浅谈Elisa实验操作中关于操作技术的影响

操作过程的控制:⑴ 严格按照试剂说明书进行操作。操作前将试剂在室温下平衡30~60min。⑵ 加样后及时放人孵箱。标本较多时,要分批操作。按说明步骤严格控制操作时间,防止孵育时间人为延长,导致非特异性结合紧附于反应孔周围,难以清洗彻底。(3)封板温育时,各孔一定要封严,防止阳性标本的液体蒸发,产生周边现象从而导致“花板”的出现。(4)用洗板机洗板时,保证洗液注满各孔,洗板针畅通,洗完板后在吸水纸(选择干净、无或少尘的吸水材料)上轻轻拍干:还要防止针口有纤维蛋白或异物,这些异物在洗板的过程中易产生拖带现象而导致“花板”的出现。(5)合理安排检测量,以免反应板过多造成洗板等待时间长。(6)加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。(7)显色剂尽量在临用前配制,坚持不用过期显色剂,肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用。(8)加样时保持显色剂不外流;A、B液应避免接触金属器械。加终止液时应避免产生气泡。(9)应保证C清洁,整个操作过程中保证酶......阅读全文

ELISA的操作要点(二)

六、显色和比色(一) 显色显色是ELISA中的最后一步温育反应,此时酶催化无色的底物生成有色的产物。反应的温度和时间仍是影响显色的因素。在一定时间内,阴性孔可保持无色,而阳性孔则随时间的延长而呈色加强。适当提高温度有助于加速显色进行。在定量测定中,加入底物后的反应温度和时间应按规定力求准确。定性测定

ELISA操作要点(一)

优质的试剂,良好的仪器和正确的操作是保证ELISA检测结果准确可靠的必要条件。1 标本的采取和保存可用作ELISA测定的标本十分广泛,体液、分泌物和排泄物)等均可作标本以测定其中某种抗体或抗原成份。有些标本可直接进行测定(如血清、尿液),有些则需经预处理(如粪便和某些分泌物)。大部分ELISA检测均

ELISA操作要点(一)

1 标本的采取和保存 可用作ELISA测定的标本十分广泛,体液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、粪便)等均可作标本以测定其中某种抗体或抗原成份。有些标本可直接进行测定(如血清、尿液),有些则需经预处理(如粪便和某些分泌物)。大部分ELISA检测均以血清为标本。血浆中除尚含有纤维蛋白原和抗凝

ELISA操作要点(二)

6 显色和比色6.1 显色  显色是ELISA中的最后一步温育反应,此时酶催化无色的底物生成有色的产物。反应的温度和时间仍是影响显色的因素。在一定时间内,阴性孔可保持无色,而阳性孔则随时间的延长而呈色加强。适当提高温度有助于加速显色进行。在定量测定中,加入底物后的反应温度和时间应按规定力求准确。定性

细胞ELISA操作步骤

Cellular ELISA ProtocolFormalin Fixed Cell Plates1. Trypsinize confluent flasks2. Pool and count cells3. Centrifuge at 1500 rpm for 10 minutes4. Resus

ELISA操作要点(二)

6 显色和比色 (1) 显色显色是ELISA中的最后一步温育反应,此时酶催化无色的底物生成有色的产物。反应的温度和时间仍是影响显色的因素。在一定时间内,阴性孔可保持无色,而阳性孔则随时间的延长而呈色加强。适当提高温度有助于加速显色进行。在定量测定中,加入底物后的反应温度和时间应按规定力求准确。定性测

人ELISA试剂盒实验操作中须注意的一些细节

ELISA试剂盒的使用已经日益频繁,ELISA检测试剂盒使用方法也是很简单的,但是很多用户还是反应,在试验的时候会遇到一些问题。下面,我们就来简单介绍下人ELISA试剂盒实验操作中须注意的一些细节:1、要在实验前1小时将试剂盒从冰箱中取出,使各种试剂都恢复到室温,以使结果更稳定。2、液体全部加完后,

ELISA试剂盒实验操作程序总结

实验开始前,各试剂均应平衡至室温(试剂不能直接在37℃溶解);试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量,如样品浓度过高时,应对样品进行稀释,以使稀释后的样品符合elisa试剂盒的检测范围,计算时再乘以相应的稀释倍数。加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释

浅谈“宫腔镜”手术操作及技巧

目前,在妇科病的诊治方法中,宫腔镜手术已经是被广泛应用,其具有创伤小、恢复快、住院时间短、患者易接受等优点,成为妇科手术的四大基本技能之一。现根据自己的临床实践,浅谈一下腹腔镜的手术操作及技巧问题。 一、宫腔镜的基本操作: 1、机械分离:主要是使用微型剪刀对粘连组织、中隔组织进行切断及分离。 2、电

细胞融合技术的实验操作

人、鼠细胞融合实验分三步进行∶首先用荧光染料标记抗体∶将小鼠的抗体与发绿色荧光的荧光素(fluorescin)结合,人的抗体与发红色荧光的罗丹明(rhodamine)结合;第二步是将小鼠细胞和人细胞在灭活的仙台病毒的诱导下进行融合;最后一步将标记的抗体加入到融合的人、鼠细胞中,让这些标记抗体同融合细

动物实验的基本操作技术1

实验动物实验动物(experimental animals)是指经过人工饲养、繁育,对其携带的微生物及寄生虫实行控制,遗传背景明确或者来源清楚,应用于科研、教学、生产和检定以及其他科学实验的动物。这些个体具有较好的遗传均一性、对外来刺激的敏感性和实验再现性。一、常用实验动物的种类和特点(一)狗(do

动物实验的基本操作技术2

5.非纯系动物(no-sheer series)一般是指任意交配繁殖的杂种动物。此类动物具有生命力旺盛、适应性强、繁殖率高、生长快、易于饲养管理等优点。其缺点是个体差异大、反应性不规则、实验结果的重复性差。由于其中包含有最敏感的与最不敏感的两种极端的个体,因此适用于筛选性实验。杂种动物比较经济、教学

高灵敏ELISA试剂盒操作步骤中的忌讳

  ELISA试剂盒实验中每一个步骤都尤为重要,细节不容忽视,它是实验成功的关键与否;在这   里本司为方便各位了解,更好的完成实验,特对高灵敏ELISA试剂盒操作步骤中的忌讳做出以   下分析,供大家参考:   1、吸取液体时速度不易太快,以免产生气泡,吸取的量不够准确。

高灵敏ELISA试剂盒操作步骤中的忌讳

   elisa试剂盒实验中每一个步骤都尤为重要,细节不容忽视,它是实验成功的关键与否;在这里本司为方便各位了解,更好的完成实验,特对高灵敏ELISA试剂盒操作步骤中的忌讳做出以下分析,供大家参考:     1.吸取液体时速度不易太快,以免产生气泡,吸取的量不够准确。     2.手工洗板时每次加入

ELISA的概念、原理、操作步骤

ELISA是酶联接免疫吸附剂测定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称。它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。此项技术自70年代初问世以来,发展十分迅速,目前已被广泛用于生物学和医学科学的许多领域。   (一) 原理  ELISA是以免

间接ELISA的操作程序

    本法主要用于检测抗体。以鸭病毒性肝炎(DVH)抗体的ELISA为例,间接ELISA的操作程序如下:  ⑴ 材料  ① 包被液、洗涤液、保温液、底物液、终止液;  ② DVH包被抗原、酶标抗抗体、阴性及阳性DVH参考血清;待检鸭血清;  ③ ELISA检测仪、加样器、聚苯乙烯微量板。  ⑵ 方

阻断ELISA的操作程序

本法主要用于检测型特异性抗体。该方法现已成为猪传染性胃肠炎(TGE)、猪伪狂犬病(PR)及猪胸膜肺炎(AP)的主要检测方法。下面以AP2型抗体的阻断ELISA检测法为例介绍其操作程序:① 100μl AP2型工作量抗原包被 → 4℃过夜,洗涤三次、抛干② 用200μl阻断缓冲液进行封闭 → 37℃

ELISA的概念、原理、操作步骤

  ELISA是酶联接免疫吸附剂测定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称。它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。此项技术自70年代初问世以来,发展十分迅速,目前已被广泛用于生物学和医学科学的许多领域。   (一) 原理  ELISA是

ELISA的概念、原理、操作步骤

ELISA是酶联接免疫吸附剂测定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称。它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。此项技术自70年代初问世以来,发展十分迅速,目前已被广泛用于生物学和医学科学的许多领域。(一) 原理ELISA是以免疫学反应为

进口elisa试剂盒实验操作时的小技巧

掌握elisa试剂盒的相关操作技巧,不但有助于提高试验的效率,还可确保实验的成功,以下是进口elisa试剂盒实验操作时的小技巧,希望能够为新手提供帮助!1、标准品的稀释与加样2、加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液

酶联免疫吸附测定实验(ELISA)的操作流程

  Elisa 操作流程(以人IL-4 ELISA KIT为例):  检测原理:  本实验采用双抗体夹心ELISA法。抗人IL-4单抗包被于酶标板上,标本和标准品中的IL-4会 与单抗结合,游离的成分被洗去。加入生物素化的抗人IL-4抗体和辣根过氧化物酶标记的亲 和素。生物素与亲和素特异性结合;抗人

如何正确进行ELISA操作?

临床ELISA测定现通常为采用手工操作的以微孔板条为固相的测定模式,测定操作非常简单,一般涉及到标本的收集保存、试剂准备、加样、温育、洗板、显色、比色、结果判断和结果报告及解释等方面,其中任一步骤的不当都会影响测定结果,且尤以加样、温育和洗板等步骤为甚。现分述如下。一、临床标本的收集和保存用于ELI

怎样正确进行ELISA操作?

一、临床标本的收集和保存 用于ELISA测定的临床标本最为常用的是血清(浆),有时因为特定的检测目的,也用到唾液、脑脊液、尿液、粪便等标本。目前临床上使用血清标本测定的标志物一般有传染性病原体的抗原和抗体、肿瘤标志物、激素、特种蛋白、细胞因子和治疗药物等。对用于激素和治疗药物测定的血清标本的收集,要

怎样正确进行ELISA操作?

怎样正确进行ELISA操作一、临床标本的收集和保存   用于ELISA测定的临床标本最为常用的是血清(浆),有时因为特定的检测目的,也用到唾液、脑脊液、尿液、粪便等标本。目前临床上使用血清标本测定的标志物一般有传染性病原体的抗原和抗体、肿瘤标志物、激素、特种蛋白、细胞因子和治疗药物等。对用于激素和治

浅谈智能集菌仪操作说明

 浅谈智能集菌仪操作说明  供试品通过智能集菌仪的定向蠕动加压作用,实施正压过滤器并在滤器内进行培养,以检验供试品是否含菌。  供试品通过进样管道连续被注入集菌培养器中,利用集菌培养器内形成的下压,通过微孔滤膜过滤,供试品中可能存在的微生物被截留收集在滤膜上,通过冲洗滤膜除去供试品的抑菌成分。然后把

生物技术常用实验操作简介

   一、总RNA的提取(Trizol法提取)  在收集到生物材料之后,最好能即刻进行RNA制备工作。若需暂时储存,则应以液氮将生物材料急速冷冻后,储存于-80℃冷冻柜。在制备RNA时,将储存于冷冻柜的材料取出,立即以加入液氮研磨的方式打破细胞,不可以先行解冻,以避免RNase的作用。  1.  提

实验动物外科基本操作技术

1. 切开根据实验要求确定手术部位切口的大小。切开时先绷紧皮肤,将刀刃与皮肤垂直,用力要得当,1 次切开皮肤全层,切缝整齐而不偏斜。切开皮肤及皮下组织时,要求按解剖层次切开,尽量避开血管并注意止血,避免损伤深层的重要组织器官。2. 止血止血是手术操作中的重要环节。手术过程中止血完善与否,不仅直接影响

浅析操作方式的影响

操作方式的影响■取墨样胶印油墨表层因氧化而结膜,取墨时应先除去表面干皮,取四个位置的墨,使之具有代表性。将所取的油墨在玻璃板上调动15次,往返为一次。取其中的一小部分,例如0.3ml各用。■用六号油稀释根据该墨的流动度,确定加油量。应注意的是不要把油一次全加进去,随加随调,将墨调匀。如果一次全加入会

逆流色谱法实验操作及影响因素

  实验操作  在进行分离纯化时,首先将固定相充满于色谱柱,而后色谱柱即围绕自身轴进行自转;同时围绕设备中心轴进行高速公转(即行星式运动),再将流动相泵入色谱柱。在此之前,首先选择预先平衡好的两相溶剂中的一相为固定相,并将其充满螺旋管柱,然后使螺旋管柱在一定的转速下高速旋转,同时以一定的流速将流动相

关于银镜反应的反应的实验操作

  1.实验前使用热的氢氧化钠溶液清洗试管,再用蒸馏水清洗。  2.取一支试管,加4~6滴酒石酸钾钠溶液和1ml蒸馏水,再加10滴甲酸钠溶液,振荡后加8~10滴银氨溶液,溶液呈淡棕色,再滴入1~2滴浓氨水,振荡后溶液变成无色。在50~70℃水浴中加热约30~40秒即有银镜生成。  3.在试管中加入3