酵母双杂交技术及其在蛋白质组研究中的应用
作为后基因组时代出现的新兴研究领域之一, 蛋白质组学(proteomics)正受到越来越多的关注。 蛋白质组学的研究目标是对机体或细胞的所有蛋白质进行鉴定和结构功能分析。 蛋白质组学的研究不局限任何特定的方法。 高分辨率的蛋白质分离技术如二维凝胶电泳和高效液相层析, 经典的蛋白质鉴定方法如氨基酸序列分析等, 现代质谱技术, 基因组学研究的各种手段, 现代计算机信息学和计算机网络通讯技术等等, 任何可用于蛋白质研究的技术手段, 蛋白质组学都可能会采用。 它体现的是一个开放的思维和研究方式。 蛋白质-蛋白质的相互作用是细胞生命活动的基础和特征。 这种千变万化的相互作用以及由此形成的纷繁复杂的蛋白质联系网络同样也是蛋白质组学的研究内容, 相应的工作也已经开展。 酵母双杂交系统(yeast two-hybrid system)自建立以来已经成为分析蛋白质相互作用的强有力的方法之一。 该方法在不断完善, 如今它不但......阅读全文
酵母双杂交技术及其在蛋白质组研究中的应用
摘要 蛋白质组学是在后基因组时代出现的一个新兴的研究领域, 它的主要任务是识别鉴定细胞、组织或机体的全部蛋白质, 并分析蛋白质的功能及其模式。 因此, 揭示蛋白质组中蛋白质间的相互作用关系也是蛋白质组学的重要内容之一。 酵母双杂交技术是用来检测蛋白质间是否相互作用的一个非常有效的手段。 该技术在酵
酵母双杂交技术及其在蛋白质组研究中的应用
作为后基因组时代出现的新兴研究领域之一, 蛋白质组学(proteomics)正受到越来越多的关注。 蛋白质组学的研究目标是对机体或细胞的所有蛋白质进行鉴定和结构功能分析。 蛋白质组学的研究不局限任何特定的方法。 高分辨率的蛋白质分离技术如二维凝胶电泳和高效液相层析, 经典的蛋白质鉴定方法如
酵母双杂交技术及其在蛋白质组研究中的应用
作为后基因组时代出现的新兴研究领域之一, 蛋白质组学(proteomics)正受到越来越多的关注。 蛋白质组学的研究目标是对机体或细胞的所有蛋白质进行鉴定和结构功能分析。 蛋白质组学的研究不局限任何特定的方法。 高分辨率的蛋白质分离技术如二维凝胶电泳和高效液相层析, 经典的蛋白质鉴定方法如氨
酵母双杂交系统的应用
酵母双杂交系统能在体内测定蛋白质的结合作用，具有高度敏感性。主要是由于：①采用高拷贝和强启动子的表达载体使杂合蛋白过量表达。②信号测定是在自然平衡浓度条件下进行， 而如免疫共沉淀等物理方法为达到此条件需进行多次洗涤，降低了信号强度。③杂交蛋白间稳定度可被激活结构域和结合结构域结合形成转录起始复合物而
简述酵母双杂交系统的应用
酵母双杂交系统能在体内测定蛋白质的结合作用，具有高度敏感性。 主要是由于： ①采用高拷贝和强启动子的表达载体使杂合蛋白过量表达。 ②信号测定是在自然平衡浓度条件下进行， 而如免疫共沉淀等物理方法为达到此条件需进行多次洗涤，降低了信号强度。 ③杂交蛋白间稳定度可被激活结构域和结合结构域结合
酵母双杂交系统的研究过程
Fields等人的工作标志双杂交系统的正式建立。他们以与调控SUC2基因有关的两个蛋白质Snf1和Snf2为模型，将前者与Gal4的BD结构域融合，另外一个与Gal4的AD结构域的酸性区域融合，由BD和AD形成的融合蛋白一般分别称之为“诱饵”（bait）和“猎物”或靶蛋白（prey or targe
酵母双杂交系统的研究过程
Fields等人的工作标志双杂交系统的正式建立。他们以与调控SUC2基因有关的两个蛋白质Snf1和Snf2为模型，将前者与Gal4的BD结构域融合，另外一个与Gal4的AD结构域的酸性区域融合，由BD和AD形成的融合蛋白一般分别称之为“诱饵”（bait）和“猎物”或靶蛋白（prey or tar
酵母双杂交系统的技术步骤
1.将待测基因与Gal4或LexA或其他合适蛋白的DNA结合域融合构建诱饵质粒；2.将诱饵质粒转化缺乏报告基因启动子的酵母细胞株中，选择被转化的酵母；3.再将文库质粒转化到酵母中；4.通过报告基因的功能筛选相互作用的蛋白。
酵母双杂交系统的发展和应用
随着对多种重要生物的大规模基因组测序工作的完成，基因工程领域又迎来了一个新的时代---功能基因组时代。它的任务就是对基因组中包含的全部基因的功能加以认识。生物体系的运作与蛋白质之间的互相作用密不可分，例如：DNA合成、基因转录激活、蛋白质翻译、修饰和定位以及信息传导等重要的生物过程均涉及到蛋白质复合
酵母双杂交检测的原理及应用
检测原理：酵母双杂交系统（Yeast two-hybrid assay）是用于体内研究蛋白相互作用的一种非常便利的工具，常用的如GAL4为基础的系统，使用酵母转录因子GAL4来检测转录激活后的蛋白相互作用。某些转录因子（如GAL4）由两个可以分开，功能上相互独立的结构域组成，N端有一个147个氨
中国学者综述：基因组编辑技术及其在昆虫研究中的应用
科学通报，中国科学C辑:生命科学，这两份期刊均是由中国科学院和国家自然科学基金委员会共同主办的，我国学术期刊中的知名品牌，被国内外各主要检索系统收录，如国内的《中国科学论文与引文数据库》(CSTPCD)、《中国科学引文数据库》(CSCD)等;美国的SCI、CA、EI，英国的SA，日本的《科技文献
简述酵母双杂交系统的技术步骤
1.将待测基因与Gal4或LexA或其他合适蛋白的DNA结合域融合构建诱饵质粒； 2.将诱饵质粒转化缺乏报告基因启动子的酵母细胞株中，选择被转化的酵母； 3.再将文库质粒转化到酵母中； 4.通过报告基因的功能筛选相互作用的蛋白。
蛋白质组学在植物科学研究中的应用
1 植物群体遗传蛋白质组学 1.l 遗传多样性蛋白质研究基于基因组学的一些遗传标记，如RAPD(Random Amplified Polymorphic DNA)、RFLP(Restriction Fragment Length Polymorphism)、SSR(Simple Sequen
生物质谱技术在蛋白质组学中的应用
一、 前言[1，2] 基因工程已令人难以置信的扩展了我们关于有机体DNA序列的认识。但是仍有许多新识别的基因的功能还不知道，也不知道基因产物是如何相互作用从而产生活的有机体的。功能基因组试图通过大规模实验方法来回答这些问题。但由于仅从DNA序列尚不能回答某基因的表达时间、表达量、蛋白质翻
质谱技术在蛋白质组研究中的分析方法
2003年人类基因组精细图绘制完成，是人类科学史上一个里程碑式的事件。后基因组时代的研究重点自然落在了蛋白质头上。为啥？因为中心法则告诉我们，基因的产物——蛋白质，是生命活动的最终执行者。与基因组类比，研究生物体内全套蛋白质的科学，就是蛋白质组学。基因组计划完成的同年，人类蛋白质组计划启动，令人激动
反向遗传学技术及其在FMDV－研究中的应用
刘光清 刘在新 谢庆阁(中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点开放实验室,兰州730046)摘 要: 反向遗传技术是一种新兴的分子生物学技术, 已广泛应用于生命科学研究的各个领域。综述反向遗传技术研究进展,并讨论该技术在口蹄疫病毒研究中的应用。关键词: 反向遗传学 反向遗传技术 全长c
CRISPRCas9技术及其在肿瘤研究中的应用
CRISPR的前世今生1987年，日本科学家在研究大肠杆菌的时候发现其基因组上存在一些看起来“奇怪”的重复结构：有一段29碱基的序列反复出现了5次，且两两之间被32个碱基形成的序列隔开了！但这个发现在当时并没有引起科学界的很大关注，毕竟在自然界的生物体内，各种奇奇怪怪的发现实在太多。然后仅仅几年后，
酵母双杂交系统
· Yeast Two-Hybrid System (Finley Lab)This is one of the most comprehensive and detailed guide to yeast two-hybrid system technique with intro
酵母双杂交实验
实验概要本实验构建了Bait载体和prey载体，酵母双杂交后，应用CPRG法定量测试了蛋白质相互作用。实验步骤1. Bait载体的构建将高保真PCR扩增的OsCCTlb(引物为OsCCT1bEcoRI5'和OsCCTlbXhoI3')和OsCNTlb(引物为OsCNTlb Eco
酵母双杂交系统的功能特点和应用
酵母双杂交系统是将待研究的两种蛋白质分别克隆（融合）到酵母表达质粒的转录激活因子（如GAL4等）的DNA结合结构域（DNA-BD）和转录激活域（AD）上，构建成融合表达载体，从表达产物分析两种蛋白质相互作用的系统。
蛋白质组学在高端心血管研究中的应用
Dr Manuel Mayr，King’s College London and Dr Paul Humphrey，Thermo Fisher Scientific本文将讨论伦敦国王学院采用的蛋白质组学解决方案在先进的心血管研究中的重要性。引言蛋白质组学是对蛋白质的大范围分析，被认为是生物系统研究的
蛋白质组学在病原体学研究中的应用
最近，《Molecular & Cellular Proteomics》期刊两篇文章分别报道了一种性传播寄生虫“阴道毛滴虫（Trichomonas vaginalis）”和HIV相关机会肺真菌“曲霉菌（Aspergillus）”的致病机理。 文章一、脂肪酸让寄生虫如虎添翼 根据疾病控制和预防
Gradiflow－技术在蛋白质分离研究中的应用（二）
2. 蛋白质组预分离 2DE是研究者常用的蛋白质组分析方法，这种方法很有用，但是它的限制因素在实验过程中逐渐呈现出来，比如一些膜蛋白，高分子量和低分子量的蛋白质，就很难用2DE检测出来。特别是一些蛋白样品中包含高丰度的蛋白质，这样就很有可能将研究者感兴趣的蛋白质掩盖，在2DE图谱上体现不出来，从
Gradiflow－技术在蛋白质分离研究中的应用（一）
电泳是现代蛋白质研究常用和有效的工具，但是电泳过程中所产生的热量对蛋白质结构的破坏，以及目的蛋白从蛋白胶或其他介质中低的回收效率等等问题，常常让蛋白质更深入的研究戛然而止，而Gradiflow 技术的应用解决了研究者头疼的难题 ！ Gradiflow 技术要点可以简单概括为如下几点：1. 应用不同孔
质谱技术在蛋白组研究中的应用（二）
6 质谱仪的最新进展 用质谱检测蛋白，首先考虑到用PMF与 MALDI-TOF联用，如果无法检测，下一步就用ESI-MS/MS创建序列标签。在PMF分析中，MALDI的平板中只需一小部分样本就足以检测，剩下的样本就可以用来创建序列标签。并且，在MALDI-TOF仪器上，用一种叫做“源后延迟”
质谱技术在蛋白组研究中的应用（一）
[摘要] 质谱对于现代蛋白质化学研究是一项重要的技术。也可用于蛋白组分析,在同一时间监控上千种蛋白的表达情况。首先蛋白质混合物可以用双向凝胶电泳分开，再用质谱及随后的蛋白质数据库检索对单个蛋白进行鉴定和分析。最近几年，质谱领域取得了令人鼓舞的进展，使得全自动、高通量的蛋白检测成为可能。质谱也
质谱技术在蛋白质组研究中的分析方法介绍
2003年人类基因组精细图绘制完成，是人类科学史上一个里程碑式的事件。后基因组时代的研究重点自然落在了蛋白质头上。为啥？因为中心法则告诉我们，基因的产物——蛋白质，是生命活动的最终执行者。与基因组类比，研究生物体内全套蛋白质的科学，就是蛋白质组学。基因组计划完成的同年，人类蛋白质组计划启动，令人
现有技术水平蛋白质水平上研究基因功能的技术有哪些
随着分子生物学技术的开展，对生物基因组中包含的全部基因及其所翻译的蛋白质的功用加以解读和描绘，特别是大量未知基因的功用及其相应蛋白质产物的功用停止研讨成了基因工程研讨的热点方向。而在蛋白质程度上定量、动态、整体性研讨生物体的蛋白质组学，将在后基因组时期大大促进我们对基因功用的了解。酵母双杂交实验
光散射技术及其在GPC中的应用
光散射技术及其在GPC中的应用凝胶渗透色谱（GPC）是测定高分子材料分子量及其分布最常用、快速和有效的方法。GPC分离以体积排阻为主要原理。无论是单浓度检测器，还是浓度监测器和粘度检测器联用的GPC分析结果都是相对信息，或与样品的化学结构有关或与仪器的校正曲线有关。为了精确测量分子量，GPC/SEC
光散射技术及其在GPC中的应用
光散射发展史 当一束光通过一不均匀介质时，不仅可以在沿着入射光方向观察到透射光强，在入射方向以外的各个方向也能够观察到光强，这种光我们称之为散射光。1802年， Ritcher观察到了光照射金溶胶所形成的的散射光；1869年，丁达尔（Tyndall）发现当一束光通过透明的胶体是，从侧面可看到一条光柱