基于数字PCR的单分子DNA定量技术研究进展（一）
摘要 数字PCR是一项针对单分子目标DNA的绝对定量技术。该技术是将含有DNA模板的反应溶液分配到大量独立的反应室中并且发生扩增反应，通过统计反应室中的阳性信号来定量DNA的拷贝数。DNA样品在反应室中随机和独立分布是单分子成功扩增和准确定量D NA拷贝数的关键因素。本文综述了数字PCR的发展历史、数字PCR与实时荧光定量P CR的区别，以及数字PCR在临床诊断、转基因成分定量、单细胞基因表达、环境微生物检测和下一代测序等方面的最新进展，并展望了该技术的应用前景 关键词 数字PCR，绝对定量，实时荧光定量PCR，拷贝数，单分子。 核酸的序列、多样性和丰度分析是现代生物学的基础。核酸定量技术在诊断和个体化医疗、食品检验和转基因生物检测、病原体鉴定、法医科学等方面已被广泛应用，同时这些应用也推动了核酸定量技术的进步。DNA分子扩增技术的应用促进了分子生物学技术的发展[2]。精确定量 DNA 拷贝数是现代分子生物学和医学的......阅读全文
基于数字PCR的单分子DNA定量技术研究进展（一）
摘要 数字PCR是一项针对单分子目标DNA的绝对定量技术。该技术是将含有DNA模板的反应溶液分配到大量独立的反应室中并且发生扩增反应，通过统计反应室中的阳性信号来定量DNA的拷贝数。DNA样品在反应室中随机和独立分布是单分子成功扩增和准确定量D NA拷贝数的关键因素。本文综述了数字PCR的发展历
基于数字PCR的单分子DNA定量技术研究进展（二）
2 qPCR与dPCR比较研究 qPCR是目前DNA定量研究的主要技术，该技术通过在PCR反应体系中加入荧光结合染料(SYBR green I) 或荧光标记的探针( 如TaqMan Probes) ，利用实时积累的荧光信号监测整个扩增过程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析，以此来评估
基于数字PCR的单分子DNA定量技术研究进展（三）
3.2 dPCR在转基因植物检测方面的研究 转基因植物及相关食品的定量分析主要测定转入基因的相对含量。目前常用qPCR作为核酸定量方法。dPCR可以不需要校准物而准确测量低拷贝的DNA分子。Corbisier 等用dPCR分析了提取于MON810玉米种子的外源检测基因和hmg基因的拷贝数，验证了dP
基于数字PCR的单分子DNA定量技术研究进展（四）
NGS 是一种识别和确认未知致病菌的前景广阔的技术，然而其在生物防御和公共健康应用等方面的时效性，却往往因为缺乏快速、有效、可靠的自动DNA样品制备方法而受到限制。为了突破这种限制，Kim 等设计了一种基于流体分布元件的数字微流体(DMF) 平台，使得多子系统模块能够进入自动NGS库样品
数字PCR技术在DNA定量精准等领域的应用
数字PCR先进的数字PCR技术实现了样品中的单分子核酸扩增，从而使的DNA定量的精准度提高到了全新水平。Philip与Stilla Technologies的首席执行官兼联合创始人Rémi Dangla进行了交流，讨论了数字PCR技术领域的进展和挑战。Stilla Technologies公司总部位
基于EVAGREEN®方法的CRYSTAL数字PCR绝对定量检测
基于EVAGREEN®方法的CRYSTAL数字PCR绝对定量检测EvaGreen®是一种无致突变性、无细胞毒性的DNA结合染料，NaicaTM Crystal全自动微滴芯片数字PCR仪系统可兼容EvaGreen®染料进行的数字PCR实验分析。反应体系中游离的的EvaGreen®染料不发出荧光信号，但
数字PCR在低丰度DNA模板分子的精确定量的应用
由于绝大部分微液滴中只含单个或不含模板分子，使得低丰度DNA模板分子的扩增不受高丰度模板分子扩增的竞争抑制：与此同时，样品中可能存在的抑制剂也在分配到微液滴的过程中进行了相对稀释，作用于单个微液滴内模板扩增的抑制剂数量大幅降低，从而提高PCR扩增对抑制剂的耐受程度，因此可应用于诸多临床样品（如血液、
DNA分子标记技术研究进展（一）
遗传标记在遗传学的建立和发展过程中有着举足轻重的作用，随着遗传学的进一步发展和分子生物学的异军突起，遗传标记先后相应地经历了形态标记、细胞学标记、生化标记和DNA分子标记四个发展阶段。前三种标记都是以基因表达的结果为基础的，是对基因的间接反映；而DNA分子标记则是DNA水平遗传变异的直接反映，它具有
一文知晓PCR，定量PCR，数字PCR方法选择
从1985年至今的30多年时间里，PCR分析经历了三代技术的发展。diyi代传统PCR技术，采用琼脂糖凝胶电泳的方法对PCR产物进行定性分析。第二代荧光定量PCR技术，通过在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号的积累实时监控PCR进程，最后用Cq值对基因进行定量分析。第三代数字PCR技术，通过
普通PCR、实时荧光定量PCR、数字PCR技术的功能区别
一、普通PCR技术 KARY MULLIS （1944.12.28-2019.8.7） Kary Mullis于1983年发明了聚合酶链式反应法（polymerase chain reaction ，PCR），据说是载着女友开车的时候，忽然灵光一闪，想到了PCR原理（论开车的好处）
普通－PCR、实时荧光定量－PCR－和数字－PCR－对比分析（一）
提起 PCR，在生物及其相关行业内可谓如雷贯耳，无人不知无人不晓，其影响之深，应用之广可见一斑。1985 年，美国 PE-Cetus 公司的 Mullis 等人发明了聚合酶链反应（PCR），实现了在试管中模拟细胞内的 DNA 复制。然而，采用 E-coli DNA 聚合酶进行 PCR，由于该酶不
实时荧光定量PCR的研究进展及其应用（一）
多聚集链反应（polymerase chain reaction,PCR）技术发明至今已近20年了，在这期间技术得到了不断的发展，近年来出现的实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR）技术实现了PCR从定性到定量的飞跃，它以其特异性强、灵敏度高、重复性好、
实时荧光定量PCR的研究进展及其应用（一）
(张蓓，沈立松 上海第二医科大学附属新华医院上海儿童医学中心实验诊断中心)摘要:多聚酶链反应飞速的发展使其成为了分子生物学实验室重要的工具，实时荧光定量PCR(real-timequantitative PCR)技术以其敏感性高、重复性好、速度快和污染少使PCR技术又向前迈进了一步。本文
一文知晓PCR，定量PCR与数字PCR的实验方法与选择（一）
从1985年至今的30多年时间里，PCR分析经历了三代技术的发展。第一代传统PCR技术，采用琼脂糖凝胶电泳的方法对PCR产物进行定性分析。第二代荧光定量PCR技术，通过在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号的积累实时监控PCR进程，最后用Cq值对基因进行定量分析。第三代数字PCR技术，通过将P
多重数字PCR技术介绍（一）
什么是数字PCR？数字PCR是一种新的绝对定量PCR，通过对PCR反应物进行有限稀释，随后在不同的反应腔室里进行PCR扩增，最后根据泊松分布原理及阳性微滴的个数与比例得出靶分子的起始拷贝数或浓度的技术。什么是多重PCR？多重PCR又称多重引物PCR或复合PCR，它是在同一PCR反应体系里加上两对以上
合肥研究院开展数字定量PCR技术技术讲座
5月20日，中国科学院合肥物质科学研究院技术生物与农业工程研究所邀请南京润亚生物科技发展有限责任公司技术总监围绕数字定量聚合酶链式反应技术（简称PCR技术）进行专题培训。 培训老师首先阐述了PCR技术的发展历史，PCR经历了传统PCR（核酸电泳定性分析）、实时定量PCR（相对定量分析）、数字P
数字PCR技术
数字PCR作为第三代PCR技术，它是将分子生物学与现代微机电、微纳制造等工程技术相结合的典范。数字PCR以聚合酶链式反应的理论和技术体系为基础，结合现代微机电和光学检测技术，实现单分子水平的核酸精确定量检测。数字PCR的核心思想是将核酸样品平行划分为大规模单分子水平的微反应单元，然后对众多微反应单元
DNA分子标记技术研究进展（二）
2．第二代分子标记2.1 SSR标记技术 在真核生物基因组中存在许多非编码的重复序列，如重复单位长度在15～65个核苷酸的小卫星DNA(Minisatellite DNA)，重复单位长度在2～6个核苷酸的微卫星DNA(Microsatellite DNA)。小卫星和微卫星DNA分布
荧光定量PCR技术及其应用（一）
荧光定量PCR（也称TaqMan PCR,以下简称FQ-PCR）是美国PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出来的一种新的核酸定量技术，该技术是在常规PCR基础上加入荧光标记探针来实现其定量功能的，与变通PCR相比，FQ-PCR具有许多优点。本文拟就该技术的特点、原理和方法以及应用作一简
荧光定量PCR技术及其应用（一）
荧光定量PCR（也称TaqMan PCR,以下简称FQ-PCR）是美国PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出来的一种新的核酸定量技术，该技术是在常规PCR基础上加入荧光标记探针来实现其定量功能的，与变通PCR相比，FQ-PCR具有许多优点。本文拟就该技术的特点、原理和方法以及应用作一简
第三代PCR技术纪念Kary－Mullis获得诺奖30周年
Mullis博士在发明PCR技术后曾这样描述：“用一个单分子DNA，PCR能在一个下午内产生100百万个相似的分子。反应很容易进行，只需要一个管子、一些简单的试剂和一个用来加热的设备”（Beginning with a single molecule of the genetic material
定量PCR技术
定量PCR（Polymerase Chain Reaction）技术有广义概念和狭义概念。广义概念的定量PCR技术是指以外参或内参为标准，通过对PCR终产物的分析或PCR过程的监测，进行PCR起始模板量的定量。 广义概念下的定量PCR技术可以分为五种类型： （1）外参法+终产物分析。所谓“外
定量PCR技术
定量PCR（Polymerase Chain Reaction）技术有广义概念和狭义概念。广义概念的定量PCR技术是指以外参或内参为标准，通过对PCR终产物的分析或PCR过程的监测，进行PCR起始模板量的定量。 广义概念下的定量PCR技术可以分为五种类型：（1）外参法+终产物分析。所谓“外参法”
Azure－Cielo™实时荧光定量PCR系统在检测单拷贝DNA的应用
介绍：Azure Cielo™ 3和Cielo™ 6 实时荧光定量PCR系统具有卓越的灵敏度。该系统配置新型的高性能光学系统，采用16组光纤单孔扫描设计，一根光纤用于高能LED激发，另一根用于光信号检测，可16孔同时采集(图1)。特殊的激发/发射方式保证单孔扫描时仅激发一个孔，光纤传导也有效消除
快速了解荧光定量PCR与数字PCR区别
提起 PCR，在生物及其相关行业内可谓如雷贯耳，无人不知无人不晓，其影响之深，应用之广可见一斑。 1985 年，美国 PE-Cetus 公司的 Mullis 等人发明了聚合酶链反应（PCR），实现了在试管中模拟细胞内的 DNA 复制。然而，采用 E-coli DNA 聚合酶进行 PCR，由
一文知晓PCR，定量PCR与数字PCR的实验方法与选择（二）
数字 PCR数字 PCR 是通过将样本DNA随机分布至独立的反应单元中，每个反应单元中包含或者不包含1个或多个拷贝的目标分子，所有独立的反应单元进行平行扩增后，对每个反应单元的阴性或者阳性荧光信号进行检测并进行统计学分析，就可以计算出原始样本的拷贝数，无需参考标准品或内源性对照品，也不需要标准曲
基于量子点的单分子荧光示踪技术揭示分子马达的行走...
基于量子点的单分子荧光示踪技术揭示分子马达的行走机制在生物体内，分子马达参与肌肉收缩、胞质运输、DNA转录以及有丝分裂等一系列重要的生命活动。在执行上述功能过程中，分子马达需要借助ATP水解释放的能量，完成在细胞骨架上的特定运行轨迹。因此，关于分子马达沿着细胞骨架的行走机制的研究，对于深刻认识分子马
荧光定量PCR技术的荧光定量PCR的方法
接下来我们就来了解一下荧光定量的主要方法，我们如何选择合适的方法？荧光定量PCR所使用的荧光化学可分为两种：荧光探针和荧光染料。而荧光定量 PCR 的方法相应的可分为特异类和非特异类两类，特异性检测方法是在PCR反应中利用标记荧光染料的基因特异寡核苷酸探针来检测产物；而非特异性检测方法是在在PCR反
基于－PCR－的－DNA－斑点印迹实验
实验方法原理 dNTP ，PCR 缓冲液，聚合酶混合液，嵌套引物，LB-氨苄液体培养基，溶液NaOH，SSC，Tris-HCl，PCR 产物微量滴定板，尼龙膜，紫外交联装置，96 孔或 384 孔复制器，热循环仪，PCR 管或反应板
基于－PCR－的－DNA－斑点印迹实验
对于高通量的筛选，推荐使用几个热循环仪厂家提供的 96 孔或 384 孔 PCR 板，或者使用单个的管子。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。实验方法原理dNTP ，PCR 缓冲液，聚合酶混合液，嵌套引物，LB-氨苄液体培养基，溶液NaOH，SSC，Tris-HCl，PCR