小麦总RNA的提取
实验步骤1. 所有容器高温灭菌两次，DEPC高温灭菌，所有的试剂用DEPC配制，高温灭菌。2. 在一灭菌2mL管中加入：5mol/L异硫氰酸胍0.7mL、苯酚0.4mL、NaAc(pH4.0) 0.1mL。3. 称取0.2g小麦黄化苗的叶片，迅速在液氮中研磨成粉末，转入已准备好的离心管中，剧烈震荡。4. 混匀，冰浴30min。5. 4℃，12000rpm，10min。6. 上清至另一离心管中加0.4mL氯仿，剧烈震荡。冰浴放置5min。7. 4℃，12000rpm，10min。8. 弃有机相(下层) 加入0.4mL氯仿和0.4mL酚，室温放置5min。9. 4℃，12000rpm，10min，弃有机相，加入等体积异丙醇。-20℃放置1h。10. 4℃，12000rpm，10min，沉淀用70%乙醇洗两次。11. 室温稍干燥。12. 沉淀加20μLDEPC水溶解(-20℃保存)13. RNA电泳：1％琼脂糖胶20mL，8μL样品，......阅读全文
植物总RNA的提取实验
实验方法原理 在液氮中研磨植物材料, 使部分细胞破碎, 进一步使植物细胞在裂解液中裂解, 用醋酸钠和氯仿沉淀蛋白质, 异丙醇沉淀核酸, 溶解后经氯化锂沉淀总RNA, 洗涤后得到高质量的RNA。本实验旨在了解和掌握植物总RNA 的分离和纯化方法。实验材料 植物RNA试剂、试剂盒 尿素Tris-HClN
2.6－真菌总－RNA－的制备
试剂、试剂盒酚氯仿异戊醇 12mol L 氯化锂3mol L 乙酸钠乙醇DEPC 处理的水仪器、耗材水浴低温高速离心机实验步骤一 材料与设备1) 酚：氯仿：异戊醇 (25：24:1)。2) 氯仿：异戊醇 (2：1)3)12mol/L 氯化锂。4)3mol/L 乙酸钠。5)70% 乙醇。6)DEPC
植物组织总RNA的提取
实验概要由于RNA分子的结构特点，容易受RNA酶的攻击反应而降解，加上RNA酶极为稳定且广泛存在，因而在提取过程中要严格防止RNA酶的污染，并设法抑制其活性，这是本实验成败的关键。所有的组织中均存在RNA酶，人的皮肤、手指、试剂、容器等均可能被污染，因此全部实验过程中均需戴手套操作并经常更换（使用一
2.5.1－酵母总RNA的制备
试剂、试剂盒AE 缓冲液。 苯酚10%SDS酚氯仿 无水乙醇乙醇. 3mol L 乙酸钠无 RNase 的水仪器、耗材髙速离心机实验步骤一 材料与设备1)AE 缓冲液：50 mmol/L 乙酸钠 (PH5.3)，lOmmol/LEDTA。2) 苯酚 (用 AE 缓冲液预先平衡）。3)10%SDS4)
真核细胞总RNA的制备（Total－RNA－Isolation）1
从细胞中分离RNA的纯度于完整性对于许多分子生物学实验至关重要。如Northern印迹与杂交分析、寡聚（dT）纤维素选择分离 mRNA，cDNA合成及体外翻译等实验的成败，在很大程度上决定于RNA的质量。RNA分离的最关键因素是尽量减少RNA酶的污染。快速一步法提取总RNA组织及有核细胞在匀浆过程中
从果蝇胚胎中提取总－RNA－或－poIy(A)－+RNA
试剂、试剂盒 0.lmol LNaOH 乙醇 3mol L 乙酸钠 苯酚 无 SDS 的结合缓冲液 含 SDS 的结合缓冲液 TE 缓冲液 SEVAG 漂白剂（Bleach) 含 MgCl2 的 PBS(pH7.2) 果蝇勻浆缓冲液实验步骤 一 材料与设备1)0.lmol/LNaOH2)70%(V/
真核细胞总RNA的制备（Total－RNA－Isolation）2
Total RNA Isolation Guanidine-based isolation Objective: To obtain total RNA from zebrafish embryos. Required Materials Denaturing Solution
从果蝇胚胎中提取总－RNA－或－poIy(A)－+RNA
试剂、试剂盒 0.lmol LNaOH 乙醇 3mol L 乙酸钠 苯酚 无 SDS 的结合缓冲液 含 SDS 的结合缓冲
2.3.1－从果蝇胚胎中提取总－RNA－或－poIy(A)－+RNA
试剂、试剂盒0.lmol LNaOH乙醇3mol L 乙酸钠苯酚无 SDS 的结合缓冲液含 SDS 的结合缓冲液TE 缓冲液SEVAG漂白剂（Bleach)含 MgCl2 的 PBS(pH7.2)果蝇勻浆缓冲液实验步骤一 材料与设备1)0.lmol/LNaOH2)70%(V/V) 乙醇3)3mol/
纯化RNA实验——从培养的细胞中纯化总RNA
实验材料细胞试剂、试剂盒RNA 提取缓冲液变性液水饱和酚仪器、耗材培养皿Falcon 2063 管实验步骤1. 取 1 个细胞已长满的 100 ml 培养皿，吸出培养液，加 2 ml RNA 提取缓冲液，用橡胶刮棒刮下细胞。RNA 提取缓冲液：变性液，20 mlβ-巯基乙醇，0.144 ml2 mo
Northern印迹和总RNA杂交实验
Northern印迹分析杂交和放射自显影试剂、试剂盒甲醛凝胶溶液 RNA 电泳缓冲液
Northern印迹和总RNA杂交实验
试剂、试剂盒 甲醛凝胶溶液RNA 电泳缓冲液仪器、耗材 凝胶模梳齿凝胶用具实验步骤 1. 用肥皂和水彻底清洗凝胶模，梳齿和凝胶用具。2. 准备甲醛凝胶溶液。甲醛凝胶溶液（300 ml 1％ 琼脂糖凝胶）：琼脂糖，3.0 g10x RNA 电泳缓冲液，30 ml Milli-Q 或用玻璃器皿蒸
Trizol法提取总RNA的原理
Trizol试剂的主要成分是苯/酚。苯/酚的主要作用是对细胞进行裂解，从而使细胞当中的蛋白质以及核酸物质解聚而得以释放。苯/酚虽然可以有效的使蛋白质变性，但它不能完全抑制RNA酶的活性，因此Trizol中还加入了8－羟基喹/啉、异硫氰酸胍、β-巯基乙醇等来抑制内源和外源RNase（即RNA酶）。Tr
植物总RNA的提取实验技术
一、实验目的 通过本实验学习从植物组织中提取RNA的方法 二、实验原理 RNA是一类极易降解的分子，要得到完整的 RNA，必须最大限度地抑制提取过程中内源性及外源性核糖核酸酶对RNA的降解。高浓度强变性剂异硫氰酸胍，可溶解蛋白质，破坏细胞结构，使核蛋白与核酸分离，失活RNA酶，所以RNA从细胞中释
Northern印迹和总RNA杂交实验
Northern印迹分析 杂交和放射自显影 试剂、试剂盒 甲醛凝胶溶液 RNA 电泳缓冲液
总RNA提取与Northern杂交（1）
一、 总RNA的提取1、 取组织10-50毫克，剪切成大小在0.5厘米以内的碎片，加入×5的RNA later（约2毫升）。样品在37度可保存1天。室温下1周，4度下1个月。2、 匀浆：用Rnase Erase spray（ICN）清理匀浆器头部（7mm），用DEPC水和乙醇清洗，将上述样品用镊
怎样从总RNA中提取mRNA
大多数真核细胞mRNA的3’端通常具有由20-30个腺苷酸组成的polyA尾巴，寡聚胸腺嘧啶脱氧核糖核苷（OligoT）可以与之配对结合，这就是提取mRNA最基本的原理。具体到实验手段上，现在磁珠法、纤维素柱层析法都有在用。磁珠法一般是用生物素标记OligoT，亲和素标记磁珠（生物素和亲和素间具有高
提取动物关节软骨组织总RNA
实验目的 研磨破碎软骨组织（大鼠膝关节软骨），提取其总RNA。 实验原理 充分磨碎软骨样品（大鼠膝关节软骨），再用相关试剂提取其总RNA。 实验材料和器具样品：大鼠膝关节软骨仪器：多样品组织研磨仪（上海净信，Tissuelyser-24）耗材：研磨罐（上海净信，***ml），
怎样从总RNA中提取mRNA
大多数真核细胞mRNA的3’端通常具有由20-30个腺苷酸组成的polyA尾巴，寡聚胸腺嘧啶脱氧核糖核苷（OligoT）可以与之配对结合，这就是提取mRNA最基本的原理。具体到实验手段上，现在磁珠法、纤维素柱层析法都有在用。磁珠法一般是用生物素标记OligoT，亲和素标记磁珠（生物素和亲和素间具有高
总RNA提取与Northern杂交（2）
4、Loading buffer（10ul每个样） 总体积 100ul 200 ul 500ul 10×MOPS
卵和胚胎细胞总RNA提取
试剂、试剂盒 Triton X-100匀浆缓冲液 酚氯仿乙酸钠 乙醇 氯化锂实验步骤 一 材料与设备1)5%TritonX-1002) 匀浆缓冲液：50 mmol/LNaCl,50 mmol/LTris-Cl,(PH7.5),5 mmol/LEDTA(pH8.0),0.5%SDS,200ug/ml
卵和胚胎细胞总RNA提取
试剂、试剂盒 Triton X-100 匀浆缓冲液 酚 氯仿 乙酸钠 乙醇 氯化锂
总RNA提取与Northern杂交（3）
第二天：将上述物品揭开，将胶正面朝下，膜正面朝上，用铅笔作好标记。将胶浸泡在EB中1-2分钟，用DEPC H2O清洗，将膜放在滤纸上面，夹好，4度下保存，或者直接进行预杂交。UV杂交（有助于RNA结合到膜上面）。五、预杂交和杂交预杂交和杂交 buffer： 100ul20×SSC 25ml （5×S
真菌菌丝的总RNA的提取
试剂：RNA提取缓冲液（CTAB）：2% CTAB（W/V），2% 聚乙烯吡咯烷酮PVP（W/V），100 mM Tris-HCl（pH8.0,DEPC处理的水配置），25mM EDTA, 0.5g/L 亚精胺Spermidine，2.0M NaCl，2%巯基乙醇（V/V，使用前加入）。由于在高温灭
真核细胞总RNA的分离提取
RNA是基因表达产物，由以下几类分子组成，rRNA（占细胞总RNA的80%～85%）、tRNA和核内小分子RNA（占10～15%）、mRNA（占1～5%）。其中mRNA是分子生物学的主要研究对象，分离制备mRNA是克隆基因，分析基因表达以及建立cDNA文库的首要步骤。真核细胞总RNA分离提取的目的是
细胞总RNA的提取操作步骤
一、准备1、 物品：Trizol、氯仿（三氯甲烷）、异丙醇、75%灭酶异醇、冷PBS、1.5ml灭酶EP管、灭酶枪头、一次性手套、EP管架、吸管 2、 打开冷冻离心机4℃预冷 二、操作步骤： 将Trizol、氯仿、冷PBS、EP管、灭酶枪头、一次性手套、EP管架、吸管等物品带入细胞室。
总RNA的提取（Trizol法提取）
在收集到生物材料之后，最好能即刻进行RNA制备工作。若需暂时储存，则应以液氮将生物材料急速冷冻后，储存于-80℃冷冻柜。在制备RNA时，将储存于冷冻柜的材料取出，立即以加入液氮研磨的方式打破细胞，不可以先行解冻，以避免RNase的作用。1. 提取组织RNA时，每50～100mg组织用1ml
总RNA－的非变性电泳检测
总 RNA 的电泳检测，原来我使用 Lambda DNA/EcoR I （或者 Hind III）酶切 Marker，现在基本上不再用 Marker 了。指示剂一定是溴酚蓝加二甲苯氰，胶浓度 1-1.2%。加样后，开始电泳 (电压的选择的唯一依据是，我后面的时间安排。)。 溴酚蓝出孔 2-3cm 后
采用Trizol－溶液提取细菌总RNA
实验概要了解用Trizol 溶液提取细菌总 RNA的方法。实验原理Trizol主要物质是异硫氰酸胍，它可以破坏细胞使RNA释放出来的同时，保护RNA的完整性。加入氯仿后离心，样品分成水样层和有机层。RNA存在于水样层中。收集上面的的水样层后，RNA 可以通过异丙醇沉淀来还原。无论是人、动物、植物还
总RNA提取常见问题分析
Q：RNA降解 A：1. 新鲜细胞：如果试剂没有问题，且外源性污染也可以排除，那么降解几乎都来自裂解液的用量不足。如 果将裂解液直接加入培养皿中裂解细胞，一定要使裂解液能覆盖住细胞。 2. 新鲜组织：某些富含内源核酸酶的样品(如肝脏，胸腺等)，即使使用电动匀浆器匀浆也不能避免RNA的降解。更可