放射性标记的探针与固定在膜上的核酸的Southern杂交
实验方法原理 Southern 杂交获得的信号强度取决于若干因素，包括固定的 DNA 与探针互补的比例、探针的大小及特异活性以及转移到膜上的基因组 DNA 的数量。在最佳条件下，这种方法的敏感度足以检测到与 32P 标记的高度特异（>109 cpm/μg）的探针互补的 <0.1 pg 的 DNA。实验材料 固定于膜上的 DNA无菌水配的 poly (A) RNADNA 或 RNA 探针鲑鱼精 DNA试剂、试剂盒 磷酸-SDS 洗液预杂交 杂交液水相缓冲液杂交用溶液甲酰胺缓冲液杂交用溶液仪器、耗材 放射性墨水标记的不干胶标签或者磷光不干胶标签杂交瓶预先调到适宜温度的孵箱或商业获得的杂交装置孵箱或水浴振荡器沸水浴实验步骤 一、材料1. 缓冲液及溶液磷酸-SDS 洗液 1（40 mmol/L Na3PO4 （pH 7.2)，1 mmol/L EDTA ( pH 8.0)，5% (m/V) SDS，0.5 (m/......阅读全文
放射性标记的探针与固定在膜上的核酸Southern杂交
放射性标记的探针与固定在膜上的核酸Southern杂交1. 将含有靶DNA的膜漂浮在盛有6×SSC（或6×SSPE）的皿中直到膜自下面而上完全浸湿。将膜浸于溶液中2 min。2. 用下列方法之一进行预杂交在热密封的袋中进行的杂交a. 将膜塞入热密封袋中（如Sears Seal-A-Mea
放射性标记的探针与固定在膜上的核酸的Southern杂交
Southern 杂交获得的信号强度取决于若干因素，包括固定的 DNA 与探针互补的比例、探针的大小及特异活性以及转移到膜上的基因组 DNA 的数量。在最佳条件下，这种方法的敏感度足以检测到与 32P 标记的高度特异（>109 cpm/μg）的探针互补的109 cpm/μg）的探针互补的
放射性标记的探针与固定在膜上的核酸的Southern杂交
实验方法原理 Southern 杂交获得的信号强度取决于若干因素，包括固定的 DNA 与探针互补的比例、探针的大小及特异活性以及转移到膜上的基因组 DNA 的数量。在最佳条件下，这种方法的敏感度足以检测到与 32P 标记的高度特异（>109
放射性标记的探针与固定在膜上的核酸的Southern杂交
实验方法原理 Southern 杂交获得的信号强度取决于若干因素，包括固定的 DNA 与探针互补的比例、探针的大小及特异活性以及转移到膜上的基因组 DNA 的数量。在最佳条件下，这种方法的敏感度足以检测到与 32P 标记的高度特异（>109 cpm/μg）的探针互补的
核酸杂交技术(Northern－Blot、Southern－Blot和探针标记）
（一）Southern Blot原理：将待检测的DNA分子用/不用限制性内切酶消化后，通过琼脂糖凝胶电泳进行分离，继而将其变性并按其在凝胶中的位置转移到硝酸纤维素薄膜或尼龙膜上，固定后再与同位素或其它标记物标记的DNA或RNA探针进行反应。如果待检物中含有与探针互补的序列，则二者通过碱基互补的原理进
放射性标记探针与核酸杂交反应的步一般过程
1、配制所需试剂SSC 溶液(20×):3mol/L NaCl,0.3mol/L 柠檬酸钠。Denhardt’s溶液(50×):聚蔗糖5g,聚乙烯吡咯烷酮5g,牛血清白蛋白(BSA)5g,加水至500mL。预杂交液:6×SSC,5×Denhardt’s溶液,0.5%SDS,100μg/mL 经变性或
概述分子杂交技术常见的杂交分类
分子杂交是通过各种方法将核酸分子固定在固相支持物上，然后用放射性标记的探针与被固定的分子杂交，经显影后显示出目的DNA或RNA分子所处的位置。根据被测定的对象，分子杂交基本可分为以下几大类： (1) Southern杂交:DNA片段经电泳分离后,从凝胶中转移到硝酸纤维素滤膜或尼龙膜上,然后与探
关于Southern杂交的探针标记简介
用于Southern印迹杂交的探针可以是纯化的DNA片段或寡核苷酸片段。探针可以用放射性物质标记或用地高辛标记，放射性标记灵敏度高，效果好；地高辛标记没有半衰期，安全性好。人工合成的短寡核苷酸可以用T4多聚核苷酸激酶进行末端标记。探针标记的方法有随机引物法、切口平移法和末端标记法。
原位杂交和核酸杂交是一种吗
核酸杂交方法是一种分子生物学的标准技术,用于检测DNA或RNA分子的特定序列（靶序列）.经典的核酸杂交方法是将DNA或RNA先转移并固定到硝酸纤维素或尼龙膜上,与其互补的单链DNA或RNA探针用放射性或非放射性标记,在膜上杂交时,探针通过氢键与其互补的靶序列结合,洗去未结合的游离探针后,经放射自显影
分子杂交有什么分法
通过碱基对之间非共价键（主要是氢键）的形成即出现稳定的双链区，这是核酸分子杂交的基础。杂交分子的形成并不要求两条单链的碱基顺序完全互补，所以不同来源的核酸单链只要彼此之间有一定程度的互补顺序（即某种程度的同源性）就可以形成杂交双链。分子杂交可在DNA与DNA、RNA与RNA或RNA与DNA的二条单链
分子杂交技术的发展历程
通过碱基对之间非共价键的形成即出现稳定的双链区，这是核酸分子杂交的基础。使单链聚合双链的过程称为退火或复性。核酸杂交技术基本上是Hall等1961年的工作开始的，探针与靶序列在溶液中杂交，通过平衡密度梯度离心分离杂交体。该法很慢、费力且不精确，但它开拓了核酸杂交技术的研究。Bolton等1962年设
分子杂交技术的发展历程
通过碱基对之间非共价键的形成即出现稳定的双链区，这是核酸分子杂交的基础。使单链聚合双链的过程称为退火或复性。核酸杂交技术基本上是Hall等1961年的工作开始的，探针与靶序列在溶液中杂交，通过平衡密度梯度离心分离杂交体。该法很慢、费力且不精确，但它开拓了核酸杂交技术的研究。Bolton等1962年设
关于Southern杂交的转膜的介绍
即将凝胶中的单链DNA片段转移到固相支持物上。而此过程最重要的是保持各DNA片段的相对位置不变。DNA是沿与凝胶平面垂直的方向移出并转移到膜上，因此，凝胶中的DNA片段虽然在碱变性过程已经变性成单链并已断裂，转移后各个DNA片段在膜上的相对位置与在凝胶中的相对位置仍然一样，故而称为印迹（blot
关于Southern杂交的洗膜的介绍
取出NC膜，在2×SSC溶液中漂洗5min，然后按照下列条件洗膜： 2×SSC/0.1% SDS，42℃，10min； 1×SSC/0.1% SDS，42℃，10min； 0.5×SSC/0.1% SDS，42℃，10min； 0.2×SSC/0.1% SDS，56℃，10min； 0
硝酸纤维素膜(NC膜)的简介和生产原理3
NC膜的应用举例分子杂交杂交技术有固相杂交和液相杂交之分。固相杂交技术目前较为常用，先将待测核酸结合到一定的固相支持物上，再与液相中的标记探针进行杂交。固相支持物常用硝酸纤维素膜。固相杂交包括膜上印迹杂交和原位杂交。前者包括三个基本过程：第一，通过印迹技术将核酸片段转移到固相支持物上；第二，用标记探
Southern杂交待测核酸样品的制备
（一）制备待测DNA 基因组DNA是从动物组织（或）细胞制备。1.采用适当的化学试剂裂解细胞，或者用组织匀浆器研磨破碎组织中的细胞；2.用蛋白酶和RNA酶消化大部分蛋白质和RNA；3.用有机试剂（酚/氯仿）抽提方法去除蛋白质。 （二） DNA限制酶消化 基因组DNA很长，需要将其切割成大小
核酸分子杂交探针的介绍
若杂交的目的是识别靶DNA中的特异核苷酸序列，这需要牵涉到另一项核酸操作的基本技术─探针（probe）的制备。探针是指带有某些标记物（如放射性同位素32P，荧光物质异硫氰酸荧光素等）的特异性核酸序列片段。若我们设法使一个核酸序列带上32P，那么它与靶序列互补形成的杂交双链，就会带有放射性。以适当
分子杂交方式介绍
1、固相杂交将参加反应的一条核酸链先固定在固体支持物上，一条反应核酸游离在溶液中。固体支持物有硝酸纤维素滤膜、尼龙膜、乳胶颗粒、磁珠和微孔板等。由于固相杂交后，未杂交的游离片段可容易地漂洗除去，膜上留下的杂交物容易检测和能防止靶DNA自我复性等优点，所以最为常用。常用的固相杂交类型有：菌落原位杂交、
分子杂交的方式介绍
1、固相杂交将参加反应的一条核酸链先固定在固体支持物上，一条反应核酸游离在溶液中。固体支持物有硝酸纤维素滤膜、尼龙膜、乳胶颗粒、磁珠和微孔板等。由于固相杂交后，未杂交的游离片段可容易地漂洗除去，膜上留下的杂交物容易检测和能防止靶DNA自我复性等优点，所以最为常用。常用的固相杂交类型有：菌落原位杂交、
分子杂交方式介绍
1、固相杂交将参加反应的一条核酸链先固定在固体支持物上，一条反应核酸游离在溶液中。固体支持物有硝酸纤维素滤膜、尼龙膜、乳胶颗粒、磁珠和微孔板等。由于固相杂交后，未杂交的游离片段可容易地漂洗除去，膜上留下的杂交物容易检测和能防止靶DNA自我复性等优点，所以最为常用。常用的固相杂交类型有：菌落原位杂交、
分子杂交技术（三）
五、核酸分子杂交的类型 随着基因工程研究技术的迅猛发展，新的核酸分子杂交类型和方法在不断涌现和完善。核酸分子杂交可按作用环境大致分为固相杂交和液相杂交两种类型。固相杂交是将参加反应的一条核酸链先固定在固体支持物上，一条反应核酸游离在溶液中。固体支持物有硝酸纤维素滤膜、尼龙膜、乳胶颗粒、磁珠和微孔板
分子杂交技术（三）
五、核酸分子杂交的类型 随着基因工程研究技术的迅猛发展，新的核酸分子杂交类型和方法在不断涌现和完善。核酸分子杂交可按作用环境大致分为固相杂交和液相杂交两种类型。固相杂交是将参加反应的一条核酸链先固定在固体支持物上，一条反应核酸游离在溶液中。固体支持物有硝酸纤维素滤膜、尼龙膜、乳胶颗粒、磁珠和微孔板
Southern－blot对动物细胞基因组DNA中小卫星多态性的检测
实验概要本实验介绍了动物细胞基因组DNA中小卫星多态性Southern blot检测的原理和操作步骤。掌握核酸杂交检测技术（Southern blotting技术）、核酸探针的标记技术、小卫星DNA多态性检测分析技术（DNA 指纹图谱技术）和化学发光检测技术。实验原理Southern印迹杂交技术包括
原位杂交组织化学实验技术1
第一节 原位杂交组织化学概述 一、核酸分子杂交技术 1961年Hall开拓了液相核酸杂交技术的研究，其基本原理是利用核酸分子单链之间有互补的碱基顺序，通过碱基对之间非共价键的形成，出现稳定的双链区，形成杂交的双链。自此以后，由于分子生物学技术的迅猛发展，特别是70年代末到80年代初，分子克隆、质
southern印迹杂交的基本概念
Southern印迹杂交是进行基因组DNA特定序列定位的通用方法。其基本原理是：具有一定同源性的两条核酸单链在一定的条件下，可按碱基互补的原则特异性地杂交形成双链。一般利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段，将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上，经干
核酸探针杂交检测技术介绍
一、核酸探针预杂交预杂交的目的是用非特异性 DNA 分子(鲑精 DNA 或小牛胸腺 DNA)及其他高分子化合物(Denhart’s溶液)将待测核酸分子中的非特异性位点封闭,以避免这些位点与探针的非特异性结合。杂交反应是使单链核酸探针与固定在膜上的待测核酸单链在一定温度和条件下进行复性反应的过程。杂交
Southern杂交的基本概念
Southern印迹杂交是进行基因组DNA特定序列定位的通用方法。其基本原理是：具有一定同源性的两条核酸单链在一定的条件下，可按碱基互补的原则特异性地杂交形成双链。一般利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段，将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上，
DNA印迹（Southern－Blot)实验
【实验原理】DNA印迹是1975年由英国Southern创建的。其基本原理是：DNA分子经限制性核酸内切酶酶切后，由琼脂糖凝胶电泳将所得 DNA片段按分子质量大小分离，然后将DNA片段变性，并使凝胶中的单链DNA片段转移到尼龙膜、硝酸纤维素膜(NC)或其他固相支持物上，此法中DNA 片段
分子杂交技术的核酸探针标记法
核酸探针根据核酸的性质，可分为DNA和RNA探针;根据是否使用放射性标记物的与否,可分为放射性标记探针和非放射性标记探针;根据是否存在互补链,可分为单链和双链探针;根据放射性标记物掺入情况,可分为均匀标记和末端标记探针。下面将介绍各种类型的探针及标记方法。 分子生物研究中，最常用的探针即为双链DNA
Southern－杂交操作步骤及注意事项
Southern 杂交是分子生物学的经典实验方法。其基本原理是将待检测的DNA样品固定在固相载体上，与标记的核酸探针进行杂交，在与探针有同源序列的固相DNA的位置上显示出杂交信号。通过Southern杂交可以判断被检测的DNA样品中是否有与探针同源的片段以及该片段的长度。该项技术广泛被应用在遗传病