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试剂、试剂盒 非特异性竞争 DNA液氮缓冲液 Z缓冲液 Ze 柱再生缓冲液 柱保存缓冲液仪器、耗材 EconoCoIumn 柱实验步骤 材料与设备EconoCoIumn 柱。（Bio Rad Laboratories731-1550)非特异性竞争 DNA液氮试剂缓冲液 Z缓冲液 Ze柱再生缓冲液柱保存缓冲液(配方，见“试剂的配制”，PP.131~138)操作程序下述实验是用缓冲液 Z 进行的，但用 TM 缓冲液也可得到好的结果。重要的是，应注意一些市售的 HEPES 和 PIPES 缓冲液中含有抑制蛋白质与 DNA 结合的混杂物, 因此，在某些方面，用 TM 缓冲液较为安全。有些转录因子如 SP1, 它们与 DNA 的亲和性在无 Mg2+存在时高于有 Mg2+存在时。因此，在层析缓冲液中，可能不用 Mg2+更有利一些，例如，Ze 缓冲液除不含 MgCl2，其他与缓冲液 Z 完全相同。虽然，在这里所述的操作程序中，......阅读全文
3.4.5 亲和层析的应用亲和层析的应用主要是生物大分子的分离、纯化。下面简单介绍一些亲和层析技术用于纯化各种生物大分子的情况。抗原和抗体利用抗原、抗体之间高特异的亲和力而进行分离的方法又称为免疫亲和层析。例如将抗原结合于亲和层析基质上，就可以从血清中分离其对应的抗体。在蛋白质工程菌发酵液中所需蛋白
在分离分析特别是蛋白质分离分析中，层析是相当重要、且相当常见的一种技术，其原理较为复杂，对人员的要求相对较高，这里只能做一个相对简单的介绍。 一、吸附层析 1、吸附柱层析 吸附柱层析是以固体吸附剂为固定相，以有机溶剂或缓冲液为流动相构成柱的一种层析方法。 2、薄层层析 薄层
3.4.3 亲和吸附剂选择并制备合适的亲和吸附剂是亲和层析的关键步骤之一。它包括基质和配体的选择、基质的活化、配体与基质的偶联等等。这里主要介绍一些基本的原理，关于活化、偶联等过程的具体实验操作可以参阅本书后面的实验部分或相应的参考书。基质⑴ 基质的性质基质构成固定相的骨架，亲和层析的基质应该具有以
配体与基质偶联后，通常要测定配体的结合量以了解其与基质的偶联情况，同时也可以推断亲和层析过程中对待分离的生物大分子吸附容量。配体结合量通常是用每毫升或每克基质结合的配体的量来表示。测定配体结合量的方法很多，下面简单介绍几种：1) 差量分析：根据加入配体的总量减去配体与基质偶联后洗涤出来的量即可大致推
食品中黄曲霉毒素的测定—免疫亲和层析净化高效液相色谱法和荧光光度法 1 范围本标准规定了免疫亲和层析净化—高效液相色谱法和免疫亲和层析净化—荧光光度法测定食品中黄曲霉毒素的条件和详细分析步骤。本标准适用于玉米、花生及其制品（花生酱、花生仁、花生米）、大米、小麦、植物油脂、酱油、食醋等食品中
在分离分析特别是蛋白质分离分析中，层析是相当重要、且相当常见的一种技术，其原理较为复杂，对人员的要求相对较高，这里只能做一个相对简单的介绍。 一、 吸附层析 1、 吸附柱层析 吸附柱层析是以固体吸附剂为固定相，以有机溶剂或缓冲液为流动相构成柱的一种层析方法。 2、 薄层层析
离子交换剂的总交换容量通常以每毫克或每毫升交换剂含有可解离基团的毫克当量数（meq / mg或meq / ml）来表示。通常可以由滴定法测定。阳离子交换剂首先用HCl处理，使其平衡离子为H?。再用水洗至中性，对于强酸型离子交换剂，用NaCl充分置换出H?，再用标准浓度的NaOH滴定生成的HCl，
亲和层析的原理与众所周知的抗原一抗体、激素一受体和酶一底物等特异性反应的机理相类似，每对反应物之间都有一定的亲和力。正如在酶与底物的反应中，特异的废物(S')才能和一定的酶(E)结合，产生复合物(E－S')一样。在亲和层析中是特异的配体才能和一定的生命大分子之间具有亲和力，并产生
沉淀法沉淀法也称溶解度法。其纯化生命大分子物质的基本原理是根据各种物质的结构差异性来改变溶液的某些性质，进而导致有效成分的溶解度发生变化。1、盐析法盐析法的根据是蛋白质在稀盐溶液中，溶解度会随盐浓度的增高而上升，但当盐浓度增高到一定数值时，使水活度降低，进而导致蛋白质分子表面电荷逐渐被中和，水化膜逐
所有形式的亲和层析法都需要两个组分间形成特异性相互作用，通过这种作用可以纯化其中一种组分。免疫亲和层析即利用抗原和抗体的特异性相互作用，是遵循亲和层析原理的一个分类 [综述见 Subramanian(2002)]。事实上，免疫亲和层析是免疫沉淀程序规模放大的拓展应用，不同的部分在于, 层析后需要回收
一、实验目的与原理生物大分子化合物的重要特征之一是具有与某些相对应的分子通过次级键或共价键专一结合的能力即亲和力。例如酶与抑制剂之间，抗原与抗体之间，结合的双方不仅是专一的，而且结合以后可以在不丧失生物活性的基础上用物理或化学的方法进行解离。根据这一特性，如果把具有亲和力的一对分子的某一方连接于水不
三、膜蛋白的纯化一 旦 使 用 了 合 适 的 去 污 剂 将 膜 蛋 白 从 细 胞 膜 中 増 溶 出 来 ，就 可 以 分 离 目 标 蛋 白 质 了 。传 统 色 谱 层 析 技 术 ，如 凝 胶 过 滤 、亲 和 、离 子 交 换 和 层 析 聚 焦 （chromatofocusi
分辨率： 由上式可见，Rs值越大，两种组分分离的越好。当Rs = 1时，两组分具有教好的分离，互相沾染约2%，即每种组分的纯度约为98%。当Rs=1.5时，两组分基本完全分开，每种组分的纯度可达到99.8%。如果两种组分的浓度相差较大时，尤其要求较高的分辨率。 为了提高分辨率Rs 的值，可采用以下方
5. 正相色谱与反相色谱 正相色谱是指固定相的极性高于流动相的极性，因此，在这种层析过程中非极性分子或极性小的分子比极性大的分子移动的速度快，先从柱中流出来。 反相色谱是指固定相的极性低于流动相的极性，在这种层析过程中，极性大的分子比极性小的分子移动的速度快而先从柱中流出。&
实验方法原理 剪接体 ( spliccosome ) 是真核生物中从初级转录物中切除内含子的催化单位。剪接体包含 U1、U2、U4/U6、U5 snRNP 等 4 种小核糖核蛋白颗粒（snRNP ) 和大量的非 snRNP 蛋白。实验材料 HeLa 细胞试剂、试剂盒 PBS-Earle缓冲液磷酸盐缓
实验方法原理 剪接体 ( spliccosome ) 是真核生物中从初级转录物中切除内含子的催化单位。剪接体包含 U1、U2、U4/U6、U5 snRNP 等 4 种小核糖核蛋白颗粒
1 范围本标准规定了免疫亲和层析净化—高效液相色谱法和免疫亲和层析净化—荧光光度法测定食品中黄曲霉毒素的条件和详细分析步骤。本标准适用于玉米、花生及其制品（花生酱、花生仁、花生米）、大米、小麦、植物油脂、酱油、食醋等食品中黄曲霉毒素的测定。样品中黄曲霉毒素的检出限：免疫亲和层析净化—高效液相色谱法和
实验步骤一、膜的制备从细胞或组织中分离质膜是纯化膜蛋白的第一步。由于缺少能有效分离去污剂增溶的膜蛋白的生化方法，因此在质膜成分纯化上投人一些时间会对后续步骤的结果有利。大多数膜蛋白的含量较低, 因此选择易于大量获取并能高表达目的膜蛋白的组织或细胞系就很重要。最近，人们对于将细胞表面蛋白质作为鉴定不同
剪接体 ( spliccosome ) 是真核生物中从初级转录物中切除内含子的催化单位。剪接体包含 U1、U2、U4/U6、U5 snRNP 等 4 种小核糖核蛋白颗粒（snRNP ) 和大量的非 snRNP 蛋白。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编：郑晓飞。实验方法原理剪接体 ( splicc
实验步骤 一、膜的制备 从细胞或组织中分离质膜是纯化膜蛋白的第一步。由于缺少能有效分离去污剂增溶的膜蛋白的生化方法，因此在质膜成分纯化上投人一些时间会对后续步骤的结果有利。 大多数膜蛋白的含量较低, 因此选择易于大量获取并能
摘要： 荧光分光光度法是对荧光物质进行定性和定量的有效方法。目前国家标准对于测定食品中黄曲霉毒素含量的方法以免疫亲和层析法为主，其中荧光分光光度法是一个比较常用的方法。本文依据国家标准G B/T 18979-2003《食品中黄曲霉毒素的测定 免疫亲和层析净化高效液相色谱法和荧光光度法》
纯化受体从概念上可以分成两步: 第一步用合适的去污剂将受体从膜中提取出来 (增溶）; 第二步使用如常规的亲和标签、与该受体特异结合的配体层析柱、分子排阻色谱和其他方法纯化受体。最重要的是，必须注意选择实验条件以保持膜蛋白在整个纯化过程中处于活性状态。这一点怎么强调也不过分，因为很多 GPCR—旦被去
实验步骤 一、引言 天然的整合膜蛋白的量并不充足。因此对其的结构测定和功能分析需要:①重组膜蛋白的生产系统;②能分离得到有活性的膜蛋白（而不是没有功能、折叠错误的膜蛋白）的纯化策略。表达并纯化原核和真核的膜蛋白在文献中都有报道。读者
亲和层析是利用待分离物质和它的特异性配体间具有特异的亲和力，从而达到分离目的的一类特殊层析技术。 具有专一亲和力的生物分子对主要有：抗原与抗体、DNA与互补DNA或RNA、酶与它的底物或竞争性抑制剂、激素（或药物）与它们的受体、维生素和它的特异结合蛋白、糖蛋白与它相应的植物凝集素等。可亲和的一对分子
单分散 UniMab® 特色三：等保留时间放大，装更高柱床高机械强度让UniMab可以装填更高柱床，以提高批次处理量，降低缓冲液用量，从而提高生产效率，节约生产成本和能耗。关于UniMab层析介质采用等保留时间进行工艺放大生产，可详见本公众号于2018年1月5日发布的文章《提高单抗纯化产率，只有等高
（四）亲和层析法 亲和层析是利用待分离物质和它的特异性配体间具有特异的亲和力，从而达到分离目的的一类特殊层析技术。具有专一亲和力的生物分子对主要有：抗原与抗体、DNA与互补DNA或RNA、酶与它的底物或竞争性抑制剂、激素（或药物）与它们的受体、维生素和它的特异结合蛋白、糖蛋白与它相应的植物凝集素
分离纯化某一特定蛋白质的一般程序可以分为前处理、粗分级、细分级三步。1.前处理：分离纯化某种蛋白质，首先要把蛋白质从原来的组织或细胞中以溶解的状态释放出来并保持原来的天然状态（如果做不到呢？比如蛋白以包涵体形式存在），不丢失生物活性。为此，动物材料应先提出结缔组织和脂肪组织，种子材料应先去壳甚至去种
详细阐述利用亲和层析分离蛋白质的过程，进行蛋白质分析时，需将此规模缩小至微量离心管中进行免疫沉淀过程，对于单一的蛋白质或由相同亚基组成的蛋白质，经单向凝胶电泳后检测到单一的 蛋 白 质 条 带对荧光染色法进行了阐述，它主要用于磷蛋白和糖蛋白的检测。为了确定蛋白质是否是特异性抗原，可采用相对应的抗体进
蛋白A或蛋白G微珠-抗体层析柱是免疫亲和层析技术中最常用的微珠基质之一。此类层析柱容易制备，由于抗体分子是通过Fc段与微珠基质结合，抗原结合片段（Fab）可与抗原最大限度地发生作用。以下介绍的方法可用于蛋白质抗原的纯化，但类似的方案也适用于任何其他抗原。 抗体可直接与蛋白A或蛋白G结合。根据抗
纳微不仅是世界上为数不多能够大规模生产单分散硅胶色谱填料的公司，而且还能够大规模生产多样化规格（包括多种粒径孔径等）单分散聚合物色谱填料，并且纳微多年来始终坚持创新突破，借助单分散聚合物微球作为基质，开发了多种可用于生物大分子分离纯化的层析介质，其中单分散Protein A亲和层析介质Uni