药用植物过氧化物酶同工酶分析及活性比较实验
实验方法原理 不同种乃至不同变种的生物不但外部形态有变异,由于结构基因的差别,其表达产物酶和蛋白质也必然存在着一定的差别。所以同工酶分析作为一种遗传分析手段已广泛应用于品种资源调查、杂交子代测定、种子纯度鉴定等农林业各个领域,在指导生产方面发挥了很大的作用。此外,同工酶分析对研究不同产地、不同种属生物间的亲源关系和开发利用药物植物资源方面也有积极的意义。实验材料 愈创木酚试剂、试剂盒 联苯胺 冰乙酸 乙酸钠 硫酸锰 过氧化氢 TMEM 过硫酸铵 琼脂仪器、耗材 电泳仪 垂直板电泳槽 微量加样器 烧杯 试管 长滴管 平皿实验步骤 1.样品液制备:取材料茎部1 g加两倍冷纯净水,在冰箱预先冷却的研钵中充分研成匀浆,然后离心(3500 r/ min,20 min),加等体积甘油和少许溴酚蓝指示剂即可。 2.凝胶制备(按“常规聚丙烯酰胺凝胶电泳”),加样量40μl/孔,电压180 V,电泳时间2.5~3 h。 3.染......阅读全文
尿有形成份分析实验方法的比较
尿沉渣分析或称尿有形成份分析或进一步称为尿颗粒计数是尿液分析不可缺少而重要的内容。在临床上对肾疾病,泌尿道疾病,循环系,感染等全身疾病有重要诊断和鉴别作用。曾被美国著名的DahelenFree称为“体外的肾活检”。 目前国内实验室虽已认识它的不可缺少作用,但因设备不同、人员素质不同,要求及检查
植物过氧化物酶测定
实验概要本文介绍了植物过氧化物酶同工酶测定的基本原理及操作步骤等。实验原理聚丙烯酰胺凝胶由丙烯酰胺和交联剂甲叉双丙烯酰胺在催化剂作用下聚合而成,具有三维网状结构,其网孔大小可由凝胶浓度和交联度加以调节。凝胶电泳兼有电荷效应和分子筛效应。被分离物质由于所载电荷数量、分子大小和形状的差异,因此在电泳时产
雷帕霉素生物活性及实验方法
雷帕霉素是一种特异性的mTOR抑制剂,IC50为0.1nMIn Vitro:雷帕霉素抑制HEK293细胞内源性mTOR活性,IC50为0.1 nM,比iRap和AP21967更有效,IC50分别为5 nM和10 nM [1]。 雷帕霉素通过诱导自噬发挥其对恶性神经胶质瘤细胞的抗肿瘤作用,并且
报道基因活性的同位素分析实验——CAT活性的层析分析法
报告基因 是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因,也就是说,是一个其表达产物非常容易被鉴定的基因。把它的编码序列和基因表达调节序列相融合形成嵌合基因,或与其它目的基因相融合,在调控序列控制下进行表达,从而利用它的表达产物来标定目的基因的表达调控,筛选得到转化体。实验材料DNA试剂、试剂盒PBS乙酸乙酯
植物同工酶技术
一、实验原理 同工酶(isozymes)是指作用于底物相似或完全相同的酶的不同分子形式,即催化同一种反应而结构不同的一族酶。它们是受遗传体系决定的酶的不同分子形式。利用凝胶电泳技术可以将它们分开,用专一的作用底物和特殊染料,把需要分析的酶染色,在胶柱上呈现同工酶谱。 二、
过氧化物酶同工酶聚丙烯酰胺凝胶电泳2
3、不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理系统的不连续性表现在以下几个方面:(1)凝胶板由上、下两层胶组成,两层凝胶的孔径不同。上层为大孔径的浓缩胶,下层为小孔径的分离胶。 浓缩胶:又称堆积胶。凝胶浓度较小,孔径相对较大。把较稀的样品加在浓缩胶上,经过大孔径凝胶的迁移作用二被浓缩在一个狭窄的区带,使样品
过氧化物酶活性的测定就有哪些方法
冷热水测定实验48过氧化物酶活性的测定(比色法)过氧化物酶是植物体内普遍存在的、活性较高的一种酶,它与呼吸作用、光合作用及生长素的氧化等都有
过氧化物酶活性测定的方法有哪些
实验48过氧化物酶活性的测定(比色法)过氧化物酶是植物体内普遍存在的、活性较高的一种酶,它与呼吸作用、光合作用及生长素的氧化等都有密切关系,在植物生长发育过程中,它的活性不断发生变化,因此测量这种酶,可以反映某一时期植物体内代谢的变化。一、原理在有过氧化氢存在下,过氧化物酶能使愈创木酚氧化,生成茶褐
过氧化物酶活性的测定(比色法)
原理 过氧化物酶广泛分布于植物的各个组织器官中。在有过氧化氢存在下,过氧化物酶能使愈创木酚氧化,生成茶褐色物质,可用分光光度计测量生成物的含量。 仪器药品 721型分光光度计 离心机 秒表 天平 研钵
过氧化物酶活性的测定就有哪些方法
实验 48 过氧化物酶活性的测定(比色法)过氧化物酶是植物体内普遍存在的、活性较高的一种酶,它与呼吸作用、光合作用及生长素的氧化等都有密切关系,在植物生长发育过程中,它的活性不断发生变化,因此测量这种酶,可以反映某一时期植物体内代谢的变化.一、原理在有过氧化氢存在下,过氧化物酶能使愈创木酚氧化,生成
辣根过氧化物酶的简介和用途
辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase, HRP),是临床检验试剂中的常用酶。该产品不但广泛用于多个生化检测项目,也广泛运用于免疫类(ELISA)试剂盒。过氧化物酶作为多个试剂盒显色体系的关键成分,对试剂盒的质量有重要影响。 辣根过氧化物酶(Horseradish Per
过氧化物酶体的分离和分析实验
从大鼠肝脏中分离过氧化物酶体 从豚鼠小肠黏膜中分离微过氧化物酶体 蛋白质及标志酶的分析 实验材料 肝脏
过氧化物酶体的分离和分析实验
从大鼠肝脏中分离过氧化物酶体从豚鼠小肠黏膜中分离微过氧化物酶体蛋白质及标志酶的分析实验材料肝脏 试剂、试剂盒乙醚
过氧化物酶体的分离和分析实验
实验材料 肝脏试剂、试剂盒 乙醚蔗糖TESNa4EDTAPMSF亮抑酶肽仪器、耗材 聚四氟乙烯研杵实验步骤 1. 用乙醚或其他麻醉剂使麻醉,采用断头法处死。2. 迅速取出肝脏,称重,置于冰上的重铝箔上使之迅速冰冷。3. 用剪刀将肝脏组织剪成碎片并转移到一只冰冷的 Potter-EIvjhem 匀浆器
报道基因活性的同位素分析实验——CAT活性的相抽提分析法
实验材料转染细胞试剂、试剂盒氯霉素Tris·ClTMPD二甲苯仪器、耗材离心机离心管培养箱实验步骤一、来源于哺乳动物细胞1. 按“CAT活性的层析分析法”中的步骤1~5的冻融法,制备哺乳动物细胞提取物。如果用胰蛋白酶消化或制细胞方法来收集细胞,则将原位裂解法的步骤1至4用以下的步骤2至4代替。 2
非同位素分析报道基因活性实验
实验材料 转染细胞试剂、试剂盒 PBS荧光素贮液Triton甘氨酰甘氨酸仪器、耗材 橡胶细胞刮子绘图仪比色杯实验步骤 1. 用冰冷的PBS洗涤在3个60 mm 培养皿中的转染了荧光素酶表达质粒的细胞各3次, 毎次用4 ml PBS洗后吸去洗液。 2. 每个培养皿中加入350 μl Trito
非同位素分析报道基因活性实验
萤火虫荧光素酶法 冻融裂解的细胞的荧光素酶分析 β-半乳糖苷酶报道基因的化学发光分析 实验材料 转染细胞
报道基因活性的同位素分析实验
CAT活性的层析分析法 原位裂解细胞的CAT分析法 CAT活性的相-抽提分析法 人生长激素的放射免疫分析法 实验材料
报道基因活性的同位素分析实验
实验材料 DNA试剂、试剂盒 PBS乙酸乙酯氯仿甲醇Tris·Cl仪器、耗材 薄层层析缸滤纸离心管离心机实验步骤 1. 100 mm 培养皿中的转染了CAT表达质粒的贴壁细胞,用PBS洗两次,每次5 ml每培养皿加入1 ml TEN溶液。将细胞置于冰浴5 min。 2. 用橡胶细胞刮子将细胞从培
尿有形成分分析实验方法的比较
尿沉渣分析(或称尿有形成分分析、或进一步称为尿颗粒计数)是尿液分析中不可缺少的重要内容,在临床上对肾脏疾病、泌尿道疾病、循环系统疾病以及感染性疾病等,有重要的诊断和鉴别作用,曾被美国著名的Dahelen Free称为“体外的肾活检”。目前,国内实验室虽已认识到它的作用,但因设备和人员素质等的
尿有形成分分析实验方法的比较
尿沉渣分析(或称尿有形成分分析、或进一步称为尿颗粒计数)是尿液分析中不可缺少的重要内容,在临床上对肾脏疾病、泌尿道疾病、循环系统疾病以及感染性疾病等,有重要的诊断和鉴别作用,曾被美国著名的Dahelen Free称为“体外的肾活检”。目前,国内实验室虽已认识到它的作用,但因设备和人员素质等的
尿有形成分分析实验方法的比较
尿沉渣分析(或称尿有形成分分析、或进一步称为尿颗粒计数)是尿液分析中不可缺少的重要内容,在临床上对肾脏疾病、泌尿道疾病、循环系统疾病以及感染性疾病等,有重要的诊断和鉴别作用,曾被美国著名的Dahelen Free称为“体外的肾活检”。目前,国内实验室虽已认识到它的作用,但因设备和人员素质等的不同,各
酶活性测定实验
实验方法原理U/L=K•ΔA/min实验步骤1. 诱导试剂.2. 开机预温达37度.3. 选取测定程序.4. 测试:加入试剂准确计的30秒后测定读取吸光度.以后每隔30秒测定一次.5. 实验结果:计算ΔA/min求出测定结果.
酶活性测定实验
实验方法原理U/L=K•ΔA/min实验步骤1. 诱导试剂.2. 开机预温达37度.3. 选取测定程序.4. 测试:加入试剂准确计的30秒后测定读取吸光度.以后每隔30秒测定一次.5. 实验结果:计算ΔA/min求出测定结果.
免疫学实验比较
免疫学三大工具,免疫组化、Western、ELISA,分别用于定位,定性和定量。 IHC(免疫组化Immunohistochemistry)是融合了免疫学原理(抗原抗体特异性结合)和组织学技术(组织的取材、固定、包埋、切片、脱蜡、水化等),通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、
胰岛素受体的溶解及活性测定实验
试剂、试剂盒纯化的鼠肝质膜牛血清白蛋白[125I] 胰岛素猪胰岛素牛γ-球蛋白聚乙二醇 6000溶液 B溶液 C结合缓冲液仪器、耗材Ti 70 转头和带盖的聚丙烯离心管实验步骤材料与设备纯化的鼠肝质膜(得自实验 1)Ti 70 转头和带盖的聚丙烯离心管牛血清白蛋白(BSA,1%)[125I] 胰岛素
胰岛素受体的溶解及活性测定实验
胰岛素受体的溶解及活性测定实验 试剂、试剂盒 纯化的鼠肝质膜 牛血清白蛋白 [125I]
胰岛素受体的溶解及活性测定实验
试剂、试剂盒 纯化的鼠肝质膜牛血清白蛋白 [125I] 胰岛素猪胰岛素牛γ-球蛋白聚乙二醇 6000溶液 B 溶液 C 结合缓冲液仪器、耗材 Ti 70 转头和带盖的聚丙烯离心管实验步骤 材料与设备纯化的鼠肝质膜(得自实验 1)Ti 70 转头和带盖的聚丙烯离心管牛血清白蛋白(BSA,1%)[125
成熟中性粒细胞过氧化物酶活性的变化
①活性增高:可见于再生障碍性贫血、感染(特别是化脓菌感染)、急性淋巴细胞白血病和慢性淋巴细胞白血病。 ②活性减低:可见于急性粒细胞白血病、慢性粒细胞白血病、急性单核细胞白血病、骨髓增生异常综合征、放射病及退化性中性粒细胞。
过氧化物酶体的分离和分析实验1
从大鼠肝脏中分离过氧化物酶体实验材料肝脏试剂、试剂盒乙醚蔗糖TESNa4EDTAPMSF亮抑酶肽仪器、耗材聚四氟乙烯研杵实验步骤1. 用乙醚或其他麻醉剂使麻醉,采用断头法处死。2. 迅速取出肝脏,称重,置于冰上的重铝箔上使之迅速冰冷。3. 用剪刀将肝脏组织剪成碎片并转移到一只冰冷的 Potter-E