WIKI资讯
WIKI资讯
1、配制所需试剂SSC 溶液(20×):3mol/L NaCl,0.3mol/L 柠檬酸钠。Denhardt’s溶液(50×):聚蔗糖5g,聚乙烯吡咯烷酮5g,牛血清白蛋白(BSA)5g,加水至500mL。预杂交液:6×SSC,5×Denhardt’s溶液,0.5%SDS,100μg/mL 经变性或断裂成片段的鲑精 DNA。2、操作步骤(1)将含靶核酸的 NC 膜漂浮于6×SSC 液面,使其由下至上完全湿润,并继续浸泡2min。(2)将湿润的 NC 膜装入塑料袋中,按0.2mL/cm2 的量加入预杂交液,尽可能挤出气泡,将袋封口,置68℃水浴1～2h 或过夜。(3)将双链探针做变性处理使成单链,即于100℃加热5min,然后立即置冰浴使骤冷。(4)从水浴中取出杂交袋,剪去一角,将单链探针加入,尽可能将袋内空气挤出去,重新封口,并将杂交袋装入另一个干净的袋内,封闭,以防放射性污染。(5)将杂交袋浸入68℃水浴,温育8～1......阅读全文
1、配制所需试剂 SSC 溶液(20×):3mol/L NaCl,0.3mol/L 柠檬酸钠。 Denhardt’s溶液(50×):聚蔗糖5g,聚乙烯吡咯烷酮5g,牛血清白蛋白(BSA)5g,加水至500mL。 预杂交液:6×SSC,5×Denhardt’s溶液,0.5%SDS,100μg/
放射性标记的探针与固定在膜上的核酸Southern杂交 1. 将含有靶DNA的膜漂浮在盛有6×SSC（或6×SSPE）的皿中直到膜自下面而上完全浸湿。将膜浸于溶液中2 min。 2. 用下列方法之一进行预杂交 在热密封的袋中进行的杂交 a. 将膜塞入热密封袋中（如Sears S
Southern 杂交获得的信号强度取决于若干因素，包括固定的 DNA 与探针互补的比例、探针的大小及特异活性以及转移到膜上的基因组 DNA 的数量。在最佳条件下，这种方法的敏感度足以检测到与 32P 标记的高度特异（>109 cpm/μg）的探针互补的109 cpm/μg）的探针互补的
实验方法原理 Southern 杂交获得的信号强度取决于若干因素，包括固定的 DNA 与探针互补的比例、探针的大小及特异活性以及转移到膜上的基因组 DNA 的数量。在最佳条件下，这种方法的敏感度足以检测到与 32P 标记的高度特异（>109 cpm/μg）的探针互补的
实验方法原理 Southern 杂交获得的信号强度取决于若干因素，包括固定的 DNA 与探针互补的比例、探针的大小及特异活性以及转移到膜上的基因组 DNA 的数量。在最佳条件下，这种方法的敏感度足以检测到与 32P 标记的高度特异（>109
一、核酸探针预杂交预杂交的目的是用非特异性 DNA 分子(鲑精 DNA 或小牛胸腺 DNA)及其他高分子化合物(Denhart’s溶液)将待测核酸分子中的非特异性位点封闭,以避免这些位点与探针的非特异性结合。杂交反应是使单链核酸探针与固定在膜上的待测核酸单链在一定温度和条件下进行复性反应的过程。杂交
实验原理 分子生物研究中，zui常用的探针即为双链DNA探针，它广泛应用于转基因植物拷贝数的鉴定、临床诊断等方面。双链DNA探针的合成方法主要有下列两种:切口平移法和随机引物合成法。 切口平移法(nick translation) 当双链DNA分子的一条链上产生切口时,
实验原理 分子生物研究中，zui常用的探针即为双链DNA探针，它广泛应用于转基因植物拷贝数的鉴定、临床诊断等方面。双链DNA探针的合成方法主要有下列两种:切口平移法和随机引物合成法。 切口平移法(nick translation) 当双链DNA分子的一条链上产生切口时,E.coli DNA聚合
实验原理分子生物研究中，最常用的探针即为双链DNA探针，它广泛应用于转基因植物拷贝数的鉴定、临床诊断等方面。双链DNA探针的合成方法主要有下列两种:切口平移法和随机引物合成法。切口平移法(nick translation) 当双链DNA分子的一条链上产生切口时,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可将
核酸探针根据核酸的性质，可分为DNA和RNA探针;根据是否使用放射性标记物的与否,可分为放射性标记探针和非放射性标记探针;根据是否存在互补链,可分为单链和双链探针;根据放射性标记物掺入情况,可分为均匀标记和末端标记探针。下面将介绍各种类型的探针及标记方法。 分子生物研究中，最常用的探针即为双链DNA