多肽荧光标记——FITC修饰和AMC修饰

荧光标记所依赖的化合物称为荧光物质。荧光物质是指具有共轭双键体系化学结构的化合物,受到紫外光或蓝紫光照射时,可激发成为激发态,当从激发态恢复基态时,发出荧光。荧光标记技术指利用荧光物质共价结合或物理吸附在所要研究分子的某个基团上,利用它的荧光特性来提供被研究对象的信息。荧光标记的无放射物污染,操作简便等优点,使得荧光标记物在许多研究领域的应用日趋广泛。 荧光标记物质在蛋白的功能研究、药物筛选等领域也有着广泛的应用。人们利用利用荧光标记的多肽来检测目标蛋白的活性,并将其发展的高通量活性筛选方法应用于疾病治疗靶点蛋白的药物筛选和药物开发(例如,各种激酶、磷酸酶、肽酶等)。因此,多肽的荧光修饰,同样是多肽合成领域的重要内容。 下面是一些常用的多肽修饰荧光物质: 下面是一些荧光物质的激发光波长和发射光波长 1.FITC修饰 异硫氰酸荧光素(FITC)具有比较高的活性,通常来说,在固相合成过程中引入该种荧......阅读全文

多肽荧光标记——FITC修饰和AMC修饰

  荧光标记所依赖的化合物称为荧光物质。荧光物质是指具有共轭双键体系化学结构的化合物,受到紫外光或蓝紫光照射时,可激发成为激发态,当从激发态恢复基态时,发出荧光。荧光标记技术指利用荧光物质共价结合或物理吸附在所要研究分子的某个基团上,利用它的荧光特性来提供被研究对象的信息。荧光标记的无放射物污染,操

多肽荧光标记——FITC修饰和AMC修饰

  荧光标记所依赖的化合物称为荧光物质。荧光物质是指具有共轭双键体系化学结构的化合物,受到紫外光或蓝紫光照射时,可激发成为激发态,当从激发态恢复基态时,发出荧光。荧光标记技术指利用荧光物质共价结合或物理吸附在所要研究分子的某个基团上,利用它的荧光特性来提供被研究对象的信息。荧光标记的无放射物污染,操

多肽荧光标记——FITC修饰和AMC修饰(一)

荧光标记所依赖的化合物称为荧光物质。荧光物质是指具有共轭双键体系化学结构的化合物,受到紫外光或蓝紫光照射时,可激发成为激发态,当从激发态恢复基态时,发出荧光。荧光标记技术指利用荧光物质共价结合或物理吸附在所要研究分子的某个基团上,利用它的荧光特性来提供被研究对象的信息。荧光标记的无放射物污染,操作简

多肽荧光标记——FITC修饰和AMC修饰(二)

(2)在整条肽中的某个Lys侧链接入FITC,Lys侧链为末端为-NH2的四碳直链烷基,直接起到了降低空间位阻的作用。这种修饰方式能够灵活的在整条肽中任何位置进行FITC修饰,而不仅仅局限于末端。我们所采用的FITC修饰多肽的两种形式,都具有操作简便,成功率高,容易分离纯化等优点。2.AMC修饰7-

RGD环肽,AMC(香豆素)修饰多肽

1. RGD环肽简介在了解RGD肽之前,我们先简单介绍一下整合素,整合素即整联蛋白,是一类介导哺乳动物细胞黏附与信号转导的异二聚体跨膜糖蛋白受体,由α和β亚单位组成,参与包括细胞迁移、细胞侵袭、细胞和细胞间的信号传导、细胞黏附及血管新生过程等多种细胞活动的调节,其中对整合素αvβ3的研究最为广泛。整

FITCAMC等荧光标记技术

荧光标记所依赖的化合物称为荧光物质。荧光物质是指具有共轭双键体系化学结构的化合物,受到紫外光或蓝紫光照射时,可激发成为激发态,当从激发态恢复基态时,发出荧光。荧光标记技术指利用荧光物质共价结合或物理吸附在所要研究分子的某个基团上,利用它的荧光特性来提供被研究对象的信息。荧光标记的无放射物污染,操作简

荧光标记肽技术常用的多肽修饰荧光物质

荧光标记所依赖的化合物称为荧光物质。荧光物质是指具有共轭双键体系化学结构的化合物,受到紫外光或蓝紫光照射时,可激发成为激发态,当从激发态恢复基态时,发出荧光。荧光标记技术指利用荧光物质共价结合或物理吸附在所要研究分子的某个基团上,利用它的荧光特性来提供被研究对象的信息。荧光标记的无放射物污染,操作简

多肽合成与修饰技术

实验技术:多肽 合成是一个固相合成顺序一般从C端(羧基端)向 N端(氨基端)合成。过去的多肽合成是在溶液中进行的称为液相合成法。从1963年Merrifield发展成功了固相多肽合成方法以来,经过不断的改进 和完善,到今天固相法已成为多肽和蛋白质合成中的一个常用技术,表现出了经典液相合成

多肽修饰合成常用策略(二)

4、豆蔻酰化和棕榈酰化用脂肪酸酰化N末端可以让多肽或蛋白质与细胞膜结合。N末端上豆蔻酰化的序列可以使Src家族的蛋白激酶和逆转录酶Gaq蛋白靶向结合细胞膜。利用标准的偶联反应即可将豆蔻酸连接到树脂-多肽的N末端,生成的脂肽可在标准条件下解离并通过RP-HPLC纯化。5、糖基化糖肽类如万古霉素和替考拉

多肽修饰合成常用策略(一)

多肽是由多个氨基酸通过肽键连接而形成的一类化合物,普遍存在于生物体内,迄今在生物体内发现的多肽已达数万种。多肽在调节机体各系统、器官、组织和细胞的功能活动以及在生命活动中发挥重要作用,并且常被应用于功能分析、抗体研究、药物研发等领域。随着生物技术与多肽合成技术的日臻成熟,越来越多的多肽药物被开发并应

糖肽多肽糖基化修饰

通过化学键将单糖(如葡萄糖、半乳糖)或者多糖连接到多肽上的过程,我们将其称之为多肽糖基化修饰,通过糖基化修饰后得到的多肽,我们称之为糖肽(Glycopeptides);糖肽对膜蛋白功能常常有很重要的影响,对特异的生物学功能起介导作用,比如:对细胞具有保护、稳定、组织及屏障等多方面作用;可作为外源性受

荧光素FITC标记抗体的方法

当FITC在碱性溶液中与抗体蛋白反应时,主要是蛋白质上赖氨酸的r氨基与荧光素的硫碳胺键(thiocarbmide)结合,形成FITC-蛋白质结合物,即荧光抗体或荧光结合物。一个IgG分子中有86个赖氨酸残基,一般zui多能结合15~20个,一个IgG分子可结合2~8个分子的FITC,其反应式如下FI

磷酸化多肽及其修饰方法

蛋白质磷酸化是生物界最普遍,也是最重要的一种蛋白质翻译后修饰,20世纪50年代以来一直被生物学家看作是一种动态的生物调节过程。在细胞中,大概有1/3的的蛋白质被认为是通过磷酸化修饰的。蛋白质的磷酸化修饰与多种生物学过程密切相关,如DNA损伤修复、转录调节、信号传导、细胞凋亡的调节等。磷酸化蛋白质及多

磷酸化多肽及其修饰方法

  蛋白质磷酸化是生物界最普遍,也是最重要的一种蛋白质翻译后修饰,20世纪50年代以来一直被生物学家看作是一种动态的生物调节过程。在细胞中,大概有1/3的的蛋白质被认为是通过磷酸化修饰的。蛋白质的磷酸化修饰与多种生物学过程密切相关,如DNA损伤修复、转录调节、信号传导、细胞凋亡的调节等。磷酸化蛋白质

磷酸化多肽及其修饰方法

  蛋白质磷酸化是生物界最普遍,也是最重要的一种蛋白质翻译后修饰,20世纪50年代以来一直被生物学家看作是一种动态的生物调节过程。在细胞中,大概有1/3的的蛋白质被认为是通过磷酸化修饰的。蛋白质的磷酸化修饰与多种生物学过程密切相关,如DNA损伤修复、转录调节、信号传导、细胞凋亡的调节等。磷酸化蛋白质

多肽PEG聚乙二醇修饰

PEG修饰,即聚乙二醇修饰,又称聚环氧乙烷修饰,是将PEG通过化学方法偶联到蛋白质或多肽分子上,从而提升多肽活性的一种方法。自Davies 1977年用PEG 修饰牛血清白蛋白以来, PEG修饰技术广泛应用于多种蛋白质和多肽的化学修饰。 PEG修饰具有延长半衰期、降低或消失免疫原性、减少毒副作用以及

常用多肽修饰方法及过程综述

多肽是一种由两个或多个氨基酸通过肽键(酰胺键)连接而形成的化合物。多肽在调节机体各系统、器官、组织和细胞的功能活动以及在生命活动中发挥重要作用,并且常被应用于功能分析、抗体研究、药物研发等领域。而通过对多肽进行修饰进而改变多肽的理化性质也是多肽研究中一种常用的手段。多肽修饰种类繁多,从修饰位点不同则

FITC荧光素标记抗体的操作步骤

当FITC在碱性溶液中与抗体蛋白反应时,主要是蛋白质上赖氨酸的r氨基与荧光素的硫碳胺键(thiocarbmide)结合,形成FITC-蛋白质结合物,即荧光抗体或荧光结合物。一个IgG分子中有86个赖氨酸残基,一般zui多能结合15~20个,一个IgG分子可结合2~8个分子的FITC,其反应式如下:F

多肽磷酸化修饰及检测方法

磷酸化影响着细胞生命的方方面面。在细胞中,大概有1/3的的蛋白质被认为是通过磷酸化修饰的。蛋白质的磷酸化修饰与多种生物学过程密切相关,如DNA损伤修复、转录调节、信号传导、细胞凋亡的调节等。磷酸化蛋白质及多肽的研究可以帮助人们阐述上述过程的机理,进一步认识生命活动的本质。肽谷生物依据自身原料优势和技

定制多肽、氨基酸和蛋白等表面修饰脂质体

主动靶向药物传递是指利用特定的生物过程如特异性的配体-受体识别和相互作用来提高特定部位的药物浓度。主动靶向系统以抗体、多肽、糖类、维生素、糖蛋白等作为配体与靶细胞受体进行专属性作用。其中多肽分子是机体内一类重要的生物活性物质。具有良好的生物相容性、靶向性、无免疫原性、低毒性等优点将其作为配体应用于靶

载体蛋白(KLH,BSA,OVA)偶联多肽修饰简介

肽-载体蛋白偶联多用于制备抗多肽类抗体,单独的多肽通常太小不足以激起充分的免疫反应,而带有很多抗原表位的载体蛋白有利于刺激辅助性T细胞,进一步诱导B细胞免疫反应。请记住,免疫系统是将肽-蛋白作为一个整体来激起免疫反应的,因而产生的抗体中有针对多肽的,有针对链接剂的,也有针对载体蛋白的。 其中最常见的

新蛋白质交联抗体的标记和修饰使用方法

介绍现在的研究中,一个大生物分子与另一个大分子的共价结合,如抗体与酶或酶与DNA的共价结合,仍是研究人员实验中的重点之一。其中有几种方法可用于交联两个生物分子。一种常见的方法是使用一种小分子交联剂(如Sulfo-SMCC)。SMCC的一端有胺反应性NHS酯基与蛋白质的游离胺(-NH2)反应,另一端有

多肽FRET荧光标记技术

荧光标记所依赖的化合物称为荧光物质。荧光物质是指具有共轭双键体系化学结构的化合物,受到紫外光或蓝紫光照射时,可激发成为激发态,当从激发态恢复基态时,发出荧光。荧光标记技术指利用荧光物质共价结合或物理吸附在所要研究分子的某个基团上,利用它的荧光特性来提供被研究对象的信息。荧光标记的无放射物污染,操作简

FITC标记抗体Marsshall氏法

材料:抗体球蛋白溶液、0.5mol/L pH9.0碳酸盐缓冲液、无菌生理盐水、异硫氰酸荧光素、1%硫柳汞水溶液、三角烧瓶(25—50ml)、冰及冰槽(或1000ml烧杯)、电磁搅拌器、灭菌吸管、透析袋、玻璃棒、棉线及烧杯(500ml)、pH7.2或8.0的0.01mol/L PBS等; 方法

FITC标记抗体Chadwick氏法

试剂:抗体球蛋白溶液、异硫氰酸荧光素、3%重碳酸钠水溶液、pH8.0的0.01mol/L PBS、1%硫柳汞; 材料:离心机及离心管、三角烧瓶(25ml)、冰槽、无菌吸管及毛细滴管、透析袋、玻璃棒、棉线及烧杯(500ml)等; 方法与步骤:1.       抗体的准备。用0—4℃ pH8.0的PBS

FITC标记抗体Marsshall氏法

材料:抗体球蛋白溶液、0.5mol/L pH9.0碳酸盐缓冲液、无菌生理盐水、异硫氰酸荧光素、1%硫柳汞水溶液、三角烧瓶(25—50ml)、冰及冰槽(或1000ml烧杯)、电磁搅拌器、灭菌吸管、透析袋、玻璃棒、棉线及烧杯(500ml)、pH7.2或8.0的0.01mol/L 等;方法与步骤:

FITC标记抗体Chadwick氏法

FITC标记抗体-Chadwick氏法试剂:抗体球蛋白溶液、异硫氰酸荧光素、3%重碳酸钠水溶液、pH8.0的0.01mol/L 、1%硫柳汞;材料:离心机及离心管、三角烧瓶(25ml)、冰槽、无菌吸管及毛细滴管、透析袋、玻璃棒、棉线及烧杯(500ml)等;方法与步骤:抗体的准备。用0—4℃ pH8.

FITC标记抗体改良法

FITC标记抗体-改良法 试剂: 1.0.01mol/L pH7.2 配方。将NaCl 18g、Na2HPO4 1.15g、KH2PO4 0.2g, 溶于2000ml三蒸水中,调整pH至7.2; 2.0.5mol/L pH9.0碳酸盐缓冲液配法。量取0.5mol/L Na2CO3(5

PEG修饰及其修饰GLP1的意义

PEG修饰是一个使多肽或蛋白质在治疗或生物技术方面的效力得以提高的重要过程。当PEG以适当的方式连接在蛋白质或多肽上时,它能改变许多的特征,而主要的生物活性功能,如酶活性或特异结合位点,可以保留下来。PEG修饰通过如下几种途径改善药物的性能。首先,PEG连接在蛋白质或多肽的表面上,提高了它的分子大小

关于多肽链的一级结构加工修饰介绍

  ⑴N端甲酰蛋氨酸或蛋氨酸的切除:N端甲酰蛋氨酸是多肽链合成的起始氨基酸,必须在多肽链折迭成一定的空间结构之前被切除。  其过程是:  ① 去甲酰化;  ② 去蛋氨酰基。  ⑵氨基酸的修饰:由专一性的酶催化进行修饰,包括糖基化、羟基化、磷酸化、甲酰化等。  ⑶二硫键的形成:由专一性的氧化酶催化,将