PCR经验总结（二）
5. touchdown PCR 原理很简单,但的确是一个很有用的方法。举个例子就OK, ANNEALING TEMP. 55度94 5min 94 30s 60 30s 72 1min 2cycles 94 30s 59 30s 72 1min 2cycles 94 30s 58 30s 72 1min 2cycles........ 94 30s 51 30s 72 1min 2cycles 94 30s 50 30s 72 1min 20cycles 72 5min6.......阅读全文
急诊科医生经验总结
1.对发热伴颈部淋巴结肿大的青少年患者，如抗生素治疗无效，要想到坏死增生性淋巴结病的可能。 2.对中老年昏厥患者，要优先考虑心源性的（冠脉或恶性心律失常），不管既往有无类似发作史。 3.以消化道症状为主诉的中青年患者，要想到急性重症心肌炎的可能。 4.老年纳差的，会不会是吞咽困
western－blot实验经验总结（一）
做了很久的WB（western blot），走了很多弯路，其实发现WB想要做好并不难，总结了WB实验中可能会遇到的问题，分析了可能的原因及对应的解决方案，希望能成为你实验成功的基石。 问题1：转膜不充分(1)膜没有完全均匀湿透使用100% methanol浸透膜。(2)靶蛋白分子量小于10 000选
western－blot失败经验总结1
我做了很久的WB，最大的一个难点感觉在于样品制备上！蛋白的降解有些时候是你想象不到的，可能出奇的糟糕，也可能完全没事~~如果单独做WB的话，感觉以“快速彻底裂解，先变性后保存”的原则比较有效，尽量选择足够强的裂解液，甚至直接给loading buffer裂解，然后取出部分蛋白定量，其余加入loadi
川芎嗪应用经验总结
川芎嗪是从中药川芎中提炼出来的，是川芎的主要有效成分。目前，川芎嗪作为现代用药，用作静脉注射剂，被较多地应用于缺血性脑血管病，如：脑供血不足、脑血栓形成、脑栓塞等。 经过临床表明：川芎嗪的作用还远不止这些。只要我们深入认识它的性能，全面把握它的功用，在辨证论治的基础上，灵活地应用它，就
有机合成后处理经验总结
在有机合成中，后处理的问题往往被大多数人所忽略，认为只要找对了合成方法，合成任务就可以事半功倍了，这话不错，正确地合成方法固然重要，但是机合成的任务是拿到相当纯的产品， 任何反应没有 100％产率的， 总要伴随或多或少的副反应，产生或多或少的杂质，反应完成后，面临的巨大问题就是从反应混合体系中分离出
尿沉渣检验的经验总结
尿常规检验是明确患者是否患有泌尿系统疾病的常用方法。如果尿液沉渣检验的操作条件和程序不一致,即使是同一患者的同一尿液标本,亦可出现不同的检验结果,影响临床诊断。为了探讨尿液沉渣检验的常见影响因素,提高临床诊断水平,我们对同一患者的尿液沉渣做了不同条件下的实验测定。现报告如下。1．材料与方法1.1 标
手性柱的使用经验总结
手性分离重要的是选择一根好的手性柱，做手性分析的都知道，大赛璐的手性柱目前市场占有率高，根据用途分为多种不同的型号，大家熟悉的可能是OD-H。大赛璐公司初有四种填料，结构类似，对应的色谱柱分别是 OD、AD、OJ 和 AS，粒径10um，后来填料粒径变为5um，就是卖的多、使用范围广的柱子，号称四大
有机合成操作的经验总结
选择玻璃仪器和搅拌子：（1）均相反应：物料不超过容器体积的2/3；（2）非均相、回流或者产生气体的反应：物料不超过容器体积的小于1/2，无水无氧的反应时更应注意。搅拌装置的选择：（1）机械搅拌：物料体积>2 L的非均相体系；（2）强力搅拌：物料体积>3 L的均相反应和250 mL~2 L的非均相体系
NBS溴化反应经验总结
NBS溴化试剂与溴化反应 今天下午蒸NBS 溴化后的产物，结果以下午都是眼泪鼻涕一起流，终于证实：所得产物并非溴代的2-ph-toluene，而是一个很奇怪的对眼睛和鼻子具有强烈刺激性的红褐色液体，很失败!弄得今天已下午心情都不好。起初还以为是乙醚或者CCl4，后来一想不太可能阿，乙醚或
PCR之歌+PCR十大常用网站+结果图剖析（二）
9.ResearchGate网址：https://www.researchgate.net/该网站有些像研究者们专属的Facebook，方便研究者联系和跟踪同事，上传发表论文同时也可积极参与研究相关主题的讨论。在该网站注册登录后，查看PCR板块就可以询问到与PCR相关的任何问题，最重要的是此网站中对
多重数字PCR技术介绍（二）
3.探针成本太高，没关系我们用染料法也可以做多重数字PCR来源：Anal Chem.2013 Dec 3;85(23):11619-27通过改变扩增产物的长度，或者调整引物的量，或者改变反应的Tm值等条件，可以轻松尝试多重数字PCR反应。4.染料法也可以检测点突变来源：Anal Chem.2014
数字PCR之Evagreen染料法（二）
6.2阈值设置通常，阈值是由分析软件自动设置，阈值以上的分区为正，阈值以下的分区为负。因此，设置阈值是数字PCR对定量结果进行处理的一个强制性步骤。由于阈值设置是自动计算，我们建议您查看点一维图。但是，下面两种情况需要手动设置阈值：●当有非常少的正分区或非常少的负分区时；●当你观察到正负分区之间有很
荧光定量PCR技术及其应用（二）
3 应用由于FQ-PCR具有高灵敏性，高特异性和高精确性的特点，目前，该项技术已被应用于病原体测定、肿瘤基因检测、免疫分析、基因表达、突变及其多态性的研究等多个领域。3.1 病原体测定由于PCR技术的问世，使得病原体检测能够快速而方便的进行。但由于其高灵敏性，实验操作很容易受到污染而出现假阳性。只要
差示反转录PCR实验（二）
生工引物：①H-AP1(2uM)： 5’-AAGCTTCATTCCG-3’②H-AP2(2uM)： 5’-AAGCTTCCACGTA-3’③H-AP3(2uM)： 5’-AAGCTTCGGGTAA-3’④H-AP4(2uM)： 5’-AAGCTTGAGTGCT-3’⑤H-AP5(2uM)： 5’-A
PCR异常扩增曲线分析攻略（二）
2）未选择跟仪器加热模块规格匹配的耗材目前Applied BiosystemsTM系列荧光定量PCR 仪加热模块分0.2ml跟0.1ml两种，实验前一定要确定自己的仪器是哪一种加热模块，再来选择对应的耗材。如果0.1ml加热模块用成0.2ml耗材，则会造成耗材压扁，甚至造成机器故障；如果0.
PCR引物设计及评价实验（二）
5. 按照搜寻结果显示，在主窗口中检查该引物对的二级结构情况，逐条分析，依次筛选。下面进行序列筛选：点击其中一对引物，如第21#引物，在“Peimer Premier”主窗口，如图所示：该图分三部分，最上面是图示PCR模板及产物位置，中间是所选的上下游引物的一些性质，最下面是四种重
PCR实验室SOP文件（二）
PCR实验室设置及管理1. 目的：根据卫生部卫医发[2002]10号文件关于临床基因扩增检验实验室管理暂行办法及临床基因扩增检验实验室基本设置标准精神，确保PCR扩增质量和检验结果的准确性，防止实验污染、减少检验医学差错与医疗事故的发生为目的，特制订本程序。2. 范围；实验室的设置、设备、工作流程及
PCR技术应用二：－骨肿瘤诊断
骨肿瘤较罕见，恶性骨肿瘤只占全身恶性肿瘤的1%，男多于女，性别比约为1.6 ∶1，均好发于10-30岁间，良性者以骨软骨瘤最多，依次为骨巨细胞瘤、内生软骨瘤 等，恶性者以骨肉瘤最多，依次为软骨肉瘤、纤维肉瘤等.骨恶性肿瘤的发生机理目 前认为是癌基因显性作用与抗癌基因失活的结果，是多种癌基因多阶段
PCR测序方法你知道几种？（二）
(2)测序引物同位素标记测序引物:用[yP]ATP或[γP]ATP和T4多聚核苷酸激酶对引物的5末端进行同位素标记。引物浓度:0.1~0.2mmol/L非同位素标记测序引物:用荧光标记4种双脱氧核苷酸,可以进行以荧光为基础的双脱氧测序反应。 (3)DNA聚合酶应为无3→5外切活性的耐热DNA聚合酶。
一文知晓PCR，定量PCR与数字PCR的实验方法与选择（二）
数字 PCR数字 PCR 是通过将样本DNA随机分布至独立的反应单元中，每个反应单元中包含或者不包含1个或多个拷贝的目标分子，所有独立的反应单元进行平行扩增后，对每个反应单元的阴性或者阳性荧光信号进行检测并进行统计学分析，就可以计算出原始样本的拷贝数，无需参考标准品或内源性对照品，也不需要标准曲
使用实时定量－PCR技术验证cDNA和差异显示PCR技术（二）
实时 RT-PCR 与 DNA 阵列结果的比较G3PDH 是在大多数细胞中表达的含量丰富的看家基因，但在某些条件下的表达发生改变（ 11 ），通过 DNA 阵列杂交发现， G3PDH 的转录本在亚克隆 20863 和 20861 中的表达相同。实时定量 RT-PCR 也发现在两个亚克隆中有着
SDSPAGE的个人经验总结
前些日子做SDSPAGE，做了两天，犯了一大堆错误，写出来供大家借鉴：1。听有人说琼脂粉可以做封底胶，一试，漏了，还是用琼脂糖吧。2 AP用别人旧的，结果胶不干 3 A液，B液用旧的，不干。结论：不要用别人的，一定要自已配，别怕浪费。4 前后Tris 的PH值搞错，结果不凝5 电泳时长板接负极，反了
ELISA试剂盒操作经验总结
对于elisa试剂盒操作，有的人经过多年的实践获得了丰富的经验，操作起来得心顺手；有的实验新手只掌握了理论概况，在实践方面有时却不知从何下手；今日，上海劲马要为大家总结elisa试剂盒的操作经验，希望对大家有所帮助。1、实验步也是*重要一步必须戴手套穿好工作衣，严格执行消毒隔离制度保证自己的人身安全
细胞增殖检测：MTT实验经验总结
MTT分析法以活细胞代谢物还原剂3-（4，5）-dimethylthiahiazo （-z-y1）-3，5-di- phenytetrazoliumromide， MTT噻唑蓝为基础。MTT为黄色化合物，是一种接受氢离子的染料，可作用于活细胞线粒体中的呼吸链，在琥珀酸脱氢酶和细胞色素C的作用
13年的－Bug－调试经验总结
在《Learning From Your Bugs》一文中，我写了关于我是如何追踪我所遇到的一些最有趣的bug。最近，我回顾了我所有的194个条目（从13岁开始），看看有什么经验教训是我可以学习的。下面是我总结的最重要的经验教训，包括编码，测试和调试三个方面。 编码 下面这些都是我经历过
实时荧光定量PCR具体实验步骤（二）
5 制备用于绘制梯度稀释标准曲线的DNA模板①针对每一需要测量的基因，选择一确定表达该基因的cDNA模板进行PCR反应。反应体系：序号 反应物 剂量1 10× PCR缓冲液 2.5 ul2 MgCl2 溶液 1.5 ul3 上游引物F 0.5 ul4 下游引物R 0.5 ul5
如何选择合适的定量PCR仪？（二）
2.创新概念的离心式实时定量pcr仪为了克服平板式定量pcr温度均一性差的缺点，聪明的研究人员又开发出创新概念的离心式实时定量pcr仪，以roche罗氏的lightcycle和corbett的rotor-gene为代表。pcr扩增样品槽被巧妙地设计为离心转子的模样，借助空气加热和转子在腔内旋转，转子
如何做好荧光定量PCR实验？（二）
2.4 实时多重PCR探针的选择：多重实时PCR的多种含意有两种：一为选择保守的探针和引物，利用不同的染料标记探针，在检测时可根据荧光的颜色来判定不同的产物。另一种为选择保守的引物，扩增不同长度的目的片段，反应中加入SYBRN染料，最后根据不同目的片段的Tm值来判定不同的物品。多重实时PCR的荧光探
Digital－PCR－技术的发展与应用（二）
液滴数字PCR数字PCR源于乳液PCR(emulsion PCR)技术 ，利用微滴发生器可以一次生成数万乃至数百万个纳升甚至皮升级别的单个油包水微滴,作为数字PCR的样品分散载体，PCR反应结束后检测每个微滴的荧光信号。目前Bio-Rad公司的QX100系统、 QX200系统均为采用液滴技术
PCR在临床检验中的应用（二）
呼吸系统感染性疾病主要的有肺结核、非典型性肺炎等。结核杆菌感染曾给人类健康带来很大威胁，一度是较严重的致死性疾病之一。解放以后由于对结核病的预防的重视，特别是特效抗痨药物的出现，使结核病流行基本被控制。近来结核病有抬头的趋势，基原因可能有两方面，其一是耐药株的不断出现，其二是对结核预防