比较分子生理基因组学—cDNA阵列的异种杂交实验（二）
二、方法在开始任何微阵列实验之前，必须要选定合适的对照和时间点，这样获得的数据才有生物学意义。关于如何选择合适的对照，参见注释 1 和 2。1 总 R N A 的提取2 R N A 变性凝胶电泳（1）制备一块 1 % 的琼脂糖甲醛变性胶，浸没在 IXM OPS 缓冲液中，胶上的孔应被溶液完全没过。将胶预电泳 15 min (与此同时准备 RNA 样品）。（2）取适当体积的总 RNA (含 有 10〜2 0 μg RNA)，加人到置于冰上的标记管中，用 DEPC 水调整总体积到 15 μL。向每管中加入 15 μLRNA 样品缓冲液和 6 μL6X RNA 上样缓冲液。（3）将样品于 55°C 孵 育 10 min, 迅速置于冰上。向每管中加入适当体积的 R N A 上样缓冲液，使每个样品中的上样缓冲液达到 I X 的终浓度。（4）将 RNA 样品轻轻混匀，短暂离心，将所有的样品都收于 Eppendorf 管的底部。（5）将每个管......阅读全文
比较分子生理基因组学－—cDNA阵列的异种杂交实验（二）
二、方法在开始任何微阵列实验之前，必须要选定合适的对照和时间点，这样获得的数据才有生物学意义。关于如何选择合适的对照，参见注释 1 和 2。1 总 R N A 的提取2 R N A 变性凝胶电泳（1）制备一块 1 % 的琼脂糖甲醛变性胶，浸没在 IXM OPS 缓冲液中，胶上的孔应被溶液完全没过。将
比较分子生理基因组学－—cDNA阵列的异种杂交实验
实验步骤 一、材料 这里用到的所有化学试剂都为分子生物学等级，或者用它们最高纯度的等效物。所有的塑料和玻璃制品，包括瓶子和移液器吸头都要高压灭菌，在核酸实验操作过程中必须始终戴手套。 cDNA A T L A S阵列从Clo
比较分子生理基因组学－—cDNA阵列的异种杂交实验
近几年来， DNA 微阵列已经被公认是分子生物学研究的一种标准方法。特别是在生物医学研究方面，常用物种的微阵列一面世就得到广泛应用。但是对于非模式生物来说 ，微阵列的应用尚未得到充分开展，而这些物种往往表现出一些很有趣的生理表型。对大多数比较生物学的研究者来说，制备一个新物种的 D N A 阵列或微
比较分子生理基因组学－—cDNA阵列的异种杂交实验（一）
实验步骤 一、材料这里用到的所有化学试剂都为分子生物学等级，或者用它们最高纯度的等效物。所有的塑料和玻璃制品，包括瓶子和移液器吸头都要高压灭菌，在核酸实验操作过程中必须始终戴手套。 cDNA A T L A S阵列从Clontech购得。人 19K cDNA 阵列从Ontario 癌症研究所购得
大规模－PCR－制作－cDNA－微阵列实验（二）
第 3 阶段：克隆的扩增与 PCR 产物的评估一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂DEPC 处理过的 H20TAE 缓冲液，1×（40 mmol/L Tris-乙酸盐，1 mmol/L EDTA，pH 约 8.5)DNA 点样缓冲液（200 g/LFicoll400，0.1mol/LNa2EDTA，pH
cDNA宏阵列方法分离拟南芥的臭氧应答基因实验(二)
注意事项1.所有的试剂必须用电阻高于 17. 6 的双蒸水配制。2.提取 RNA 所用的玻璃器具必须于 180°C 烘烤至少 8 h 以灭活 RNase。除缓冲液外的所有溶液都要用 0 •1 % DEPC水 配 制（见注释 3)。 RNase 的污染主要来源于实验人员的手，所以进行 RN A 实验时
cDNA宏阵列方法分离拟南芥的臭氧应答基因实验（二）
11.用 mRNA 纯 化 试 剂 盒（Amersham Biosciences, Piscataway, NJ) 将 Poly.(A )+ RNA从总R N A 中分离出来（见注释5)。####（2） c D N A 文 库 的 构 建1.取1. 5 〜7. 5 μg poly (A )+ R
大规模－PCR－制作－cDNA－微阵列实验
本方案描述了通过 PCR 扩增产物，来制作 cDNA 微阵列的实验步骤。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。试剂、试剂盒缓冲液、溶液和试剂生物分子酶和酶缓冲液核酸和寡核苷酸凝胶仪器、耗材专用设备实验步骤第 1 阶段：影印铺板与工作库的制备一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂羧苄
大规模－PCR－制作－cDNA－微阵列实验
试剂、试剂盒 缓冲液、溶液和试剂 生物分子 酶和酶缓冲液 核酸和寡核苷酸 凝胶 仪器、耗材
大规模－PCR－制作－cDNA－微阵列实验（一）
试剂、试剂盒 缓冲液、溶液和试剂生物分子 酶和酶缓冲液核酸和寡核苷酸凝胶仪器、耗材 专用设备实验步骤 第 1 阶段：影印铺板与工作库的制备一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂羧苄西林（100ug/ml 储存溶液）乙醇（100%)甘油，45%(体积分数）LB 液体培养基。（1L LB 液体培养基含有 10
微阵列中期分裂相染色体的比较基因组杂交（CGH）－实验
染色体 CGH 的独特优点在于它的全基因筛查功能，与检测单一靶 DNA 剂量改变的低通量方法，如 Southern 分析、PCR 和荧光原位杂交（FISH) 相比，速度显著提高且省力。目前染色体 CGH 是一种比较完善的分子细胞遗传学方法，但是它的两个缺陷限制其作为一种综合性筛查工具的应用。来源：《
微阵列中期分裂相染色体的比较基因组杂交（CGH）－实验
实验方法原理 实验材料 高分子质量基因组DNA EcoR I 或 Dpn II试剂、试剂盒 SSCcDNA阵列dNTP 混合液 dCTP 酵母 tRNADNA 聚合酶 I仪器、耗材 Qiaquick PCR 纯化试剂盒 BioPrime 标记试剂盒Micrcon 30 滤器杂交炉Maxiprep D
分子杂交CDNA探针的技术特点及应用介绍
cDNA（complementary DNA）是指互补于mRNA的DNA分子。cDNA是由RNA经一种称为逆转录酶（reversetranscriptase）的DNA聚合酶催化产生的，这种逆录酶是Temin等在70年代初研究致癌RNA病毒时发现的。该酶以RNA为模板，根据碱基配对原则，按照RNA的核
分子杂交技术（二）
四、核酸探针的标记和检测 分子杂交是核酸链间碱基配对规则的一种结合方式，是核酸的重要理化特性。利用分子杂交这一特性来对特定核酸序列进行检测，必须将杂交链中的一条用某种可以检测的分子进行标记，这条链就称为核酸探针。因此，核酸探针的制备是分子杂交技术的关键。最早采用的也是目前最常用的核酸探针标记方法是
分子杂交技术（二）
四、核酸探针的标记和检测 分子杂交是核酸链间碱基配对规则的一种结合方式，是核酸的重要理化特性。利用分子杂交这一特性来对特定核酸序列进行检测，必须将杂交链中的一条用某种可以检测的分子进行标记，这条链就称为核酸探针。因此，核酸探针的制备是分子杂交技术的关键。最早采用的也是目前最常用的核酸探针标记方法是
cDNA宏阵列方法分离拟南芥的臭氧应答基因实验
实验步骤 ##一、 cDNA 宏阵列的样品制备培养基： I : 2 (V7 V ) Gamborg B5 培 养 基（GibcoBRL， Rockville, MD), I : 1000(V /V ) Hyponex肥 料（Hypon
微阵列芯片的应用
微阵列芯片是指采用光导原位合成或微量点样等方法，将大量生物大分子比如核酸片段、多肽分子甚至组织切片、细胞等生物样品有序地固化于支持物（如玻片、尼龙膜等载体）的表面，组成密集二维分子排列，然后与已标记的待测生物样品中靶分子反应，通过特定的仪器，比如激光扫描仪对反应信号的强度进行快速、并行、高效地检测分
分子杂交的实验原理
分子杂交是通过配对碱基对之间的非共价键（主要是氢键）结合，从而形成稳定的双链区。杂交分子的形成并不要求两条单链的碱基顺序完全互补，所以不同来源的核酸单链只要彼此之间有一定程度的互补顺序（即某种程度的同源性）就可以形成杂交双链。分子杂交可在DNA与DNA、RNA与RNA或RNA与DNA的二条单链之间进
分子杂交的实验原理
分子杂交是通过配对碱基对之间的非共价键（主要是氢键）结合，从而形成稳定的双链区。杂交分子的形成并不要求两条单链的碱基顺序完全互补，所以不同来源的核酸单链只要彼此之间有一定程度的互补顺序（即某种程度的同源性）就可以形成杂交双链。分子杂交可在DNA与DNA、RNA与RNA或RNA与DNA的二条单链之间进
微阵列芯片的应用
微阵列芯片是指采用光导原位合成或微量点样等方法，将大量生物大分子比如核酸片段、多肽分子甚至组织切片、细胞等生物样品有序地固化于支持物（如玻片、尼龙膜等载体）的表面，组成密集二维分子排列，然后与已标记的待测生物样品中靶分子反应，通过特定的仪器，比如激光扫描仪对反应信号的强度进行快速、并行、高效地检测分
微阵列—比较基因组杂交技术检测染色体异常
【摘要】近年微阵列一比较基因组杂交(microarraycomparativegenomichybirdization，microarray．CGH)技术被应用到临床细胞遗传学领域。该技术是选择DNA特殊片段作为靶，固化在载体上，形成密集、有序的分子微阵列。然后，从测试标本中提取DNA，将测试DNA
cDNA宏阵列方法分离拟南芥的臭氧应答基因实验(一)
除 cDNA 微阵列外，基于尼龙膜支持物的 cDNA 宏阵列方法是又一被广泛应用的大规模基因表达数据的收集方法。从新基因的发现到基因表达谱的分析， cDNA 宏阵列被应用于分子生物学研究领域的各个方面。尽 管 cDNA 宏阵列的点阵密度低于微阵列，但由于应用灵敏度较高的同位素标记的 cDNA 探针，
cDNA宏阵列方法分离拟南芥的臭氧应答基因实验（一）
实验步骤 ##一、 cDNA 宏阵列的样品制备培养基： I : 2 (V7 V ) Gamborg B5 培 养 基（GibcoBRL， Rockville, MD), I : 1000(V /V ) Hyponex肥 料（Hyponex 10 : 5 : 10; Hyponex Japan
异花授粉植物有性杂交实验
异花授粉亦有两种含义，对于有性繁殖植物 ，是指在自然状态条件下雌蕊通过接受其他花朵的花粉受精繁殖后代的植物，对于营养繁殖的果树等作物，是指不同品种(基因型)间的相互授粉，又叫异交植物。异花授粉植物的群体是来源不同、遗传性不同的两性细胞结合而产生异质结合子所繁衍的后代。自花授粉植物和常异花授粉植
异花授粉植物有性杂交实验
异花授粉亦有两种含义，对于有性繁殖植物 ，是指在自然状态条件下雌蕊通过接受其他花朵的花粉受精繁殖后代的植物 ，对于营养繁殖的果树等作物，是指不同品种(基因型)间的相互授粉，又叫异交植物。异花授粉植物的群体是来源不同、遗传性不同的两性细胞结合而产生异质结合子所繁衍的后代。自花授粉植物和常异花授
分子杂交技术斑点杂交的实验简介
斑点杂交是指将DNA或RNA样品直接点在硝酸纤维素滤膜上,然后与核酸探针分子杂交，以显示样品中是否存在特异的DNA或RNA。同一种样品经不同倍数的稀释,还可以得到半定量的结果。所以它是一种简便、快速、经济的分析DNA或RNA的方法,在基因分析和基因诊断中经常用到,是研究基因表达的有力工具。但由于
用DNA芯片技术检测基因的表达
一、芯片制备基因芯片的制备主要有两种基本方法，一是在片合成法，另一种方法是点样法。在片合成法是基于组合化学的合成原理,它通过一组定位模板来决定基片表面上不同化学单体的偶联位点和次序。在片合成法制备DNA芯片的关键是高空间分辨率的模板定位技术和固相合成化学技术的精巧结合。目前，已有多种模板技术用于基因
用DNA芯片技术检测基因的表达
一、芯片制备基因芯片的制备主要有两种基本方法，一是在片合成法，另一种方法是点样法。在片合成法是基于组合化学的合成原理,它通过一组定位模板来决定基片表面上不同化学单体的偶联位点和次序。在片合成法制备DNA芯片的关键是高空间分辨率的模板定位技术和固相合成化学技术的精巧结合。目前，已有多种模板技术用于基因
用比较基因组杂交描述染色体结构异常实验（二）
二、正常男性中期染色体标本的制备1.准备一个封闭环境，其相对湿度约55%(可在50%〜60%变化），温度24〜26.5℃。2.将巴斯德吸管置于玻璃载片上方2〜4in处，让一滴细胞悬液滴在玻片的左侧。然后迅速将第二滴细胞悬液滴在玻片右侧（见注释7)3.在固定液全部蒸发前，将玻片浸入盛有新鲜固定液的染色
生物芯片入门（一）：生物芯片及应用简介
生物芯片（biochip）是指采用光导原位合成或微量点样等方法，将大量生物大分子比如核酸片段、多肽分子甚至组织切片、细胞等等生物样品有序地固化于支持物（如玻片、硅片、聚丙烯酰胺凝胶、尼龙膜等载体）的表面，组成密集二维分子排列，然后与已标记的待测生物样品中靶分子杂交，通过特定的仪器比如激光共聚焦扫描或