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水稻叶片和根蛋白质的纳升级二维液相色谱串联...（二）

3.5 二维纳升级高效液相色谱分离肽段柱切换分离是一种在线分离方法，通过 HPLC 缓冲液连续洗脱双相柱，使洗脱液进入质谱仪，以确保在上样、盐洗脱和冲洗柱的过程中不丢失样品。第一相根据电荷性质分离肽段，第二相是根据疏水特性分离肽段。( 1 ) 将 10 μl 样品注入 10 μl 自动进样环中，完成将肽段加载到强阳离子（SCX ) 柱床上（见注释 5) 。a. 用 5% 缓冲液 B 以 10 μl/min 的流速注入进样环，将肽段推入自动进样环中，这个过程大约需要 25 min。b. 然后将液流速度降至 400 nl/min，注入 35 min，将样品全部推入，并冲洗柱子。c. 通过阳离子交换介质的任何肽段将结合到反相介质上，任何通过这两个树脂介质的肽段都将在质谱仪中被检测和破碎，全部的运行时间大约需要 70 min。( 2 ) 用 5%~50% 的缓冲液 B 以 400 nl/min 的速度反相梯度洗脱 60 min。然后......阅读全文