真核细胞总RNA的分离提取
RNA是基因表达产物，由以下几类分子组成，rRNA（占细胞总RNA的80%～85%）、tRNA和核内小分子RNA（占10～15%）、mRNA（占1～5%）。其中mRNA是分子生物学的主要研究对象，分离制备mRNA是克隆基因，分析基因表达以及建立cDNA文库的首要步骤。真核细胞总RNA分离提取的目的是要获得高纯度的具有充分长度的RNA分子，包括RNA的纯度和完整性。RNA分离的关键是尽量减少RNA酶的污染。RNA酶活性非常稳定，分布广泛，除细胞内源性的RNA酶外，环境中也存在RNA酶。因此在提取RNA时，应尽量创造一个无RNA酶的环境，包括去除外源性RNA酶的污染和抑制内源性RNA酶活性。主要是采用RNA酶的阻抑蛋白RNasin和强力的蛋白质变性剂盐酸胍或异硫氰酸胍抑制内源性RNA酶，采用焦碳酸二乙酯（DEPC）去除外源性RNA酶。一、RNA提取 的关键真核细胞RNA的提取过程有四个关键点，即①样品（细胞或组织）的有效破碎；②有效......阅读全文
真核细胞结构组分的差异去垢剂分离实验
基本方案 附加方案：去垢剂提取物中RNA的分离 附加方案：用镁沉淀微管蛋白和微管结合蛋白 实验方法原理 差异去垢剂分离法（differen
真核细胞结构组分的差异去垢剂分离实验
实验方法原理 差异去垢剂分离法（differentialdetergentfract10nat10n,DDF)包括使用一系列含不同去垢剂的PIPES缓冲液对细胞进行连续抽提，首先是毛地黄皂苷，其次是Triton,最后是Tween/脱氧胆酸盐。这些步骤产生4种在生化和电泳上相异的组分(见图3.3和表3
磷酸钙介导的质粒－DNA－转染真核细胞实验
本方法中介绍的磷酸钙介导的质粒 DNA 转染贴壁细胞是对 Jordan 等建立的方法 (1996) 的改进。Jordan 等大大优化了磷酸钙介导的中国仓鼠卵巢细胞与人胚肾 293 细胞的转染方法。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。实验材料指数
磷酸钙介导的质粒－DNA－转染真核细胞实验
实验材料 指数生长的哺乳动物细胞 试剂、试剂盒 CaCl2 氯喹 Giemsa 染液
磷酸钙介导的质粒－DNA－转染真核细胞实验
实验材料 指数生长的哺乳动物细胞试剂、试剂盒 CaCl2氯喹Giemsa 染液甘油HEPES 盐缓冲液甲醇磷酸盐缓冲液丁酸钠TE质粒 DNA细胞生长培养基仪器、耗材 组织培养皿（60 mm) 或 12 孔板实验步骤 材料缓冲液与溶液贮存液、缓冲液与试剂的成分见附录 1。稀释贮存液至所需浓度。CaCl
国际首例人造单染色体真核细胞创建成功
覃重军研究员在观察单染色体酵母的生长情况中国科学院分子植物科学卓越创新中心/植物生理生态研究所合成生物学重点实验室覃重军研究团队与合作者在国际上首次人工创建了单条染色体的真核细胞，该成果于北京时间2018年8月2日在国际知名学术期刊《自然》在线发表。这一成果在中科院B类先导专项“细胞命运可塑性的分子
脂质体介导的真核细胞转染实验——质体介导短暂表达
用脂质体将DNA导人各种真核细胞的效率比其他转染方法更高，重复性更好。实验材料哺乳动物细胞试剂、试剂盒质粒DNA完全培养基氯化铯DMEM仪器、耗材培养皿培养箱聚苯乙烯管实验步骤1. 按5×105细胞/孔的量在六孔板中接种指数期生长的细胞，在37℃ 5%CO2培养箱中 培养过夜，直至细胞80%汇片。
创建成功！国际首例人造单染色体真核细胞
近日，中国科学院分子植物科学卓越创新中心/植物生理生态研究所合成生物学重点实验室研究员覃重军研究团队及其合作者在国际上首次人工创建了单条染色体的真核细胞。该成果于北京时间8月2日发表在《自然》上，是合成生物学领域具有里程碑意义的突破。人造单染色体酵母与天然酵母细胞对比图，两者形态相似，但染色体的
磷酸钙介导的真核细胞转染实验——高效转染法
实验材料真核细胞试剂、试剂盒完全培养液TEBES仪器、耗材培养箱平板实验步骤1. 转染前一天接种呈指数生长的细胞，密度为5×105/10 cm 平板。加10 ml 完全培养液，在开始转染时细胞数应＜106/平板，以留足够供细胞扩增至少2倍的表面积。2. 用TE缓冲液稀释质粒DNA至1 μg/μ
电穿孔转染真核细胞实验——植物原生质体细胞
电穿孔法应用高压电击短暂或稳定地将DNA导人细胞，是一种目前大受好评的方法。它适用于多数类型的细胞，既可产生高频率的稳定转染，又可产生短暂的基因表达，并且由于其所需步骤甚少，因而比其他技术更为容易实验材料原生质体细胞试剂、试剂盒电穿孔缓冲液原生质溶液仪器、耗材尼龙筛网锥形管实验步骤1. 将小心切成
真核细胞核糖体真的只有两种吗？
一种名叫核糖体的细胞器可生产蛋白质。过去许多研究学者认为，核糖体之间不存在差别，任意一个核糖体能制造体内任何蛋白。6月15日一篇挑衅性文章表明，有一些核糖体只生产专门产品，其他蛋白质生产概不负责！ 生物学家们争论不休，到底核糖体有没有“术业”分工？在这篇《Molecular Cell》文章发表
重新设计生命－人工创建单染色体真核细胞
8月2日，《自然》在线发表我国科学家覃重军研究团队与合作者首次人工创建了单条染色体的真核细胞的成果。以覃重军研究组为主的研究团队完成了将单细胞真核生物——酿酒酵母天然的16条染色体人工创建为具有完整功能的单条染色体。 合成生物学将基因工程化为一个个“生物元器件”，将生命通路设计为电子通路中的“
真核细胞结构组分的差异去垢剂分离实验——－附加方案
实验方法原理应用异硫氰酸胍/苯酚/氯仿的方法可从去垢剂提取物中分离总RNA。实验步骤①每1倍体积的去垢剂提取物中加入3倍体积的RNA提取缓冲液，反复倾晃4次以使蛋白变性。②每一个样品中加入：0.1倍体积的2mol/L醋酸钠（PH4.0)1倍体积的水饱和苯酚0.2倍体积的氯仿每加入一种组分就剧烈混匀。
磷酸钙介导的真核细胞转染实验——磷酸钙法
外源基因进入细胞主要有四种方法：电击法、磷酸钙法和脂质体介导法和病毒介导法。磷酸钙法和脂质体法是利用不同的载体物质携带质粒通过直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因进入细胞。电击法和磷酸钙法的实验条件控制较严、难度较大；病毒法的前期准备较复杂、而且可能对于细胞有较大影响实验材料真核细胞试剂、试剂盒Ca
真核细胞型微生物的形状及生物学特性
形状 真核微生物是细胞核具有核膜、核仁，能进行有丝分裂，细胞质存在线粒体或同时存在叶绿体等多种细胞器的一类微生物。其广泛分布于自然界，种类很多，形态各异。 生物学特性 真菌按结构分为单细胞真菌和多细胞真菌两大类。 1、单细胞真菌：呈圆形或卵圆形，以出芽方式繁殖，如酵母菌、白色念珠菌和新型
脂质体介导的真核细胞转染实验——脂质体进行稳定转染
实验材料哺乳动物细胞试剂、试剂盒DMEM仪器、耗材培养箱离心管实验步骤1. 接种细胞（见“脂质体介导短暂表达”步骤1）长至50%汇片。 2. 制备DNA/脂质体混合物，转染细胞（见“脂质体介导短暂表达”步骤2和3）。3. 每孔细胞加入1 ml DMEM-20完全培养液，37℃ 培养箱培养48
真核细胞培养时支原体污染表现以及解决方式
支原体是一种特殊的微生物，在哺乳动物（包括人类）、爬行动物、昆虫和植物中广泛分布。它是小、较为简单的可自我复制的原核生物，大小仅为0.2-0.8um。支原体的基因组仅为0.58-2.20Mb，其自身生物合成能力有限，因此大部分营养物质都要依赖于宿主。 在真核细胞培养过程中，支原体感染发生率达到6
国际首例人造单染色体真核细胞在我国创建成功
近日，中国科学院分子植物科学卓越创新中心/植物生理生态研究所合成生物学重点实验室研究员覃重军研究团队及其合作者在国际上首次人工创建了单条染色体的真核细胞。该成果于北京时间8月2日发表在《自然》上，是合成生物学领域具有里程碑意义的突破。 人造单染色体酵母与天然酵母细胞对比图，两者形态相似，
人造单染色体真核细胞？覃重军是散步想出的
2018年8月2日，国际顶级学术期刊《Nature》杂志颇为罕见地刊发了同一“选题”的两篇科研成果：一篇出自人工合成领域“老将”、美国科学院院士、纽约大学医学院教授Jef D. Boeke团队；一篇来自中国科学院分子植物科学卓越创新中心/植物生理生态研究所合成生物学重点实验室覃重军研究团队及其合
真核细胞结构组分的差异去垢剂分离实验——－附加方案2
实验方法原理胞质提取物中的微管蛋白和微管结合蛋白（MAP)，可以通过37℃孵育，然后用镁沉淀的方法与其他的胞质成分分离实验步骤① 加入0.1mol/L MgCl2，将一管毛地黄皂苷/EDTA提取物（主方案中的CYTO组分）的Mg2+含量调至7〜35mmol/L。37℃孵育样品20〜30min。所使用
电穿孔转染真核细胞实验——电穿孔转染哺乳动物细胞
电穿孔法应用高压电击短暂或稳定地将DNA导人细胞，是一种目前大受好评的方法。它适用于多数类型的细胞，既可产生高频率的稳定转染，又可产生短暂的基因表达，并且由于其所需步骤甚少，因而比其他技术更为容易。实验材料哺乳动物细胞试剂、试剂盒完全培养液电穿孔缓冲液仪器、耗材电穿孔仪器电击池实验步骤1. 在完全
真核细胞结构组分的差异去垢剂分离实验——基本方案
实验方法原理差异去垢剂分离法（differentialdetergentfract10nat10n,DDF)包括使用一系列含不同去垢剂的PIPES缓冲液对细胞进行连续抽提，首先是毛地黄皂苷，其次是Triton,最后是Tween/脱氧胆酸盐。这些步骤产生4种在生化和电泳上相异的组分(见图3.3和表3.
关于抗原抗体反应基因工程抗体在真核细胞中的表达
噬菌体表达的抗体片段常常是在原核细胞（）中完成。原核系统表达抗体片段产量高，成本低，快速易于操作。但抗体片段在原核表达系统中不能进行CH2糖基化，从而影响抗体的活性。因此重组抗体基因片段可转移至适合的骨髓瘤细胞系或哺乳动物细胞系（如CHO），甚至于植物细胞中表达，可以得到与淋巴细胞表达相同的抗体
脂质体介导的真核细胞转染实验——哺乳动物细胞选择标记
哺乳动物细胞的选择标记实验材料哺乳动物实验步骤一、腺苷脱氨酶（ADA） 1. 选择条件：培养液中加10 μg/ml 胸腺嘧啶脱氧核苷，15 μg/ml 次黄嘌呤，4 μmol/l 腺嘌呤-9-β-D-呋喃木糖苷（Xyl-A），及0.01~0.3 μmol/l 2‘-脱氧助间型霉索（dCF）。胎牛血
北大学者发表JBC封面文章：真核细胞DNA复制起始新机制
来自北京大学生科院的研究人员发表了题为“Sap1 is a replication-initiation factor essential for the assembly of pre-replicative complex in the fission yeast Schizosacchar
世界首例人造单染色体真核细胞有中国科学家创造
日前，中国科学院分子植物科学卓越创新中心/植物生理生态研究所合成生物学重点实验室覃重军研究团队与合作者历经4年努力攻关，在国际上首次人工创建了单条染色体的真核细胞，是合成生物学具有里程碑意义的重大突破。 覃重军（左二）研究团队正在分析人造酵母菌株的脉冲场凝胶电泳验证图。 该成果于
世界首例！人工创建单条染色体的真核细胞在中国诞生
中国科学院分子植物科学卓越创新中心/植物生理生态研究所合成生物学重点实验室覃重军研究团队与合作者在国际上首次人工创建了单条染色体的真核细胞，该成果于北京时间2018年8月2日在国际知名学术期刊《自然》在线发表。这一成果在中科院B类先导专项“细胞命运可塑性的分子机制与调控”以及国家自然科学基金委
“人造生命”－我国科学家“创造”世界首例单染色体真核细胞
日前，中科院分子植物科学卓越创新中心/植物生理生态研究所合成生物学重点实验室覃重军研究团队与合作者，在国际上首次人工创建了单条染色体的真核细胞：把酿酒酵母细胞里原本天然的16条染色体，人工融合成单条染色体，且仍具有正常的细胞功能。既改变了染色体的结构，又仍保有生命的“活性”，人工蜕变出一个全新细
中国科大揭示真核细胞分裂染色体稳定性调控新机制
近日，中国科学技术大学研究人员成功揭示了一个调控真核细胞染色体稳定性的CDK1-TIP60-Aurora B信号轴，并详尽阐明了蛋白质磷酸化与乙酰化修饰动态调控Aurora B激酶活性的新机制。该研究成果在线发表在2月1日的Nature Chemical Biology 上。 着丝粒是调控真
里程碑的突破！中国科学家创建单条染色体的真核细胞
中国科学院分子植物科学卓越创新中心/植物生理生态研究所今早宣布，其合成生物学重点实验室覃重军研究团队与合作者在国际上首次人工创建了单条染色体的真核细胞，该成果于8月2日在国际知名学术期刊《自然》在线发表。该成果完全由中国科学家独立完成，是合成生物学具有里程碑意义的重大突破。 人类能否创造生命？