病毒感染细胞实验（二）
三、质粒DNA在大肠杆菌里转化连接上目的基因的质粒转化大肠杆菌是为了让目的基因在大肠杆菌里扩增，然后提取质粒，以下是质粒DNA在大肠杆菌里转化的三步骤。3.1大肠杆菌感受态细胞的制备1）从大肠杆菌平板上挑取一个单菌落于3mlLB培养基的试管中，37℃振荡培养过夜。2）取0.4ml菌液转接到40mlLB液体培养基中，37℃振荡培养2~3h3）菌液转移到50ml离心管中，冰上放置10min4）4℃离心10min（4000r/min）5）倒出培养液，将管口倒置以便培养液流尽6）用冰浴的0.1mol/L氯化钙10ml悬浮细胞沉淀，立即冰浴30min7）4℃离心10min（4000r/min）8）倒出上清液，用冰浴的0.1mol/L氯化钙2ml悬浮细胞（冰上放置）9）分装细胞，200ul一份，4℃保存3.2质粒DNA的转化1）取200ul新鲜制备的感受态细胞，加入质粒DNA2ul混匀，冰浴30min2）离心管放到42℃保温90s3）冰浴2......阅读全文
病毒感染细胞实验（二）
三、质粒DNA在大肠杆菌里转化连接上目的基因的质粒转化大肠杆菌是为了让目的基因在大肠杆菌里扩增，然后提取质粒，以下是质粒DNA在大肠杆菌里转化的三步骤。3.1大肠杆菌感受态细胞的制备1）从大肠杆菌平板上挑取一个单菌落于3mlLB培养基的试管中，37℃振荡培养过夜。2）取0.4ml菌液转接到40mlL
病毒感染细胞实验
病毒感染细胞实验 实验方法原理 病毒包装的原理质粒DNA为能转录出慢病毒遗传物质（RNA），但不能翻译出慢病毒的外壳及蛋白成分的载体质粒，其同时连有目的基因和
病毒感染细胞实验
病毒感染细胞实验可以用于：（1）将目的基因整合到大多数真核细胞。（2）将目的基因包装成病毒来感染细胞，从而得到表达满足实验需求。实验方法原理病毒包装的原理质粒DNA为能转录出慢病毒遗传物质（RNA），但不能翻译出慢病毒的外壳及蛋白成分的载体质粒，其同时连有目的基因和报告基因，psPAX2为能表达慢病
病毒感染细胞实验（一）
实验方法原理 一、病毒的种类病毒有很多种，常见的有慢病毒和腺病毒1.1慢病毒1.1.1原理慢病毒（Lentivirus）是逆转录病毒的一种。构建的siRNA / miRNA慢病毒载体，与化学合成的siRNA 和基于瞬时表达载体构建的普通 siRNA 载体相比，一方面可以扩增替代瞬时表达载体使
慢病毒感染目的细胞实验步骤
1. 感染预实验以 24 孔培养板为例，同时进行目的细胞和工具细胞的感染预实验。工具细胞可选择 293T（人胚肾上皮细胞）、H1299（人肺癌细胞）或其它细胞。实验材料：培养基、24 孔培养板，移液枪，枪头， EP 管，细胞计数板、冰盒、废液缸等。（根据目的细胞情况，可酌情使用 Polybrene）
有什么方法可以提高病毒感染细胞实验效率
1.提前一天细胞铺板提前一天将细胞种植在24孔板中，以感染时细胞融合度在50%左右为宜(悬浮细胞根据需要调整，不要采用过高的细胞密度)。2.感染⑴将2ul的EnvirusTM-LV用25μl无血清稀释液稀释，充分混匀，制成EnvirusTM-LV稀释液。4℃静置5分钟。注：感染悬浮细胞，建议增大En
树突细胞的分离实验（二）
1.将2 管 I m l 的 4000U /m l 胶 原 酶 D 稀 释（足够用于2 0 个脾脏）： Im l 加 入 9m l H B S S(稀 释 至 400U /m l ，步 骤 8 使用）， I m l 加 入 39m l 的 H B S S (稀 释 至 100U /ml)。置
细胞共培养实验介绍（二）
4. 实验流程简介 将40-60ul的受体细胞悬浮液种到slide中间小室，根据你的细胞类型密度控制在5-10×104cells/ml；2. 将40-60ul的饲养层细胞悬浮液种到slide的其他8个小室；3. 细胞贴壁后，移去各小室培养基，并洗脱掉未贴壁细胞，再加400-600ul培养基到大wel
细胞周期测定实验（二）
一、常见问题1. Q：要做胃粘膜组织的DNA含量及倍体检查，但取材后要等几个星期才会做流式细胞术检查，请问：胃组织要怎样保存好呢？用低温保存，还是用乙醇固定？或者固定后再低温下保存？ A：我做过乳腺细胞的DNA含量测定，取得组织以后，先处理成单细胞悬液，然后再加70%冰乙醇固定，要保证冰乙醇的最终
细胞转染实验的实验步骤第二次细胞传代
1） 在转染后24小时，观察实验结果并记录绿色荧光蛋白表达情况。2） 再次进行细胞传代，按照免疫染色合适的密度0.8X105个细胞/35mm培养皿将细胞重新放入培养皿中。3） 在正常条件下培养24小时后按照染色要求条件固定。
关于病毒感染实验诊断的实验诊断介绍
1、病毒感染实验诊断— 显微镜检查 （1）用光学显微镜直接检查病毒包涵体，作为病毒感染的初步诊断。在普通光学显微镜下，胞浆或胞核内的包涵体呈现嗜酸或嗜碱性染色，大小和数量不等。包涵体检查可作为病毒感染的辅助诊断，不是特异性试验，可配合组化染色技术进行诊断。 （2）用电子显微镜直接检查高浓度病
原代细胞基本实验技术小结（二）
D 原代细胞传代技术 一、贴壁细胞的消化法传代 1、吸除或倒掉瓶内旧培养液。 2、加入1ml左右消化液（胰蛋白酶或与EDTA混合液）轻轻摇动培养瓶，使瓶底细胞都浸入溶液中。 3、消化2-5分钟后把培养瓶放置在显微镜下进行观察，发现原贴壁的细胞逐渐趋于圆形，在还未漂起时，弃去消化液，加入培养液终止消化
二倍体细胞寿命实验
二倍体细胞( diploid cell)具有有限的增殖能力，此增殖能力决定于供体的物种与年龄，如小鼠细胞分裂约12次，鸡细胞分裂约25次，成年人成纤维细胞体外能倍增20代，胚胎成纤维细胞能倍增50代，故可采用分离的二倍体细胞观察药物对寿命的影响，由于体外细胞的衰老与体内的衰老有一定相关性，可预测
二倍体细胞寿命实验
二倍体细胞( diploid cell)具有有限的增殖能力，此增殖能力决定于供体的物种与年龄，如小鼠细胞分裂约12次，鸡细胞分裂约25次，成年人成纤维细胞体外能倍增20代，胚胎成纤维细胞能倍增50代，故可采用分离的二倍体细胞观察药物对寿命的影响，由于体外细胞的衰老与体内的衰老有一定相关性，可预测
病毒感染的实验室诊断
四、特异性抗体的检测特异性抗体的检测病毒感染后通常诱发针对病毒一种或多种抗原免疫应答，特异性抗体效价升高或lgM抗体出现有辅助临床诊断的价值。(一)补体结合试验(CF) CF分二个阶段：1.抗原与抗体(一个为已知，一个为待检)混合，加入定量补体，若抗原与抗体相对应，则补体被消耗；2.在上述混合物
昆虫细胞高MOI杆病毒感染
高MOI（ Multiplicity Of Infection，等于用于感染的病毒数目与细胞数目的比值）感染是生产蛋白的最好方法。这有两个原因。一是不用考虑DIP（Defective Interfering Particles，即只包装入部分基因组的病毒颗粒）的形成，因为关心的是细胞或者培养液中的蛋
巨细胞病毒感染诊断方案
巨细胞病毒感染诊断方案 中华医学会儿科学分会感染消化学组 (1998年11月，湖北宜昌) 巨细胞病毒感染( cytomegalovirus infection )是由人巨细胞病毒( human cytomegalovirus，CMV )引起的人类感染性疾病。CMV感染
Science揭开致命病毒感染细胞之谜
由来自荷兰癌症研究所、哈佛医学院、德国基尔大学和美国陆军传染病医学研究所(USAMRIID)的科学家们组成的一个国际研究小组，阐明了在西非流行的一种致命病毒：沙拉沙病毒（lassa virus）感染细胞的机制，他们发现拉沙病毒利用了出乎意料的两步过程来进入细胞。发表在《科学》（Science）杂
细胞培养常用设备及实验技巧（二）
细胞的复苏 细胞复苏的原则——快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。具体操作 一、实验前准备：1.将水浴锅预热至37℃。2.用75%酒精擦拭紫外线照射30min的超净工作台台面。3.在超净工作
流式细胞仪实验方法（二）
第二部分 细胞因子 细胞内细胞因子的流式细胞仪检测 一、简介随着研究的进展，仅仅对细胞进行定量和活性的检测已不能满足需要。在单细胞水平研究细胞因子的表达能力对研究细胞因子在疾病中的作用越来越显的重要无比。目前检测单个细胞特定细胞因子的表达手段包括：ELIspot、原位杂交、免疫细胞化学、限制
诱导多能干细胞毒性实验（二）
Figure 3. 化合物IC50值由曲线拟合给出采用SoftMax Pro软件的曲线拟合功能，确定四种不同的化合物的IC50值。神经元神经元的毒性体现在数量减少或神经突触的长度减少上(甚至存在于不影响细胞的数量或存活力的情况下)。通过成像实验不仅可以检测神经元细胞的主体，同时还可以检测神经元细胞的
细胞融合实验——聚乙二醇法
实验方法原理细胞融合的诱导物种类很多．常用的主要有灭活的仙台病毒(Sendai virus)，聚乙二醇(Polyethyleneglycol，PEG)和电脉冲。目前应用最广泛的是聚乙二醇，因为它易得、简便，且融合效果稳定。PEG的促融机制尚不完全清楚，它可能引起细胞膜中磷脂的酰键及极性基团发生结构重
关于病毒感染实验诊断的基本介绍
于病毒感染实验诊断，病毒是一类非细胞型微生物，由一个核酸长链和蛋白质外壳构成，个体极小，可通过细菌滤器，需用电子显微镜才可观察到。病毒仅含一种核酸作为遗传物质，没有代谢系统和酶只能在活细胞内寄生，以复制的方式进行增殖。人体各组织器官均可被病毒感染，所致疾病见于全身各个系统。由于病毒感染所致疾病临
巨细胞病毒感染症的概述
巨细胞病毒感染症是由巨细胞病毒（CMV）引起的先天性或后天性感染。感染巨细胞病毒后的临床表现和转归与个体的免疫功能状态密切相关。免疫功能正常者因密切接触感染者的分泌物感染人巨细胞病毒，多表现为隐性感染，部分为单核细胞增多症样表现。免疫功能缺陷者因输血（血液制品）或器官移植等感染CMV或CMV再活
如何治疗巨细胞病毒感染？
1.可应用各种抗病毒制剂如更昔洛韦、抗巨细胞病毒的免疫球蛋白制剂、干扰素及转移因子等。 2.丙氧鸟苷有防止CMV扩散作用。如与高滴度抗CMV免疫球蛋白合用，可降低骨髓移植的CMV肺炎并发症死亡率。 3.要注意对症治疗和护理工作，隔离病儿，对其排泄物要进行消毒。
巨细胞病毒感染的基本介绍
巨细胞病毒感染症是由巨细胞病毒（CMV）引起的先天性或后天性感染。感染巨细胞病毒后的临床表现和转归与个体的免疫功能状态密切相关。免疫功能正常者因密切接触感染者的分泌物感染人巨细胞病毒，多表现为隐性感染，部分为单核细胞增多症样表现。免疫功能缺陷者因输血（血液制品）或器官移植等感染CMV或CMV再活
巨细胞病毒感染症的介绍
巨细胞病毒感染症是由巨细胞病毒（CMV）引起的先天性或后天性感染。感染巨细胞病毒后的临床表现和转归与个体的免疫功能状态密切相关。免疫功能正常者因密切接触感染者的分泌物感染人巨细胞病毒，多表现为隐性感染，部分为单核细胞增多症样表现。免疫功能缺陷者因输血（血液制品）或器官移植等感染CMV或CMV再活
昆虫细胞的低MOI杆病毒感染
感染悬浮细胞是使杆病毒系统生产蛋白的普遍方法。悬浮培养的细胞很容易从10ml扩大到100L。一般来说，悬浮的细胞在无血清的培养液中培养。这种培养液许多公司有售，比如Life Technologies、Hyclone、Biowhitaker、JRH Biosciences、Expression Sys
巨细胞病毒感染症的病因
由CMV引起的先天性或后天性感染，CMV是双链DNA病毒，属于疱疹病毒群，仅在人与人间传播，其形态与其他疱疹病毒相似，对宿主或组织培养细胞有明显的种属特异性，人类CMV仅能在人胚纤维母细胞中分离、培养。1.传染源患者和不显性感染者可长期或间歇从唾液、泪液、宫颈分泌物、尿液、精液、粪便、血液或乳汁
巨细胞病毒感染症的诊断
1.不能以其他病因解释的慢性肝病或迁延性间质性肺炎；2.临床类似传染性单核细胞增多症，但抗EB病毒衣壳抗原的嗜异凝集试验阴性，往往发生于手术（尤其开心手术）后接受大量新鲜血者；3.接受免疫抑制剂治疗的慢性消耗性疾病患者（如白血病恶性肿瘤）、接受器官移植的受者，如发生较严重的肺炎，往往是CMV感染