用RNA的免疫沉淀rPCR方法进行体内分离核糖核蛋...（二）
6. 仪器(1) 微型凝胶水平电泳仪。(2) 紫外透射仪。(3) PCR 扩增仪。(4) 高速低温离心机。(5) 低温微型离心机。(6) 台式低温离心机。(7) 旋转真空浓缩仪（Speed-Vac concentrator）。二、实验方法1. 细胞提取物的制备(1) 培养 3~4 瓶 150 cm2 组织培养瓶的细胞。(2) 用 10~15 ml 冰冷的 PBS 洗三次。用细胞刮刀收集细胞，用冰冷的 PBS 重悬细胞并将其转移至 50 ml 的无菌离心管中。(3) 于 4℃ 1000 g 离心 10 min。(4) 用 0.5 ml 含有 100 U RNase 抑制剂的新鲜配制的 NET-2 缓冲液重悬细胞。(5) 将细胞重悬液放置冰上超声波处理，每次 5~10 s，共三次。(6) 将经超声波处理的细胞悬液转移至 15 ml 耐压透性玻璃管中，4℃ 10000 g 离心 10 min，回收上清液，用于免疫沉淀反应。上清液可冻存......阅读全文
用RNA的免疫沉淀rPCR方法进行体内分离核糖核蛋...（二）
6. 仪器(1) 微型凝胶水平电泳仪。(2) 紫外透射仪。(3) PCR 扩增仪。(4) 高速低温离心机。(5) 低温微型离心机。(6) 台式低温离心机。(7) 旋转真空浓缩仪（Speed-Vac concentrator）。二、实验方法1. 细胞提取物的制备(1) 培养 3~4 瓶 150 cm2
用RNA的免疫沉淀rPCR方法进行体内分离核糖核蛋...（一）
用RNA的免疫沉淀-rPCR方法进行体内分离核糖核蛋白复合体实验实验方法原理 RNA 免疫沉淀-随机聚合链反应方法可用来鉴定细胞内 RNP 复合物中的 RNA 组分。实验材料 载体酵母 tRNARQ1 DNA 酶糖原小牛肠碱性磷酸酶T4 DNA 连接酶JMJ09 感受态细菌试剂、试剂盒 PBSNET
RNA免疫沉淀rPCR方法进行体内分离核糖核蛋白复合体实验
RNA 免疫沉淀-随机聚合链反应方法可用来鉴定细胞内 RNP 复合物中的 RNA 组分。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编：郑晓飞。实验方法原理RNA 免疫沉淀-随机聚合链反应方法可用来鉴定细胞内 RNP 复合物中的 RNA 组分。实验材料载体酵母 tRNARQ1 DNA 酶糖原小牛肠碱性磷酸酶
RNA免疫沉淀rPCR方法进行体内分离核糖核蛋白复合体实验
实验方法原理 RNA 免疫沉淀-随机聚合链反应方法可用来鉴定细胞内 RNP 复合物中的 RNA 组分。 实验材料 载体酵母 tRNA R
外周血单个核细胞怎么进行分离？
外周血中单个核细胞(淋巴细胞和单核细胞)的比重介于1.075～1.090 之间，红细胞及粒细胞在1.092左右，血小板在1.030～1.035之间，因而可利用一种比重介于1.075～1.092之间而近于等渗的溶液作密度梯度离心，使一定比重的细胞按相应密度梯度分布而加以分离。对分离介质的基本要
用引物延伸法进行－RNA－的分析
实验方法原理 引物延伸法主要用于 mRNA5' 末端作图。poly (A) + RNA 先与过量 5' 末端标记的且与靶 RNA 互补的单链寡核苷酸引物杂交，然后用反转录酶延伸这个引物。产生的 cDNA 与 RNA 模板互补且
用引物延伸法进行－RNA－的分析
引物延伸法主要用于 mRNA5' 末端作图。poly (A) + RNA 先与过量 5' 末端标记的且与靶 RNA 互补的单链寡核苷酸引物杂交，然后用反转录酶延伸这个引物。产生的 cDNA 与 RNA 模板互补且长度与引物 5' 末端和 RNA 5' 末端之间的距离相
用引物延伸法进行－RNA－的分析
实验方法原理 引物延伸法主要用于 mRNA5' 末端作图。poly (A) + RNA 先与过量 5' 末端标记的且与靶 RNA 互补的单链寡核苷酸引物杂交，然后用反转录酶延伸这个引物。产生的 cDNA 与 RNA 模板互补且长度与引物 5' 末端和 RNA 5'
用淋巴细胞分离液分离单个核细胞
用淋巴细胞分离液分离单个核细胞1）分离外周血中的单个核细胞（PBMC）1．抽取正常人静脉血加到肝素抗凝管中，加等量含5～10IU/ml肝素的无血清缓冲液悬浮细胞。将细胞悬液小心加在与血液等量的淋巴细胞分离液上，室温中，水平离心500×g 20分钟。此时离心管中形成5层：最上面是血浆，血浆层和淋巴细胞
外周血单个核细胞的分离如何进行呢
外周血中单个核细胞（淋巴细胞和单核细胞）的比重介于1.075～1.090之间，红细胞及粒细胞在1.092左右，血小板在1.030～1.035之间，因而可利用一种比重介于1.075～1.092之间而近于等渗的溶液作密度梯度离心，使一定比重的细胞按相应密度梯度分布而加以分离。 对分离介质的基本要求
RNA蛋白免疫沉淀技术简介
RIP技术（RNA Binding Protein Immunoprecipitation，RNA结合蛋白免疫沉淀），是研究细胞内RNA与蛋白结合情况的技术，是了解转录后调控网络动态过程的有力工具，能帮助我们发现miRNA的调节靶点。RIP这种新兴的技术运用针对目标蛋白的抗体把相应的RNA-蛋白复合
核糖核酸的种类核糖体RNA
核糖体RNA（rRNA）与核糖体蛋白构成一种称为核糖体的核蛋白颗粒。一个大肠杆菌中约有15000个核糖体。1.核糖体组成和结构原核生物和真核生物的核糖体都由一个大亚基和一个小亚基构成，两个亚基都由rRNA和核糖体蛋白构成。核糖体、核糖体亚基及rRNA的大小一般用沉降系数表示。2.核糖体RNA特点（1
怎样从总rna中进行mrna的分离和纯化
真核生物的mRNA分子是单顺反子，是编码蛋白质的基因转录产物。真核生物的所有蛋白质归根到底都是mRNA的翻译产物，因此，高质量mRNA的分离纯化是克隆基因、提高cDNA文库构建效率的决定性因素。哺乳动物平均每个细胞含有约1x10-5?g RNA，理论上认为每克细胞可分离出5～10mg RNA。其中
怎样从总rna中进行mrna的分离和纯化
真核生物的mRNA分子是单顺反子，是编码蛋白质的基因转录产物。真核生物的所有蛋白质归根到底都是mRNA的翻译产物，因此，高质量mRNA的分离纯化是克隆基因、提高cDNA文库构建效率的决定性因素。哺乳动物平均每个细胞含有约1x10-5?g RNA，理论上认为每克细胞可分离出5～10mg RNA。其中
怎样从总rna中进行mrna的分离和纯化
真核生物的mRNA分子是单顺反子，是编码蛋白质的基因转录产物。真核生物的所有蛋白质归根到底都是mRNA的翻译产物，因此，高质量mRNA的分离纯化是克隆基因、提高cDNA文库构建效率的决定性因素。哺乳动物平均每个细胞含有约1x10-5?g RNA，理论上认为每克细胞可分离出5～10mg RNA。其中
怎样从总rna中进行mrna的分离和纯化
真核生物的mRNA分子是单顺反子，是编码蛋白质的基因转录产物。真核生物的所有蛋白质归根到底都是mRNA的翻译产物，因此，高质量mRNA的分离纯化是克隆基因、提高cDNA文库构建效率的决定性因素。哺乳动物平均每个细胞含有约1x10-5?g RNA，理论上认为每克细胞可分离出5～10mg RNA。其中
用细胞爬进行RNA－FISH检测的实验操作
用细胞爬片进行 RNA FISH 检测的实验流程 1. 细胞在盖玻片上进行培养，细胞长好后用 CSK 缓冲液简单洗涤。 2. 细胞爬片用 4% 多聚甲醛在 4℃ 固定 10 min。 3. 用含有 0.5% TritonX-100,，10 mM VRC 的 CSKBuffer 溶液在 4℃ 处理 1
植物RNA的分离（总RNA的分离和mRNA的分离）
1. 总RNA的分离总RNA分离的方法很多，常采用的是异硫氰酸胍和b-巯基乙醇这两种RNase 抑制剂来抑制RNase的活性，同时，异硫氰酸胍与十二烷基肌氨酸钠（sarcosyl）共同作用可以破坏核蛋白复合体，使RNA顺利地解脱出来溶进缓冲液。由于RNA在碱性条件下不稳定，因而在整个提取过程中体
RNA分离与分析实验_分离RNA
实验材料标记细胞试剂、试剂盒乙酸缓冲液仪器、耗材漩涡器实验步骤1. 收获标记细胞。2. 小心处置上清液，用含 0.3% SDS 的 10 mmol/L 乙酸缓冲液悬浮细胞沉淀，每 1 ml 压积细胞用 10 ml 缓冲液。3. 于室温用漩涡器振荡裂解细胞。4. 加等体积的水饱和酚，充分混匀，于 60
RIP技术（RNA结合蛋白免疫沉淀）
RIP技术（RNA Binding Protein Immunoprecipitation，RNA结合蛋白免疫沉淀），是研究细胞内RNA与蛋白结合情况的技术，是了解转录后调控网络动态过程的有力工具，能帮助我们发现miRNA的调节靶点。RIP这种新兴的技术运用针对目标蛋白的抗体把相应的RNA-蛋白复合
RNA的免疫共沉淀分离及检测
RNA的免疫共沉淀分离及检测非编码RNA的发现使得RNA领域再次成为了生命科学研究关注的焦点。因为RNA是一种不稳定的生物大分子，绝大多数的RNA都需要与特定的RNA结合蛋白质结合形成RNA/蛋白复合物才能稳定存在于细胞中；不仅如此，RNA与RNA结合蛋白之间的动态关联贯穿和伴随了RNA的转录合成、
RNA的免疫共沉淀分离及检测
RNA的免疫共沉淀分离及检测非编码RNA的发现使得RNA领域再次成为了生命科学研究关注的焦点。因为RNA是一种不稳定的生物大分子，绝大多数的RNA都需要与特定的RNA结合蛋白质结合形成RNA/蛋白复合物才能稳定存在于细胞中；不仅如此，RNA与RNA结合蛋白之间的动态关联贯穿和伴随了RNA的转录合成、
RNA的免疫共沉淀分离及检测
RNA的免疫共沉淀分离及检测 非编码RNA的发现使得RNA领域再次成为了生命科学研究关注的焦点。因为RNA是一种不稳定的生物大分子，绝大多数的RNA都需要与特定的RNA结合蛋白质结合形成RNA/蛋白复合物才能稳定存在于细胞中；不仅如此，RNA与RNA结合蛋白之间的动态关联贯穿和伴随了RNA的转录合
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋的白质实验（二）
4、平衡 将已点样的薄膜加样面朝下，点样端置于阴极端，将膜条紧贴于电泳槽支架的盐桥上并保持平直，桥的另一端垂入缓冲液中，盐桥将膜的两端与缓冲液连通，加上槽盖平衡5min后通电电泳。5、电泳 正确联接电泳槽与整流器对应的正负极，点样侧接负极，另一侧接正极。开启电源通电。调节电压10V～15V/c
RNA分离与分析实验_用丙烯酰胺尿素凝胶纯化RNA
实验材料RNA试剂、试剂盒TBE 缓冲液丙烯酰铵溶液过硫酸铵水溶液RNA 染色液仪器、耗材玻璃板实验步骤1. 准备下列溶液：TBE 缓冲液：Tris 碱 54 g，硼酸 27.5 g，0.5 mol/L EDTA ( pH 8.0) 20 ml，溶解并加水至 1000 ml。当发现贮存液有白色沉淀
核RNA的概念
中文名称核RNA英文名称nuclear RNA定 义细胞核内的RNA。如核内不均一RNA、核小RNA、核仁小RNA等。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），核酸与基因（二级学科）
按大小分离RNA：在含有甲醛琼脂糖凝胶上进行RNA的电泳
RNA 样品经甲酰胺处理以及经含有甲醛的凝胶电泳分离可能会发生变性，这一方法是从 Lehrachetal. (1977), Goldberg (1980)，Seed (1982a）和 Rosen et al, (1990) 修改而来。RNA 在含有 2.2 mol/L 甲醛的凝胶上电泳分离。本实验来
按大小分离RNA：在含有甲醛的琼脂糖凝胶上进行的RNA的...
按大小分离RNA：在含有甲醛的琼脂糖凝胶上进行的RNA的电泳实验方法原理 RNA 样品经甲酰胺处理以及经含有甲醛的凝胶电泳分离可能会发生变性，这一方法是从 Lehrachetal. (1977), Goldberg (1980)，Seed (1982a）和 Rosen et al, (199
核糖体RNA的组成
rRNA一般与 核糖体蛋白质结合在一起，形成 核糖体（ribosome），如果把rRNA从核糖体上除掉，核糖体的结构就会发生塌陷。 原核生物的核糖体所含的rRNA有5S、16S及23S三种。S为 沉降系数（sedimentation coefficient），当用 超速离心测定一个粒子的沉淀速度
核糖体RNA的分类
原核生物的rRNA分三类：5SrRNA、16SrRNA和23SrRNA。真核生物的rRNA分四类：5SrRNA、5.8SrRNA、18SrRNA和28SrRNA。S为大分子物质在超速离心沉降中的一个物理学单位，可间接反映分子量的大小。原核生物和真核生物的核糖体均由大、小两种亚基组成。在人基因组的四种