蛋白质芯片的原理、分类及一般操作步骤(二)
样品标记法原理图: 样品中的蛋白用生物素标记,然后与捕获抗体一起孵育,对照蛋白加入到样品中来监测整个反应过程,包括生物素标记和标准化。结合在芯片上的蛋白利用HRP-链霉亲和素来检测,最后采用化学光或者HiLyte™Fluor 555-链霉亲和素来检测信号。 一般分类 :根据应用分类: 1.蛋白检测芯片---- 将具有高度亲和特异性的探针分子(如单克隆抗体)固定在基片上,用于识别复杂生物样品中的目标蛋白/多肽。根据检测方法,不同蛋白质检测芯片又可进一步分为正相蛋白质检测芯片和反相蛋白质检测芯片。 正相蛋白质检测芯片首先用不同的荧光标记物对样品中的拟研究的蛋白质进行标记, 再将这些样品在抗体微阵列上进行温育, 然后用生物芯片扫描仪检测各个阵列分子点上荧光信号。 反相蛋白质检测芯片是用破碎的微量组织或者细胞样品点样制成的芯片, 代表在某种状态下整个细胞的蛋白质,然后......阅读全文
蛋白质芯片技术固体芯片的构建方法
常用的材质有玻片、硅、云母及各种膜片等。理想的载体表面是渗透滤膜(如硝酸纤维素膜)或包被了不同试剂(如多聚赖氨酸)的载玻片。外形可制成各种不同的形状。Lin,SR等人引采用APTS-BS3技术增强芯片与蛋白质的结合。
蛋白质芯片的特点
⒈ 直接用粗生物样品(血清、尿、体液)进行分析⒉ 同时快速发现多个生物标记物⒊ 小量样品⒋ 高通量的验证能力⒌ 发现低丰度蛋白质⒍ 测定疏水蛋白质: 与“双相电泳加飞行质谱”相比,除了有相似功能外,并可增加测定疏水蛋白质⒎ 在同一系统中集发现和检测为一体 特异性高 利用单克隆抗体芯片,可鉴定未知抗原
蛋白质芯片技术特点
⒈ 直接用粗生物样品(血清、尿、体液)进行分析⒉ 同时快速发现多个生物标记物⒊ 小量样品⒋ 高通量的验证能力⒌ 发现低丰度蛋白质⒍ 测定疏水蛋白质: 与“双相电泳加飞行质谱”相比,除了有相似功能外,并可增加测定疏水蛋白质⒎ 在同一系统中集发现和检测为一体 特异性高 利用单克隆抗体芯片,可鉴定未知抗原
蛋白质芯片的原理
蛋白芯片技术的研究对象是蛋白质,其原理是对固相载体进行特殊的化学处理,再将已知的蛋白分子产物固定其上(如酶、抗原、抗体、受体、配体、细胞因子等),根据这些生物分子的特性,捕获能与之特异性结合的待测蛋白(存在于血清、血浆、淋巴、间质液、尿液、渗出液、细胞溶解液、分泌液等),经洗涤、纯化,再进行确认和生
蛋白质芯片的种类
蛋白芯片主要有三类:蛋白质微阵列、微孔板蛋白质芯片、三维凝胶块芯片等。
蛋白质芯片的制备
固体芯片的构建常用的材质有玻片、硅、云母及各种膜片等。理想的载体表面是渗透滤膜(如硝酸纤维素膜)或包被了不同试剂(如多聚赖氨酸)的载玻片。外形可制成各种不同的形状。Lin,SR等人引采用APTS-BS3技术增强芯片与蛋白质的结合。探针的制备低密度蛋白质芯片的探针包括特定的抗原、抗体、酶、吸水或疏水物
蛋白质芯片技术简介
由于利用了DNA与互补的DNA或RNA结合的典型性质, DNA 芯片在短时间内就取得了成功. 然而, 已经有关于mRNA 和蛋白质之间数量关系上的争论, 而且实际上在细胞中参与各种不同反应的都是蛋白质. 因此, 如果能制造出蛋白质芯片而不是DNA芯片, 而且如果蛋白质表达强度和键合物能被发现, 就有
什么是蛋白质芯片?
蛋白质芯片是一种高通量的蛋白功能分析技术,可用于蛋白质表达谱分析,研究蛋白质与蛋白质的相互作用,甚至DNA-蛋白质、RNA-蛋白质的相互作用,筛选药物作用的蛋白靶点等。
蛋白质芯片的功能特点
蛋白质芯片是一种高通量的蛋白功能分析技术,可用于蛋白质表达谱分析,研究蛋白质与蛋白质的相互作用,甚至DNA-蛋白质、RNA-蛋白质的相互作用,筛选药物作用的蛋白靶点等。
蛋白质芯片的种类介绍
蛋白质微阵列哈佛大学的Macbeath和SchreiberL等报道了:通过点样机械装置制作蛋白质芯片的研究,将针尖浸入装有纯化的蛋白质溶液的微孔中,然后移至载玻片上,在载玻片表面点上1nl的溶液,然后机械手重复操作,点不同的蛋白质。利用此装置大约固定了10,000种蛋白质,并用其研究蛋白质与蛋白质间
蛋白质芯片的技术原理
蛋白芯片技术的研究对象是蛋白质,其原理是对固相载体进行特殊的化学处理,再将已知的蛋白分子产物固定其上(如酶、抗原、抗体、受体、配体、细胞因子等),根据这些生物分子的特性,捕获能与之特异性结合的待测蛋白(存在于血清、血浆、淋巴、间质液、尿液、渗出液、细胞溶解液、分泌液等),经洗涤、纯化,再进行确认和生
蛋白质芯片的应用介绍
基因表达的筛选AngelikaL.等人从人胎儿脑的cDNA文库中选出92个克隆的粗提物制成蛋白质芯片,用特异性的抗体对其也进行检测,结果的准确率在87%以上,而用传统的原位滤膜技术准确率只达到63%。与原位滤膜相比,用蛋白质芯片技术在同样面积上可容纳更多的克隆,灵敏度可达到pg级。抗原抗体检测在Ca
蛋白质芯片的概念和功能
蛋白质芯片是一种高通量的蛋白功能分析技术,可用于蛋白质表达谱分析,研究蛋白质与蛋白质的相互作用,甚至DNA-蛋白质、RNA-蛋白质的相互作用,筛选药物作用的蛋白靶点等。
蛋白质芯片技术信号检测分析
直接检测模式是将待测蛋白用荧光素或同位素标记,结合到芯片的蛋白质就会发出特定的信号,检测时用特殊的芯片扫描仪扫描和相应的计算机软件进行数据分析,或将芯片放射显影后再选用相应的软件进行数据分析。间接检测模式类似于ELISA方法,标记第二抗体分子。以上两种检测模式均基于阵列为基础的芯片检测技术。该法操作
蛋白质芯片的技术优势
⒈ 直接用粗生物样品(血清、尿、体液)进行分析⒉ 同时快速发现多个生物标记物⒊ 小量样品⒋ 高通量的验证能力⒌ 发现低丰度蛋白质⒍ 测定疏水蛋白质: 与“双相电泳加飞行质谱”相比,除了有相似功能外,并可增加测定疏水蛋白质⒎ 在同一系统中集发现和检测为一体 特异性高 利用单克隆抗体芯片,可鉴定未知抗原
蛋白质芯片的发展方向
⑴建立快速、廉价、高通量的蛋白质表达和纯化方法,高通量制备抗体并定义每种抗体的亲和特异性;第一代蛋白检测芯片将主要依赖于抗体和其他大分子,显然,用这些材料制备复杂的芯片,尤其是规模生产会存在很多实际问题,理想的解决办法是采用化学合成的方法大规模制备抗体。⑵ 改进基质材料的表面处理技术以减少蛋白质的非
蛋白质芯片技术生物分子反应
使用时将待检的含有蛋白质的标本如尿液、血清、精液、组织提取物等,按一定程序做好层析、电泳、色谱等前处理,然后在每个芯池里点入需要的种类。一般样品量只要2-10μL即可。根据测定目的不同可选用不同探针结合或与其中含有的生物制剂相互作用一段时间,然后洗去未结合的或多余的物质,将样品固定一下等待检测即可。
蛋白质芯片对于药物筛选的应用
疾病的发生发展与某些蛋白质的变化有关,如果以这些蛋白质构筑芯片,对众多候选化学药物进行筛选,直接筛选出与靶蛋白作用的化学药物,将大大推进药物的开发。蛋白质芯片有助于了解药物与其效应蛋白的相互作用,并可以在对化学药物作用机制不甚了解的情况下直接研究蛋白质谱。还可以将化学药物作用与疾病联系起来,以及药物
蛋白质芯片技术探针的制备方法
低密度蛋白质芯片的探针包括特定的抗原、抗体、酶、吸水或疏水物质、结合某些阳离子或阴离子的化学集团、受体和免疫复合物等具有生物活性的蛋白质。制备时常常采用直接点样法,以避免蛋白质的空间结构改变。保持它和样品的特异性结合能力。高密度蛋白质芯片一般为基因表达产物,如一个cDNA文库所产生的几乎所有蛋白质均
蛋白质组与蛋白质芯片研究现状及应用
摘要: 蛋白质组研究目的在于从蛋白水平阐明基因的功能,这对于探索生命的奥秘具有重要的意义。蛋白质芯片是近年来兴起的一种强有力的高通量研究方法, 能够一次平行分析成千上万的蛋白样品, 具有很高的敏感度与准确性。它将成为蛋白质组学研究中的强有力的研究方法, 并最终架起基因组学与蛋白质组学的桥梁。1 研
蛋白质芯片对于筛选及研究的应用
常规筛选蛋白质主要是在基因水平上进行,基因水平的筛选虽已被运用到任意的cDNA文库,但这种文库多以噬菌体为载体,:通过噬菌斑转印技术(plaque life procedure)在一张膜上表达蛋白质。但由于许多蛋白质不是全长基因编码,而且真核基因在细菌中往往不能产生正确折叠的蛋白质,况且噬菌斑转移不
蛋白质芯片对于疾病诊断的应用
蛋白质芯片技术在医学领域中有着潜在的广阔应用前景。蛋白质芯片能够同时检测生物样品中与某种疾病或者环境因素损伤可能相关的全部蛋白质的含量情况,即表型指纹(phenomic fingerprint)。表型指纹对监测疾病的过程或预测,判断治疗的效果也具有重要意义。Ciphelxen Biosystems公
蛋白质芯片技术应用于药物筛选
疾病的发生发展与某些蛋白质的变化有关,如果以这些蛋白质构筑芯片,对众多候选化学药物进行筛选,直接筛选出与靶蛋白作用的化学药物,将大大推进药物的开发。蛋白质芯片有助于了解药物与其效应蛋白的相互作用,并可以在对化学药物作用机制不甚了解的情况下直接研究蛋白质谱。还可以将化学药物作用与疾病联系起来,以及药物
蛋白质芯片对于基因表达的筛选的应用
从人胎儿脑的cDNA文库中选出92个克隆的粗提物制成蛋白质芯片,用特异性的抗体对其也进行检测,结果的准确率在87%以上,而用传统的原位滤膜技术准确率只达到63%。与原位滤膜相比,用蛋白质芯片技术在同样面积上可容纳更多的克隆,灵敏度可达到pg级。
蛋白质芯片技术应用与基因表达的筛选
基因表达的筛选AngelikaL.等人从人胎儿脑的cDNA文库中选出92个克隆的粗提物制成蛋白质芯片,用特异性的抗体对其也进行检测,结果的准确率在87%以上,而用传统的原位滤膜技术准确率只达到63%。与原位滤膜相比,用蛋白质芯片技术在同样面积上可容纳更多的克隆,灵敏度可达到pg级。
蛋白质芯片技术在肿瘤检测中的应用
【关键词】 蛋白质芯片;卵巢癌;前列腺癌;肿瘤;临床检验 蛋白质芯片技术在肿瘤研究领域中进展最快。随着肿瘤细胞的发生,肿瘤患者体内某些蛋白质会发生上调或下调,或产生新的与肿瘤关联的异常蛋白,而蛋白质芯片技术可以描绘出患者体液中所有蛋白质表达情况。根据正常与异常的蛋白质表达谱的差异,从而建立肿瘤的指
蛋白质芯片对于抗原抗体检测的应用
在CavinM.等人的实验中,蛋白质芯片上的抗原抗体反应体现出很好的特异性,在一块蛋白质芯片上10800个点中,根据抗原抗体的特异性结合检测到唯一的1个阳性位点。Cavin M.指出,这种特异性的抗原抗体反应一旦确立,就可以利用这项技术来度量整个细胞或组织中的蛋白质的丰富程度和修饰程度。其次利用蛋白
蛋白质芯片技术应用于疾病诊断
蛋白质芯片技术在医学领域中有着潜在的广阔应用前景。蛋白质芯片能够同时检测生物样品中与某种疾病或者环境因素损伤可能相关的全部蛋白质的含量情况,即表型指纹(phenomic fingerprint)。表型指纹对监测疾病的过程或预测,判断治疗的效果也具有重要意义。Ciphelxen Biosystems公
芯片化SERS基底助推高灵敏蛋白质识别
南通大学物理科学与技术学院博士吴静与哈尔滨医科大学教授李洋课题组合作,利用表面增强拉曼散射(SERS)技术在无标签蛋白质检测方面发现,芯片化SERS基底有助于高灵敏蛋白质识别。9月16日,相关研究成果在线发表于《分析化学》。蛋白质作为一种重要的生物标志物,实现对其高灵敏、可靠的种类鉴别对早期诊断和精
蛋白质芯片对于生化反应的检测的应用
对酶活性的测定一直是临床生化检验中不可缺少的部分。Cohen用常规的光蚀刻技术制备芯片、酶及底物加到芯片上的小室,在电渗作用中使酸及底物经通道接触,发生酶促反应。通过电泳分离,可得到荧光标记的多肽底物及产物的变化,以此来定量酶促反应结果。动力学常数的测定表明该方法是可行的,而且,荧光物质稳定。Are