反向PCR（inversePCR）实验步骤
inverse-PCR是克隆插入片段侧翼序列非常有效的方法。通常采用的Tail-PCR假阳性太多，而Inverse-PCR一般只要有特异条带，基本上就是目的片段。基本步骤如下：1、反向PCR（Inverse PCR）原理：反向PCR是克隆T-DNA插入位点侧翼DNA序列非常有效的方法。a. 选择合适的限制性内切酶位点。并在T-DNA的边界（左边界、右边界均可）和酶切位点附近设计引物P1、P2；b. 回收DNA，T4连接酶连接，使酶切后的DNA片段环化；c. 回收连接后的DNA，用引物P1、P2做PCR，就可扩增到两端为T-DNA插入序列，中间为侧翼序列的片段。2、限制性内切酶消化：选择合适的限制性内切酶，基因组一定要切成弥散性的条带。在酶切之前，应对基因组DNA定量。根据T-DNA的左边界序列选择合适的酶切位点EcoRI，BamHI和HindIII/PstI，并在酶切位点上游附近设计引物Z1，Z2，Z3和Z4，然后用这些内切酶分......阅读全文
免疫PCR：基本实验步骤
主要程序（1） 抗原+生物素化抗体→抗原-生物素化抗体复合物；（2） 加亲合素→抗原-生物素化抗体-亲合素复合物；（3） 加生物素化DNA→抗原-生物素化抗体-亲合素-生物素化DNA；（4） PCR扩增生物素化DNA部分。实验步骤（1）制备生物素化DNA将噬粒 BLuescript skt,用生物素
荧光定量PCR实验步骤
1、总RNA抽提（枪头和离心管均经过湿热灭菌，无RNA酶） 1）取匀浆器，加入1ml的Trizol Reagent，置冰上预冷。 2）取100mg组织，加入到匀浆器中。 3）充分研磨直至无可见组织块。 4）12000rpm离心10min取上清。 5）加入250 μl三氯甲烷，颠倒离心管
PCR实验方法步骤
PCR在分子克隆和DNA分析中有多种用途，下面小编就向大家介绍PCR实验方法步骤：方法1/4在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。 10×PCR buffer 5 μl dNTP mix （2mM）
反向PCR引物设计的原理
可以这样来说吧，首先你应该有一条已知的序列，反向引物设计时在序列的5'方向找一段序列然后反向互补作为反向引物，在3'方向直接找一段序列作为正向引物。这样就OK了，这是引物的设计，至于其他条件可以参考相关文献.
反向pcr和反式pcr一样么
反式PCR,或者称反转录PCR(Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)、逆转录PCR,是聚合酶链式反应(PCR)的一种广泛应用的变形.在RT-PCR中,一条RNA链被逆转录成为互补DNA,再以此为模板通过PCR进行DNA扩增.P
反向PCR（Inverse－PCR）技术的定义和特点
1.概述：反向PCR(reverse PCR)是用反向的互补引物来扩增两引物以外的未知序列的片段，而常规PCR扩增的是已知序列的两引物之间DNA片段.实验时选择已知序列内部没有切点的限制性内切酶对该段DNA进行酶切，然后用连接酶使带有粘性末端的靶序列环化连接，再用一对反向的引物进行PCR，其扩增产物
荧光定量PCR具体实验步骤
荧光定量PCR具体实验步骤，1 样品RNA的抽提①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解。②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的氯仿，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色
荧光定量PCR实验基本步骤
1、目的基因（DNA和mRNA）的查找和比对；2、引物、探针的设计；3、引物探针的合成； 4、反应体系的配制； 5、反应条件的设定； 6、反应体系和条件的优化； 7、荧光曲线和数据分析； 8、标准品的制备；
PCR技术原理、实验步骤和应用
一、实验目的1.掌握聚合酶链式反应的原理。2. 掌握移液枪和PCR仪的基本操作技术。二、实验原理PCR技术，即聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）是由美国PE Cetus公司的Kary Mullis在1983年（1993年获诺贝尔化学奖）建立的。这项技术可在试
实时荧光定量PCR具体实验步骤
1 样品RNA的抽提①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解。②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的仿，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚仿相，中间层以及无色水相上
PCR实验的原理和方法步骤
原理就是碱基互补原则步骤模板DNA的变性：模板DNA经加热至94℃左右一定时 聚合酶链式反应间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；②模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至40~60℃左右，引物与模板
PCR技术原理、实验步骤和应用
一、实验目的1.掌握聚合酶链式反应的原理。2. 掌握移液枪和PCR仪的基本操作技术。二、实验原理PCR技术，即聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）是由美国PE Cetus公司的Kary Mullis在1983年（1993年获诺贝尔化学奖）建立的。这项技术
PCR实验的原理和方法步骤
原理就是碱基互补原则步骤模板DNA的变性：模板DNA经加热至94℃左右一定时 聚合酶链式反应间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；②模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至40~60℃左右，引物与模板
PCR技术原理、实验步骤和应用
一、实验目的1.掌握聚合酶链式反应的原理。2. 掌握移液枪和PCR仪的基本操作技术。二、实验原理PCR技术，即聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）是由美国PE Cetus公司的Kary Mullis在1983年（1993年获诺贝尔化学奖）建立的。这项技术可在试管
实时荧光定量PCR具体实验步骤
1 样品RNA的抽提①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解。②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的氯仿，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚氯仿相，中间层以及无色水相
PCR实验的原理和方法步骤
原理就是碱基互补原则步骤模板DNA的变性：模板DNA经加热至94℃左右一定时 聚合酶链式反应间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；②模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至40~60℃左右，引物与模板
PCR实验的原理和方法步骤
原理就是碱基互补原则步骤模板DNA的变性：模板DNA经加热至94℃左右一定时 聚合酶链式反应间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；②模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至40~60℃左右，引物与模板
PCR实验的原理和方法步骤
原理就是碱基互补原则步骤模板DNA的变性：模板DNA经加热至94℃左右一定时 聚合酶链式反应间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；②模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至40~60℃左右，引物与模板
逆转录PCR的实验步骤
一、实验器具与材料：1、移液枪：1ml、200μl、20μl、10μl、2μl2、吸头：1ml、200μl、20μl3、匀浆管：5ml4、吸头台：放置1ml吸头的一个，放置20μl吸头的一个5、EP管：1.5ml、0.2ml、100μl6、试剂瓶：2个60ml的棕色试剂瓶（广口，带盖）；1个125m
PCRDHPLC实验原理和步骤
【实验目的】1．了解PCR-DHPLC技术的原理。2．了解并熟悉PCR-DHPLC技术的步骤。【实验原理】DHPLC技术也称为WAVE核苷酸片段分析系统。利用高效液相色谱原理，PCR扩增后的DNA片段与缓冲液（TEAA）混合形成液相，流动相被高压驱动，通过一个DNA分离柱——DNA Sep柱
PCR技术原理、实验步骤和应用
一、实验目的1.掌握聚合酶链式反应的原理。2. 掌握移液枪和PCR仪的基本操作技术。二、实验原理PCR技术，即聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）是由美国PE Cetus公司的Kary Mullis在1983年（1993年获诺贝尔化学奖）建立的。这项技术可在
逆转录PCR的实验步骤
一、实验器具与材料： 1、移液枪：1ml、200μl、20μl、10μl、2μl2、吸头：1ml、200μl、20μl3、匀浆管：5ml4、吸头台：放置1ml吸头的一个，放置20μl吸头的一个5、EP管：1.5ml、0.2ml、100μl6、试剂瓶：2个60ml的棕色试剂瓶（广口，带盖
PCR实验的原理和方法步骤
原理就是碱基互补原则步骤模板DNA的变性：模板DNA经加热至94℃左右一定时 聚合酶链式反应间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；②模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至40~60℃左右，引物与模板
RTPCR实验原理与步骤
【实验原理】RT-PCR 是以RNA 为模板经逆转录反应（Reverse Transcription，RT）产生cDNA 第一链，再以cDNA 为模板进行PCR 扩增以检测目的基因的表达情况。【实验仪器】1. 恒温金属浴2. PCR 扩增仪【试剂及配制】RNA PCR Kit (AMV) Ver 3
PCR步骤
1、 DNA变性（90℃-96℃）：双链DNA模板在热作用下， 氢键断裂，形成单链DNA。2、退火（25℃-65℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部双链。3、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶（在72℃左右，活性最佳）的作用下，以dNTP为原料，从引物的5′端→3′端延伸，合成与模板互
PCR实验的准备工作及步骤
步骤构成：①模板DNA的变性：模板DNA经加热至94℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应做准备;②模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;③引
PCRSSP分析实验原理和步骤
PCR 序列特异性引物（sequence specific primer,SSP）分析法是使用能够特异识别特定等位基因的引物通过PCR扩增检测序列多态性的方法，也称作等位基因特异性引物PCR 法。本实验是应用PCR-SSP 法检测MN 基因型。[实验原理]根据决定某等位基因的碱基性质，设计3′端第一
实时荧光定量PCR具体实验步骤（二）
5 制备用于绘制梯度稀释标准曲线的DNA模板①针对每一需要测量的基因，选择一确定表达该基因的cDNA模板进行PCR反应。反应体系：序号 反应物 剂量1 10× PCR缓冲液 2.5 ul2 MgCl2 溶液 1.5 ul3 上游引物F 0.5 ul4 下游引物R 0.5 ul5
PCRSSP分析实验原理和步骤
PCR 序列特异性引物（sequence specific primer,SSP）分析法是使用能够特异识别特定等位基因的引物通过PCR 扩增检测序列多态性的方法，也称作等位基因特异性引物PCR 法。本实验是应用PCR-SSP 法检测MN 基因型。[实验原理]根据决定某等位基因的碱基性质，设计3′端
PCRDGGE实验原理和操作步骤
【实验目的】 1．了解PCR-DGGE技术的原理。 2．了解并熟悉PCR-DGGE技术的步骤。 【实验原理】 变性梯度凝胶电泳（DGGE）是一种根据DNA片段的熔解性质而使之分离的凝胶系统。核酸的双螺旋结构在一定条件下可以解链，称之为变性。核酸50%发生变性时的温度称为熔解温度（Tm