基因的PCR扩增实验原理、实验材料和操作步骤

实验原理单链DNA在互补寡聚核苷酸片段的引导下,可以利用DNA聚合酶按5’→3’方向复制出互补DNA。这时单链DNA称为模板DNA,寡聚核苷酸片段称为引物(Primer),合成的互补DNA称为产物DNA。双链DNA分子经高温变性后成为两条单链DNA,它们都可作为单链模板DNA,在相应的引物引导下,用DNA聚合酶复制出产物DNA。PCR反应应用以上的基本过程,分别在待复制的已知序列DNA分子两端各设计一条引物,其中在DNA5’端的引物(Pl)对应于上链DNA单链的序列,3’端的引物(P2)对应于下链DNA单链的序列,Pl和P2按5’→3’方向相向配置。在含有引物、DNA合成底物dNTPs(dATP、dCTP、dGTP、dTTP四种脱氧核糖核苷酸等摩尔数混合物)的缓冲液中,通过高温变性,使双链DNA变成单链DNA模板,降低温度复性,使引物与模板DNA配对,利用DNA聚合酶便可合成产物DNA。引物和dNTPs过量,则在同一反应体系中可......阅读全文

基因的PCR扩增实验原理、实验材料和操作步骤

实验原理单链DNA在互补寡聚核苷酸片段的引导下,可以利用DNA聚合酶按5’→3’方向复制出互补DNA。这时单链DNA称为模板DNA,寡聚核苷酸片段称为引物(Primer),合成的互补DNA称为产物DNA。双链DNA分子经高温变性后成为两条单链DNA,它们都可作为单链模板DNA,在相应的引物引导下,用

PCR扩增DNA(PCR-Amplify-DNA)实验原理、材料和操作步骤

【实验原理】聚合酶链反应(polymerasechainreaction,PCR)是一种体外 DNA扩增技术,1985年由Mullis等人创立。该技术能在几小时的实验操作中,将人为选定的一段DNA扩增几百万倍,具有灵敏度高、特异性强、操作简便和应用广泛等优点,目前已成为分子生物学及基因工程中极为

PCR扩增分离目的DNA片段实验原理、材料和步骤

PCR扩增法实验材料 DNA 模板 试剂、试剂盒 电泳缓冲液 加样缓冲液 溴化乙锭溶液 琼脂糖 TaqDNA 多聚酶 5′反应缓冲液

PCR扩增分离目的DNA片段实验原理、材料和步骤

PCR(Polymerase Chain Reaction)即聚合酶链式反应是1986 年由Kallis Mullis 发现。这项技术已广泛地应用于分子生物学各个领域,它不仅可用于基因分离克隆和核酸序列分析,还可用于突变体和重组体的构建,基因表达调控的研究,基因多态性的分析,遗传病和传染病诊断,肿瘤

PCR扩增分离目的DNA片段实验原理、材料和步骤

一、目的了解多聚合酶链反应DNA 扩增技术的基本原理和实验应用,掌握PCR反应基本技术。二、原理PCR(Polymerase Chain Reaction)即聚合酶链式反应是1986 年由Kallis Mullis 发现。这项技术已广泛地应用于分子生物学各个领域,它不仅可用于基因分离克隆和核

PCR扩增分离目的DNA片段实验原理、材料和步骤(二)

三、材料(一)仪器与器皿PRC 扩增仪(PE2400),琼脂糖凝胶电泳设备,微量取样器,一次性指形管,凝胶成像仪,玻片(二)试剂与材料1.琼脂糖凝胶电泳试剂1)电泳缓冲液:Tris—乙酸0.04mol/L PH8.0  0.002mol/L EDTA2)加样缓冲液:0.25%溴酚兰40% w/v蔗糖

PCR扩增分离目的DNA片段实验原理、材料和步骤(一)

一、目的了解多聚合酶链反应DNA 扩增技术的基本原理和实验应用,掌握PCR反应基本技术。二、原理PCR(Polymerase Chain Reaction)即聚合酶链式反应是1986 年由Kallis Mullis发现。这项技术已广泛地应用于分子生物学各个领域,它不仅可用于基因分离克隆和核酸

PCR基因扩增仪实验原理

技术应用实现快速高效均衡扩增检测由光开关阵列、自聚焦透镜和尾纤准直器及变增益微光O/E装置组成的MEMS有机整体,在以16位单片机为核心的电控装置管理下,能在毫秒级时间内完成多个标本快速均衡扫描检测,避免了机械扫描方式或CCD扫描方式引起的时间滞后或渐晕误差。实现标准样本的PCR热循环扩增及高通量实

PCR基因扩增原理、材料和方法

一、原理多聚酶链式反应(polymerase chain reaction , PCR)类似于DNA 的天然复制过程:经过变性、退火、延伸多次循环(图1 ) , DNA 扩增倍数可达2 n 倍。即Y = ( 1 + X ) n式中,Y 为DNA 扩增倍数;X 为扩增效率;n 为循环次数二、材料(1)

PCRSSCP实验原理和操作步骤

【实验目的】1.了解PCR-SSCP技术的原理。2.了解并熟悉PCR-SSCP技术的步骤。 【实验原理】 PCR-SSCP是1989年日本Orita等创建的筛查突变的新技术。它是一种简单、快速、经济的点突变筛查手段。PCR-SSCP技术的基本原理是PCR扩增后的DNA片段经变性成单链DNA,

PCRDGGE实验原理和操作步骤

【实验目的】 1.了解PCR-DGGE技术的原理。 2.了解并熟悉PCR-DGGE技术的步骤。 【实验原理】 变性梯度凝胶电泳(DGGE)是一种根据DNA片段的熔解性质而使之分离的凝胶系统。核酸的双螺旋结构在一定条件下可以解链,称之为变性。核酸50%发生变性时的温度称为熔解温度(Tm

PCR扩增的原理和操作步骤-有哪些

  PCR技术的基本原理 类似于DNA的 天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。   PCR是一种体外DNA 扩增技术,是在模板DNA、引物和4种脱氧核苷酸存在的条件下,依赖于DNA聚合酶的酶促合反应,将待扩增的DNA片段与其两侧互补的寡核苷酸链引物经“高温变性——低温退火—

PCR基因扩增实验

[实验目的]通过本实验学习PCR反应的基本原理与实验技术。[实验原理]多聚酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)的原理类似于DNA的天然复制过程。在待扩增的DNA片段两侧和与其两侧互补的两个寡核苷酸引物,经变性、退火和延伸若干个循环后,DNA扩增2n倍。1.变性:加

pcr扩增的原理和步骤

实验方法原理①模板DNA的变性:模板DNA经加热至94℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应做准备;②模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;③

pcr扩增的原理和步骤

实验方法原理①模板DNA的变性:模板DNA经加热至94℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应做准备;②模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;③

pcr扩增的原理和步骤

实验方法原理①模板DNA的变性:模板DNA经加热至94℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应做准备;②模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;③

pcr扩增的原理和步骤

实验方法原理①模板DNA的变性:模板DNA经加热至94℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应做准备;②模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;③

pcr扩增的原理和步骤

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实验方法原理①模板DNA的变性:模板DNA经加热至94℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应做准备;②模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;③

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实验方法原理①模板DNA的变性:模板DNA经加热至94℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应做准备;②模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;③

PCR扩增的原理和步骤

PCR技术的基本原理 类似于DNA的 天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR是一种体外DNA 扩增技术,是在模板DNA、引物和4种脱氧核苷酸存在的条件下,依赖于DNA聚合酶的酶促合反应,将待扩增的DNA片段与其两侧互补的寡核苷酸链引物经“高温变性——低温退火——引物PCR

pcr扩增的原理和步骤

PCR(Polymerasechain reaction,聚合酶链式反应)是模拟体内DNA复制过程,对特定DNA序列进行大量扩增的一种技术。 PCR反应是以4种dNTP为底物,引物引导,DNA聚合酶催化作用下,在单链DNA模板3’末端开始进行互补链的延伸,多次反复的扩增使特定DNA序列以指数增加。我

pcr扩增的原理和步骤

实验方法原理①模板DNA的变性:模板DNA经加热至94℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应做准备;②模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;③

pcr扩增的原理和步骤

实验方法原理①模板DNA的变性:模板DNA经加热至94℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应做准备;②模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;③

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实验方法原理①模板DNA的变性:模板DNA经加热至94℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应做准备;②模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;③

PCR扩增的原理和步骤

PCR技术的基本原理 类似于DNA的 天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR是一种体外DNA 扩增技术,是在模板DNA、引物和4种脱氧核苷酸存在的条件下,依赖于DNA聚合酶的酶促合反应,将待扩增的DNA片段与其两侧互补的寡核苷酸链引物经“高温变性——低温退火——引物PCR

pcr扩增的原理和步骤

实验方法原理①模板DNA的变性:模板DNA经加热至94℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应做准备;②模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;③

PCR扩增的原理和步骤

PCR技术的基本原理 类似于DNA的 天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物.PCR是一种体外DNA 扩增技术,是在模板DNA、引物和4种脱氧核苷酸存在的条件下,依赖于DNA聚合酶的酶促合反应,将待扩增的DNA片段与其两侧互补的寡核苷酸链引物经“高温变性——低温退火——引物PCR

pcr扩增的原理和步骤

PCR扩增是以单链DNA为模板,4种脱氧核糖核苷酸为底物,在模板末端有引物存在的情况下,用酶进行互补链的延伸,多次反复的循环能使微量的模板DNA得到极大程度的扩增。反应时先溶液加热,使模板DNA在高温下变性,双链解开为单链状态;然后降低溶液温度,使合成引物在低温下与其靶序列配对,形成部分双链,称为退