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Sumo化蛋白定量试剂盒—小泛素化研究

众所周知,泛素(ubiquitin, Ub)是一类高度保守的小蛋白, 可与靶蛋白的赖氨酸残基共价连接, 形成多聚泛素链行使指导蛋白质降解的功能。类似于泛素化修饰过程, 小泛素相关修饰物(small ubiquitin related modifier, SUMO)也可以共价修饰靶蛋白的赖氨酸残基,目前SUMO化修饰已经成为公认的真核细胞特有的翻译后蛋白质修饰标志之一。SUMO与靶蛋白之间这种可逆的共价连接,在核质运输、DNA与蛋白质结合活性、蛋白质之间相互作用、转录调控、DNA修复以及维持基因组稳定等方面均发挥着重要的调节作用。在许多人类疾病如癌症和神经退化性疾病中,SUMO化修饰作用对疾病的发生与发展亦起着极为重要的作用,也正是如此,才吸引了全世界越来越多的科学家投身于SUMO化研究浪潮中来! ......阅读全文

军事医学科学院:差异表达蛋白统计研究方法比较

  随着质谱技术的快速发展, 蛋白质组学已成为继基因组学、转录组学之后的又一研究热点, 寻找可靠的差异表达蛋白对于生物标记物的发现至关重要. 因此, 如何准确、灵敏地筛选出差异蛋白已成为基于质谱的定量蛋白质组学的主要研究内容之一. 目前, 针对该问题的研究方法众多, 但这些方法策略的适用范围不尽相同

新时代下对于Western Blotting发表文章的新要求(三)

  在《J Proteomics》期刊杂志中2020年2月刊发了《40 years Western blotting: A scientific birthday toast》的文章综述,其中指出Western blotting已经有40多年的历史,仍然是现在单一蛋白常用的分析技术,但因为其数据重复

定量western:最佳的蛋白印迹标准化方法是什么?

  现代数字检测仪器对于western blotting不仅仅是检测“有或没有”的技术,还可以进行western blotting重复性和定量的检测。 在检测方法的线性动态范围,对数据进行标准化以控制蛋白上样量和膜转印带来的变化,可以获得真正的定量结果。 但是,对蛋白印迹进行标准化的最佳方法是什么?

定量westerns:最佳的蛋白印迹标准化方法是什么?

  现代数字检测仪器对于western blotting不仅仅是检测“有或没有”的技术,还可以进行western blotting重复性和定量的检测。 在检测方法的线性动态范围,对数据进行标准化以控制蛋白上样量和膜转印带来的变化,可以获得真正的定量结果。 但是,对蛋白印迹进行标准化的最佳方法是什么?

新时代下对于Western Blotting发表文章的新要求

在《J Proteomics》期刊杂志中2020年2月刊发了《40 years Western blotting: A scientific birthday toast》的文章综述,其中指出Western blotting已经有40多年的历史,仍然是现在单一蛋白常用的分析技术,但因为其数据

一小时 DDA 鉴定 DIA 定量 4000 个 Hela 蛋白(一)

引言数据非依赖性的扫描模式(data-independent acquisition, DIA)是近几年来发展的一种新的质谱数据采集方式[1]。它的理念是用二级碎片离子进行蛋白相对/绝对定量。DIA 扫描模式中,超高分辨质谱对特定质量范围内的所有母离子进行碎裂,采集所有母离子的碎片离子,并快

Nature Methods:评估荧光蛋白的光激活效率

  光控的荧光探针,是对局部进行超高分辨率显微分析的核心。其中,荧光蛋白可以通过基因编码,实现与目的蛋白的1:1标记。所以,荧光蛋白探针特别适合于单分子计数。   近日,ICFO的科学家们首次在单分子水平上,确定了多个荧光蛋白的光激活效率,这一参数对于单分子计数非常重要。文章发表在一月五日的Nat

Nature Methods:评估荧光蛋白的光激活效率

  光控的荧光探针,是对局部进行超高分辨率显微分析的核心。其中,荧光蛋白可以通过基因编码,实现与目的蛋白的1:1标记。所以,荧光蛋白探针特别适合于单分子计数。   近日,ICFO的科学家们首次在单分子水平上,确定了多个荧光蛋白的光激活效率,这一参数对于单分子计数非常重要。文章发表在一月五日的Nat

总蛋白仪与内参的可靠性比较

目前,多个主流期刊和免疫印迹专家提出了看家基因已经不适合作为内参使用了。因为大多数看家基因都是高丰度蛋白,其产生的信号大多都会接近线性动态范围的上限,当我们在检测低丰度蛋白的时候,往往蛋白的上样量会很大,易造成信号过饱和,这时候常见的内参产生的信号已经不能正确反应上样量的差异了。并且研究发现一些看家

动物血小板线粒体可溶性总蛋白制备试剂盒使用说明

  动物血小板线粒体可溶性总蛋白制备试剂盒产品说明书(中文版)   主要用途   动物血小板线粒体可溶性总蛋白制备试剂是一种旨在通过低速差速离心和化学渗压休克处理纯化血小板、以及物理或化学破膜和高速差速离心的方法,直接从动物血细胞中分离出完整而纯化的血小板线粒体细胞器,并在蛋白酶抑制混合剂的

动物细胞线粒体可溶性总蛋白制备试剂盒的使用方法

  动物细胞线粒体可溶性总蛋白制备试剂盒产品说明书(中文版)   主要用途   动物细胞线粒体可溶性总蛋白制备试剂是一种旨在从动物细胞中分离出完整而纯化的线粒体细胞器,并在蛋白酶抑制混合剂的帮助下,使已纯化的线粒体膜结构破裂而获得线粒体内活性蛋白酶系统的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、

一小时DDA鉴定DIA定量4000个Hela蛋白(一)

引言数据非依赖性的扫描模式(data-independent acquisition, DIA)是近几年来发展的一种新的质谱数据采集方式[1]。它的理念是用二级碎片离子进行蛋白相对/绝对定量。 DIA 扫描模式中,超高分辨质谱对特定质量范围内的所有母离子进行碎裂,采集所有母离子的碎片离子,并

蛋白质组学实验技术大全

每一个领域的发展都是基于技术的进步和革新,蛋白质组学亦然。蛋白质的可变性和多样性等特殊性质导致了蛋白质研究技术远远比核酸技术要复杂和困难得多,但正是这些特性参与和影响着整个生命过程。在开始实验之前,先看看这篇技术简介吧。一 蛋白质与DNA相互作用在许多的细胞生命活动中,例如DNA复制、mR

Western blot如何进行实验质控

  WB实验总做不好,那么如何进行WB实验质控呢?   做过WB实验的小伙伴都经历过成像时忐忑不安,出来结果时的彷徨无措,为什么条带没有出啦,为什么背景这么高,为什么受伤的总是我,看着旁边小伙伴漂亮的结果图,心生羡慕嫉妒,那么小编给大家整理总结了如何进行WB的质控和注意哪些检查点。   蛋白样品

尿液蛋白质检查

尿液蛋白为尿液化学成分检查中最重要的项目之一。正常人的肾小球滤液中存在小分子量的蛋白质,在曲小管时绝大部分又被重吸收,因此终尿中的蛋白质含量很少,仅为30-130mg/24h。随机一次尿中蛋白质为0.80mg/L。尿蛋白定性试验呈阴性反应。当尿液中蛋白质超过正常范围时称为蛋白尿,含量大于0.1g/

重组人蛋白细胞因子的研究选择—细胞因子

1.重组蛋白表达体系MCE 重组蛋白表达体系主要有:大肠杆菌,酵母细胞,昆虫细胞和哺乳动物细胞。2.重组蛋白纯度和浓度测定重组蛋白纯度测定方法:a. SDS-PAGE 测定法;b. HPLC 测定法;c. 银染测定法。重组蛋白浓度测定方法:a. Bradford 蛋白定量测定法;b. BCA 蛋白定

Western blot如何进行实验质控?

WB实验总做不好,那么如何进行WB实验质控呢?做过WB实验的小伙伴都经历过成像时忐忑不安,出来结果时的彷徨无措,为什么条带没有出啦,为什么背景这么高,为什么受伤的总是我,看着旁边小伙伴漂亮的结果图,心生羡慕嫉妒,那么小编给大家整理总结了如何进行WB的质控和注意哪些检查点。蛋白样品:准备好裂解液后,使

超高效液质串联—检测鸡蛋过敏原

鸡蛋过敏的人群最为广泛,国外已经出台了强制性标识食品过敏原的法规,而国内只有针对出口食品过敏源成分的标准,以实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法和环介导等温扩增检测方法为主,需要开发制定高灵敏度的直接对常见致敏蛋白的定性定量方法,并制定相应的标识法规。 目前用于过敏原检测的手段主要有酶联免疫(

尿液蛋白质检查(1)

尿液蛋白为尿液化学成分检查中最重要的项目之一。正常人的肾小球滤液中存在小分子量的蛋白质,在曲小管时绝大部分又被重吸收,因此终尿中的蛋白质含量很少,仅为30-130mg/24h。随机一次尿中蛋白质为0.80mg/L。尿蛋白定性试验呈阴性反应。当尿液中蛋白质超过正常范围时称为蛋白尿,含量大于0.1g/L

定量western:最佳的蛋白印迹标准化方法是什么?

现代数字检测仪器对于western blotting不仅仅是检测“有或没有”的技术,还可以进行western blotting重复性和定量的检测。 在检测方法的线性动态范围,对数据进行标准化以控制蛋白上样量和膜转印带来的变化,可以获得真正的定量结果。 但是,对蛋白印迹进行标准化的最佳方法

杂质蛋白鉴定与定量的完美结合—Hi3分析方法

液质数据中,不但含有蛋白药序列表达是否正确的肽图信息,其它杂质蛋白同样可以被挖掘出来。然而,单纯的杂质蛋白鉴定却又是不够远远的,其确切的含量信息同样至关重要。沃特世PLGS软件可以在肽图液质数据中,进一步鉴定其中的杂质蛋白,并其相对含量信息进行分析。 一、“顺便”完成的杂质蛋白鉴定与相对定量使用相应

EMax Plus 微孔板读板机应用-Molecular Devices

 介绍随着光吸收法可以满足越来越多的应用检测领域,终点法读板机在实验室中的占有率也越来越高。例如ELISAs方法进行细胞因子定量和Bradford法进行蛋白定量。本篇应用就是要着重比较使用Bradford法进行蛋白定量检测时,Molecular Devices公司最新的产品EMax®

定量蛋白质组学质谱采集技术进展(一)

摘要 质谱是定量蛋白组学的主要工具。近年来随着定量蛋白质组学研究的深入,传统质谱定量技术面临着复杂基质干扰、分析通量限制等诸多问题。而最近一系列质谱新技术的发展,包括同步母离子选择(SPS)、质量亏损标记、平行反应监测(PRM)、多重累积(MSX)和多种全新数据非依赖性采集(DIA)等,为解决目前蛋

如何跳出WB设下的陷阱—WESTERN BLOT操作干货分享

做蛋白研究的小伙伴都知道,一个完整的Western Blot包括了很多个步骤,从蛋白提取到配胶、上样电泳,再到转膜、封闭,最后孵育一抗二抗后才能去进行检测。时间跨度非常长,而且这中间的每一步都包含了很多的小细节,稍有不慎就会导致结果出错,然后又得从头来过。所以,关于WB,几乎每一位经验丰富的实验

复杂基体中目标肽的测定

本文介绍了使用Thermo Scientific公司的TSQ Quantum Ultra质谱仪进行复杂生物机体中目标肽的方法,结果表明,基于串连质谱的选择反应监测(SRM)流程,该方法可以在具有高化合物背景的复杂基体中检测低浓度水平肽,同时保证良好的定量准确度和精密度。 目前一般生物标

纳米免疫比浊检测技术

目前,体液标志蛋白的检测方法主要采用免疫学方法,以酶联免疫吸附测定(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)、放射免疫测定(Radio immunoassay,RIA)和胶体金层析法(俗称“金标”)这几种方法为主。ELISA方法虽然在临床上使用了近二十

蛋白尿的五种类型-临检基础

蛋白尿的五种类型: 蛋白质检查是尿液化学成分检验中最重要的项目之一。当尿蛋白超过150mg/24h或超过100mg/L时,蛋白定性试验呈阳性,称为蛋白尿。蛋白尿持续超过0.15g/d,常为病理性,是肾脏疾病的可靠指标。 根据发生机理及原发病的部位,蛋白尿分为五种。下面对此进行详细介绍。 1.肾小

蛋白尿的五种类型

蛋白质检查是尿液化学成分检验中最重要的项目之一。当尿蛋白超过150mg/24h或超过100mg/L时,蛋白定性试验呈阳性,称为蛋白尿。蛋白尿持续超过0.15g/d,常为病理性,是肾脏疾病的可靠指标。根据发生机理及原发病的部位,蛋白尿分为五种。下面对此进行详细介绍。1.肾小球性蛋白尿这是最常见的一种蛋

QTRAP代表文献回顾

 生物分子发表的代表性文献 QTRAP:同时具有三重四极杆和线性离子阱性能的独一无二的LC/MS/MS系统       QTRAP系统最早在ASMS 2002上,作为第一台商用的线性离子阱发布,是世界上唯一的线性离子阱和三重四极杆的复合

细说蛋白尿成因、检验及其临床意义

蛋白尿是慢性肾病的典型症状,它是怎么形成的?     蛋白尿的形成原因与肾小球的屏障功能有着密不可分的关系。正常情况下,肾小球滤过膜有效滤过孔的半径约为30埃左右。凡分子量大于6~7万的物质难于通过滤过膜。血浆中白蛋白分子量为69000,分子半径为37埃左右,因此很难进入尿中