌积木一样,少了前面一步的基础后面的就砌不上去。但是亲爱的朋友,告诉我,你们在一次又一次重复这个貌似简单又颇为费时的实验时,有没有设想过能省略掉其中的某个费时的非必需步骤,更直接更快得
电泳做Western-Blot实验的方法技巧
电泳做western blot的时候,大家往往会摸索一抗、二抗的浓度,封闭时间,曝光时间等等,而每次变换其中的一个条件就需要从新跑胶、转膜,甚至重新提蛋白,这样会浪费大量的时间。其实完全没有必要这样。一次转膜后,将PVDF膜晾干,裁减成小块,保存起来,用的时候取出一块,没有任何影响。这对于摸索条
western用过的一抗可以回收再用吗
中间做过strip吗?是不是strip的太剧烈了,把膜上的蛋白完全都剥掉了。尝试用一些温和的剥脱方法,降低温度,降低SDS浓度和处理时间可能会有改善。另外如果膜上蛋白敏感,有降解等因素,也可能会导致检测不到。需要确认一下。
western用过的一抗可以回收再用吗
中间做过strip吗?是不是strip的太剧烈了,把膜上的蛋白完全都剥掉了。尝试用一些温和的剥脱方法,降低温度,降低SDS浓度和处理时间可能会有改善。另外如果膜上蛋白敏感,有降解等因素,也可能会导致检测不到。需要确认一下。
western-blot转膜是怎么做的
蛋白免疫印迹( Western Blot) 是将电泳分离后的细胞或组织总蛋白质从凝胶转移到固相支持物NC膜或PVDF 膜上。目前主流方法是电转印法,分为湿式转印与半干转印。湿式转印是将胶块垂直方向夹在湿式转印槽内进行电转印。以E-Blotter湿转槽为例,一般使用垂直电泳槽的缓冲液槽体,将内部垂直电
western-blot-封闭液中直接加一抗孵育可以吗
可以的,一抗本来就应该用封闭液稀释使用的.但是切记在将膜放入封闭液之前用TBST洗膜,以免残留的转膜液影响抗原抗体的结合.
做电泳跑page、提取质粒、做WESTERN-BLOT时注意点
做电泳时注意容易出问题,以下问题要注意1. 跑page胶的时候小电压跑会避免高电压产生的热量尔导致的胶层变形。低电压泳道会比大电压泳道跑的直一些,且分离效果更高,有利于分子量相差不大的蛋白分离。2. 提取质粒的时候最后一步的酒精挥发很关键,基本上是其后续的酶切反应的决定性因素。所以这一步尽量挥发长一
蛋白浓度多少做westernblot比较合适
Western-blot是一种半定量的检测手段。 个人认为如果要通过灰度值来计算蛋白浓度,那就是和内参来做对比,因为内参的浓度是已知且单一条带的蛋白样品。通过待测样品盒内参样品灰度值做对比可以算出待测样品大概的浓度。
荧光定量PCR技术为什么可以用来做精确定量检测?
典型的扩增曲线包括基线期,指数增长期,线性增长期和平台期;基线期虽然在进行指数扩增,但是荧光信号变化不大;指数增长期在进行指数扩增,荧光信号也在以指数增长;线性增长期虽然荧光在增长,但其增长无明确的数学关系;平台期荧光几乎无增长,说明反应体系内DNA含量基本稳定,几乎不在增加。以上4个时期是根据其扩
western-blot中的一抗如何选择
一般选择的原则是去文献中找,看看别人做和你一样的目的蛋白的时候用的都是哪家得抗体,都有介绍的,看看图片效果怎么样。多找出一些文献,然后根据你掌握的信息选择一种最便宜,最高效,特异性最好的抗体。一般做科研的人都是这么选择抗体的,不能蒙着买,毕竟不便宜的。
western-blot-NC膜可以反复用多少次
此膜是可以重复使用的。所以多个指标也只需要跑一次胶,但是首先要保证你的蛋白在胶上面,跑个MARK作个参照,对应一下分子量,不要切胶上把你要检测的蛋白给切除了。我们实验室的做法是再次使用的使用先用2%的NAOH洗5分钟,水洗5~10分钟,重新封闭,加一抗二抗,效果很好的!
western-blot-一抗用什么溶剂溶解
western blot 一抗一般都是以原液的形式保存的,不需要用溶剂溶解western blot 一抗使用的时候一般只需要稀释,购买时厂家应该会提供一抗稀释液。如果没有一抗稀释液可以用TBST或者PBST稀释,这个要看具体使用的情况了
western-blot-一抗用什么溶剂溶解
western blot 一抗一般都是以原液的形式保存的,不需要用溶剂溶解western blot 一抗使用的时候一般只需要稀释,购买时厂家应该会提供一抗稀释液。如果没有一抗稀释液可以用TBST或者PBST稀释,这个要看具体使用的情况了
如何在Western-Blot中选择一抗?
说到免疫印迹最重要的就是抗体的选择了。在免疫印迹中我们会用到一抗和二抗等抗体,本文着重给大家介绍一下一抗的选择。一抗就是能和特异性抗原特异性结合的蛋白。种类包括单克隆抗体和多克隆抗体。抗体因其种属来源不同可以分为多种类型,如鼠抗,兔抗,羊抗等等,那么在使用时我们应该怎么选择呢?检测任何一种目的蛋白都
在使用PVDF膜做Western-Blot时,怎样消除背景?
使用PVDF膜时需要经过多步严格的封闭过程。可以通过增加2-5倍封闭液的浓度,延长封闭时间(如封闭液孵育过夜)和在37℃下进行封闭来提高效果,通过封闭液与空位点结合来消除背景,并与膜蛋白结合降低其与一抗的非特异性结合。 一些常用封闭液有脱脂奶粉,BSA和干酪素。
Western-Blot实验(一)
大家都知道Western Blot时间周期较长,大致可以分为忙碌的第一天,和心痛的第二天,像极了爱情。人生若只如初见,何事秋风悲画扇。经历转瞬即逝的新手曙光后,便进入漫长的黑夜。第一天,从最一步的配胶,到最后一步的孵育膜都极细心像极了爱情的萌芽期,需要精心的呵护。第二天经过繁琐的洗膜,孵二抗,洗膜,
Western-Blot详解(一)
Western免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测。本文主要通过以下几个方面来详细地介绍一下Western Blot技术:一、原理二、分类i.放射自显影ii.底物化学
关于酒精是否可以用来做微生物样品的保护剂解答
欢迎回来!我们将继续回来与大家一起分享一些新颖的不一样的想法。分享一些客户常问的技术问题,以及我们的回答。科学家们提出了使用我们产品过程中遇到的问题,我们给与了回答,还有什么比这个更节省您的时间?这周我们我们讨论:为什么用酒精作为防腐剂保存环境样品不是个好主意?问:我们想用PowerSoil DNA
western-blot中的一抗是甚么东西
一抗就是用来和你要检测的蛋白发生免疫反应的抗体确定了需要检测样品的种属,就可以选择对应的一抗而二抗是根据一抗来选择的,比如一抗是小鼠来源的,二抗就要是抗小鼠的
做western-条带老是出现反白
做western条带老是出现反白可能的原因是化学发光是个耗能过程,局部能量消耗过大,导致能量不足,也就发不出光了,所以条带反白。降低一抗、二抗浓度,蛋白上样量也可以降低。
Western-Blot操作步骤(一)
背景:蛋白质印迹的发明者是斯坦福大学George Stark。Neal Burnette于1981年所著的AnalyticalBiochemistry中首次被称为Western Blot。最开始做印迹的是一个叫Southern的科学家,但印迹的对象是DNA链,他把这种技术称为Southern