知识分享：基因定点突变
实验原理 基因定点突变是指通过聚合酶链式反应（PCR）等方法改变目的基因的序列，包括碱基的插入、缺失、点突变等。基因定点突变是基因研究中比较常用的方法，可以短时间内研究目的DNA所表达的目的蛋白的性状及表征。 定点突变需要设计特定的突变引物。引物长度一般为25-45 bp，建议选择30-35bp长度的引物p。引物至少要11-12个bp才能与模板搭上，而这种突变PCR要求引物两边都能与模板搭上，所以引物的两边各设至少12个bp。以要突变的位点碱基为中心，加上两边11-12 bp的序列。若两边引物太短了，很可能会造成突变实验失败。同时需要设计一条反向互补的引物。为保证PCR反应正常进行，引物设计完成后需计算Tm值，若Tm值不合适，可以适量调整引物长度。 实验材料 PCR引物，质粒或者基因组模板，PCR Buffer，PCR用高保真酶，ddH2O。 实验过程 1、PCR扩增 30 μL P......阅读全文
知识分享：基因定点突变
实验原理 基因定点突变是指通过聚合酶链式反应（PCR）等方法改变目的基因的序列，包括碱基的插入、缺失、点突变等。基因定点突变是基因研究中比较常用的方法，可以短时间内研究目的DNA所表达的目的蛋白的性状及表征。 定点突变需要设计特定的突变引物。引物长度一般为25-45 bp，建议选择3
基因定点突变知识
实验原理基因定点突变是指通过聚合酶链式反应（PCR）等方法改变目的基因的序列，包括碱基的插入、缺失、点突变等。基因定点突变是基因研究中比较常用的方法，可以短时间内研究目的DNA所表达的目的蛋白的性状及表征。定点突变需要设计特定的突变引物。引物长度一般为25-45 bp，建议选择30-35bp长度
基因定点突变step－by－step
本贴先讲最简单的一个点的定点突变技术，其它较长片段的突变，删除，插入技术以后会慢慢奉上：在做实验之前，我们首先要搞清楚实验的目的和实验的原理。实验的目的应该比较明确吧：就是要把自己的基因上面的一个碱基换成另外一个碱基。一般情况下我们会有几种可能使我们需要这样去做：第一：我们吊出来的基因有点突变，相信
基因定点突变step－by－step
本贴先讲最简单的一个点的定点突变技术，其它较长片段的突变，删除，插入技术以后会慢慢奉上：在做实验之前，我们首先要搞清楚实验的目的和实验的原理。实验的目的应该比较明确吧：就是要把自己的基因上面的一个碱基换成另外一个碱基。一般情况下我们会有几种可能使我们需要这样去做：第一：我们吊出来的基因有点突变，相信
基因定点突变step－by－step
本文先讲最简单的一个点的定点突变技术，其它较长片段的突变，删除，插入技术以后会慢慢奉上： 在做实验之前，我们首先要搞清楚实验的目的和实验的原理。 实验的目的应该比较明确吧：就是要把自己的基因上面的一个碱基换成另外一个碱基。一般情况下我们会有几种可能使我们需要这样去做： 第一 我们吊出来的基因有点突变
知识分享：肿瘤相关基因
癌基因（英语：Oncogene，亦称为致癌基因）是细胞遗传物质的一部分, 它们参与细胞从正常生长状态到肿瘤的过程。它们通过诱导或突变被激活。 致癌基因 原癌基因是参与细胞生长、细胞分裂和细胞分化的正常基因。但当其发生突变后，就会变成致癌基因。它们会在诸如放射性物质，化学物
DNA定点突变实验
DNA定点突变可用于：（1）研究蛋白质相互作用位点的结构、改造酶的不同活性或者动力学特性；（2）改造启动子或者DNA作用元件；（3）提高蛋白的抗原性或者是稳定性、活性、研究蛋白的晶体结构，以及药物研发、基因治疗等等方面。实验方法原理定点突变是指通过聚合酶链式反应（PCR）等方法向目的DNA片段（可以
DNA定点突变实验
DNA定点突变实验 实验方法原理 定点突变是指通过聚合酶链式反应（PCR）等方法向目的DNA片段（可以是基因组，也可以是质粒）中引入所需变化（通常是表征有利方
DNA定点突变实验
实验方法原理 定点突变是指通过聚合酶链式反应（PCR）等方法向目的DNA片段（可以是基因组，也可以是质粒）中引入所需变化（通常是表征有利方向的变化），包括碱基的添加、删除、点突变等。单点突变的原理是从常规E.coli中经纯化试剂盒(Miniprep)或者氯化铯纯化抽提得到质粒。设计一对包含突变位点的
定点突变技术——从单点突变到多点突变
体外定点突变技术是研究蛋白质结构和功能之间的复杂关系的有力工具，也是我们在实验室中改造/优化基因常用的手段。蛋白质的结构决定其功能，二者之间的关系是蛋白质组研究的重点之一。对某个已知基因的特定碱基进行定点改变、缺失或者插入，可以改变对应的氨基酸序列和蛋白质结构，对突变基因的表达产物进行研究有助于我
定点突变技术：从单点突变到多点突变
体外定点突变技术是研究蛋白质结构和功能之间的复杂关系的有力工具，也是我们在实验室中改造/优化基因常用的手段。蛋白质的结构决定其功能，二者之间的关系是蛋白质组 研究的重点之一。对某个已知基因的特定碱基进行定点改变、缺失或者插入，可以改变对应的氨基酸序列和蛋白质结构，对突变基因的表达产物进行研究
定点突变技术――从单点突变到多点突变
体外定点突变技术是研究蛋白质结构和功能之间的复杂关系的有力工具，也是我们在实验室中改造/优化基因常用的手段。蛋白质的结构决定其功能，二者之间的关系是蛋白质组 研究的重点之一。对某个已知基因的特定碱基进行定点改变、缺失或者插入，可以改变对应的氨基酸序列和蛋白质结构，对突变基因的表达产物进行研究有助于我
快速－PCR－定点突变实验
这种 PCR-SDM 方法的要点包括如下几个方面。1. 使用的模板浓度有所增加，这样就可以减少循环数，因此减少了非特异产物扩增的可能性。2. 加入了 Taq Extender, 扩增较长的 PCR 产物时产量和可靠性都有所提高。3. 使用 Dpm I 限制性内切酶，降低了母本分子的数量。4. 使用
快速－PCR－定点突变实验
实验方法原理 这种 PCR-SDM 方法的要点包括如下几个方面。1. 使用的模板浓度有所增加，这样就可以减少循环数，因此减少了非特异产物扩增的可能性。2. 加入了 Taq Extender, 扩增较长的 PCR 产物时产量和可靠性都有
快速－PCR－定点突变实验
这种 PCR-SDM 方法的要点包括如下几个方面。1. 使用的模板浓度有所增加，这样就可以减少循环数，因此减少了非特异产物扩增的可能性。2.加入了 Taq Extender, 扩增较长的 PCR 产物时产量和可靠性都有所提高。3. 使用 Dpm I 限制性内切酶，降低了母本分子的数量。4. 使用 P
快速－PCR－定点突变实验
试剂、试剂盒 ATPdNTP 溶液SDM 缓冲液Taq DNA 聚合酶克隆化的 Pfu DNA 聚合酶Taq Extender PCR 添加剂Dpn I 限制性内切酶T4 DNA 连接酶模板 DNAdsDNA 质粒LB 琼脂平板仪器、耗材 FALCON 2059 管子或替代物热循环仪水浴或适当的加热
知识分享：教你辨析标记基因和报告基因
一、标记基因和报告基因的概念 标记基因(marker gene)，是一种已知功能或已知序列的基因，能够起着特异性标记的作用。标记基因是选择标记基因的简称，是指其编码产物能够使转化的细胞、组织具有对抗生素等的抗性，或者使转化细胞、组织具有代谢的优越性。在培养基中加入抗生素等选择试剂的条件
知识分享：动物细胞基因组DNA提取
实验原理 真核生物的DNA是以染色体的形式存在于细胞核内，制备DNA将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离，同时保持DNA分子的完整。提取DNA的过程是指将分散好的组织细胞在含SDS（十二烷基硫酸钠）和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质，再用酚和氯仿/异戊醇抽提分离蛋白质，得到的DNA溶液经乙醇沉
射频知识分享：调试篇
导语射频产品设计，在经历前期的器件选型，原理图绘制，LAYOUT相关阻抗控制等一系列工作后，当第一版样机出来之后，射频指标的调试，也是整个射频产品开发中比较重要的一个环节。射频指标调试，是基于射频产品开发初期，我们在开发方案射频指标理论值估算的基础上，通过调试让实际测试指标更接近我们理论值，从而实现
定点诱变实验——利用PCR引物点突变
实验材料DNA试剂、试剂盒DNA聚合酶klenow限制性内切酶仪器、耗材水浴锅离心机培养箱实验步骤1. 制备模板（见基本方案，步骤1和2） 2. 合成和纯化寡核苷酸引物并对5‘端磷酸化。 3. 扩增模板DNA（基本方案，步骤4和5），在最后一次延伸结束后，加5 U 的klenow酶，30℃保温
变频串联谐振设备知识分享
串联谐振变压器优点1、所需电源容量大大减小。串联谐振电源是利用谐振电抗器和被试品电容谐振产生高电压和大电流的，在整个系统中，电源只需要提供系统中有功消耗的部分，因此，试验所需的电源功率只有试验容量的1/Q.2、设备的重量和体积大大减少。串联谐振电源中，不但省去了笨重的大功率调压装置和普通的大功率工频
恒温摇床基础知识分享
恒温摇床具有不锈钢万用夹具、数显控温、无极调速和良好的热循环功能，是一种多用途的生化器，是植物、生物、微生物、遗传、病毒、环保、医学等科研，教育和生产部门作精密培养制备不可缺少的实验室设备，适用于各大中院校、油化工、卫生防疫、环境监测等科研部门作为生生、生化、细胞、菌种等各种液态、固态化合物的振荡
知识分享：质粒提取实验步骤
实验原理 现在较常用的质粒提取方法有三种:碱裂解法、煮沸法和去污剂裂解法，前两种方法较为剧烈，适用于较小的质粒（＜15Kb），而去污剂裂解法则比较温合，一般用于分子量较大的质粒（＞15Kb）。 碱裂解法是一种最广泛使用的制备质粒DNA的方法。其原理为：染色体DNA远大于质粒DNA，且
消化炉知识经验点分享
很多人只知道凯氏定氮仪，对消化炉却没有太多的了解，最终出现测定结果不准确、误差等一系列问题。因此在利用专业仪器开展试验前，我们必须熟知仪器本身及配套设备的构造原理及操作注意事项。消化炉也不例外，它是为加速样品消化煮解时间，提高蛋白质测定速度的理想仪器。它还能将消化管内溢出的有害气体，经过抽气
单晶培养科研实验知识分享
好多同学/老师一直培养不出单晶，或者周期太长了，希望这个分享能得到一些帮助。单晶培养的方法多种多样，如升华法、共结晶法等。最简单的最实用常用的有1.溶剂缓慢挥发法；2.液相扩散法；3.气相扩散法。99％的单晶是用以上三种方法培养出来的。一、单晶培养要点 1、一般以10--25mg 为佳，如果你只有2
恒温摇床基础知识分享
恒温摇床具有不锈钢万用夹具、数显控温、无极调速和良好的热循环功能，是一种多用途的生化器，是植物、生物、微生物、遗传、病毒、环保、医学等科研，教育和生产部门作精密培养制备不可缺少的实验室设备，适用于各大中院校、油化工、卫生防疫、环境监测等科研部门作为生生、生化、细胞、菌种等各种液态、固态化合物的振荡培
遗传发育所在水稻中建立基因定点替换及定点插入体系
CRISPR/Cas9技术在生命科学领域掀起了一场全新的技术革命，该技术已经广泛应用于包括农作物在内的各种生物体的基因组编辑。科学工作者利用该技术，创造了大量的植物内源基因功能缺失的突变体，为植物的功能基因组学研究和应用研究做出了巨大的贡献。然而对植物内源基因进行更为精确地修饰，如基因定点替换以
Nature－Methods：大规模定点突变的新方法
定点突变是序列-功能研究中不可或缺的工具。然而，传统的方法能力有限。华盛顿大学的研究人员开发出一种新方法，能够以大规模并行的方式开展单个氨基酸的定点突变。这项成果于1月5日发表在《Nature Methods》杂志上。 目前的定点突变方法能力有限，每次只能靶定几个碱基，且操作繁琐，成本高昂。为
关于基因定点诱变的概述
对于任何一种遗传学研究，尤其是有关基因的结构与功能的分析，突变都是最基本的手段。经典的方法是，应用能够修饰DNA分子的化学诱变剂或物理诱变剂处理生物体。此类诱变方法虽然已得到了广泛的应用，获得了大量的突变体，但亦存在着诸多的不便之处。 第一、经受诱变剂处理的生物体，它的任何基因都有可能发生突变
密度计的小知识分享
1.密度计应满足的技术条件： a.光源的辐射函数（相对辐射分布）s（λ）； b.传感器的相对光谱灵敏度s（λ）r； c.滤光片的光谱透射率τ（λ）； d.测量的几何条件和测量块的大小； e.读数的精确性和显示的线性； f.被测样本的光谱反射参数；