磷酸钙介导的真核细胞转染实验——高效转染法
实验材料真核细胞试剂、试剂盒完全培养液TEBES仪器、耗材培养箱平板实验步骤1. 转染前一天接种呈指数生长的细胞，密度为5×105/10 cm 平板。加10 ml 完全培养液，在开始转染时细胞数应＜106/平板，以留足够供细胞扩增至少2倍的表面积。2. 用TE缓冲液稀释质粒DNA至1 μg/μl ，4 ℃保存。 3. 将最适量的质粒DNA与500 μl 0.25 mol/l CaCl2混合，加入500 μl 2×BBS中，混匀，室温下温育10~20 min。4. 将磷酸钙-DNA溶液逐滴加入培养皿的细胞中，同时晃动培养皿，在35℃ 3%CO2培养箱中温育15~24min。 5. 用5 ml PBS洗细胞两次，加入10 ml 完全培养液。对于稳定转化，在35~37℃ 5%CO2培养箱中培养过夜。对于短暂表达，培养细胞48~72 h。&nbs......阅读全文
磷酸钙介导的真核细胞转染实验——高效转染法
实验材料真核细胞试剂、试剂盒完全培养液TEBES仪器、耗材培养箱平板实验步骤1. 转染前一天接种呈指数生长的细胞，密度为5×105/10 cm 平板。加10 ml 完全培养液，在开始转染时细胞数应＜106/平板，以留足够供细胞扩增至少2倍的表面积。2. 用TE缓冲液稀释质粒DNA至1 μg/μ
细胞转染电穿孔转染法
电流能够可逆地击穿细胞膜形成瞬时的水通路或膜上小孔促使DNA分子进入胞内，这种方法就是电穿孔。当遇到某些脂质体转染效率很低或几乎无法转入时建议用电穿孔法转染。一般情况下，高电场强度会杀死50%-70% 的细胞。现在针对细胞死亡开发出了一种电转保护剂，可以大大的降低细胞的死亡率，同时提高电穿孔转染效率
细胞转染脂质体转染法
阳离子脂质体表面带正电荷，能与核酸的磷酸根通过静电作用，将DNA分子包裹入内，形成DNA脂复合物，也能被表面带负电的细胞膜吸附，再通过融合或细胞内吞进入细胞。脂质体转染适用于把DNA转染入悬浮或贴壁培养细胞中，是目前实验室最方便的转染方法之一，其转染率较高，优于磷酸钙法。由于脂质体对细胞有一定的毒性
PEI－转染法
材料：质粒DNA指数生长的真核细胞PEI （聚乙烯亚胺）1×HBS （pH7.4）配方：PEI 储存液（100 μM）：称取125 mg PEI 粉末溶解于50 ml 1×HBS （pH7.4）中， 0.2 μm 滤膜过滤，储存于4℃备用。1×HBS （pH7.4）： 将8.76 g NaCl 溶解
PEI－转染法
材料： 质粒DNA 指数生长的真核细胞 PEI （聚乙烯亚胺） 1×HBS （pH7.4） 配方： PEI 储存液（100 μM）：称取125 mg PEI 粉末溶解于50 ml 1×HBS （pH7.4）中， 0.2 μm 滤膜过滤，储存于4℃备用。 1×HBS （pH7.4）： 将8.76 g
高效率转染RAW－264.7细胞，转染效率达到95％左右
一、可以转染极度难转染的免疫细胞、悬浮细胞，如:T细胞、NK细胞、人淋巴细胞、THP-1等细胞；二、可高效率转染siRNA到任何哺乳动物细胞;中山大学,使用Zeta Life, Advanced DNA RNA，AD600150转染试剂 高效率转染RAW 264.7 (小鼠单核巨噬细胞白血病细胞)
物理转染法的介绍
包括：①显微注射②电穿孔③基因枪等，显微注射虽然费力，但是非常有效的将核酸导入细胞或细胞核的方法。这种方法常用来制备转基因动物，但却不适用于需要大量转染细胞的研究。电穿孔法常用来转染如植物原生质体这样的常规方法不容易转染的细胞。电穿孔靠脉冲电流在细胞膜上打孔而将核酸导入细胞内。导入的效率与脉冲的强度
电穿孔法稳定转染
实验材料 L8057-Y10细胞 D-PBSA 仪器、耗材 培养瓶 培养板
瞬时转染分析法
摘要： 介绍5种瞬时转染分析法：瞬时转染分析法、稳定转染分析法、体外转录分析法、转基因分析法和同源重组分析法. 1.瞬时转染分析法 目前有很多功能性分析方法用于研究转录调控,最常用的方法是瞬时转染分析法.该方法是通过一定的转染程序将含目的调控区
电穿孔法稳定转染
实验材料L8057-Y10细胞D-PBSA仪器、耗材培养瓶培养板F12 FB培养基G418(Invitrogen)选择性培养基电穿孔电穿孔专用杯电穿孔仪II电穿孔仪-II配套的效能扩增器-Plus实验步骤表达载体与 DNA 制备：pSVTKGH，线性化 [ Selden et al.，1986]此载
磷酸钙转染法
磷酸钙转染法材料：质粒DNA指数生长的真核细胞2 M CaCl22×HBS （pH 7.05）配方:2×HBS （pH7.05）：900 ml 超纯水中加入NaCl 16.3 g, KCl 0.74 g, Na2HPO4 0.214g，Glucose 2.4 g 和HEPES 10 g，调pH 至7
电穿孔法稳定转染
方案27.12 脂质体介导的瞬时转染 实验材料 L8057-Y10细胞 D-PBSA
化学转染法磷酸钙法应用
磷酸钙法是磷酸钙共沉淀转染法，因为试剂易取得，价格便宜而被广泛用于瞬时转染和稳定转染的研究，先将DNA和氯化钙混合，然后加入到PBS中慢慢形成DNA磷酸钙沉淀，最后把含有沉淀的混悬液加到培养的细胞上，通过细胞胞膜的内吞作用摄入DNA。磷酸钙似乎还通过抑制血清中和细胞内的核酸酶活性而保护外源DNA免受
脂质体介导DNA转染法
脂质体（LR）试剂是阳离子脂质体DOTMA和DOPE的混合物（1：1）。它适用于把DNA转染入悬浮或贴壁培养细胞中，是目前条件下最方面的转染方法之一。转染率高，优于磷酸钙法，比它高5-100倍，能把DNA和RNA转染到各种细胞。用LR进行转染时，首先需要优化转染条件，应找出该批LR对转染某一特定细胞
化学转染法DEAE葡聚糖法应用
DEAE-葡聚糖是最早应用哺乳动物细胞转染试剂之一，DEAE-葡聚糖是阳离子多聚物，它与带负电的核酸结合后接近细胞膜而被摄取，用DEAE-葡聚糖转染成功地应用于瞬时表达的研究，但用于稳定转染却不是十分可靠。
高效转染试剂盒操作说明书
Ø 百恩维公司生产研发的高效转染试剂盒（HET）可有效地转染各种哺乳动物细胞，通常 293 细胞转染率很容易达到 40-50%，优化条件后更能高达 90%以上。并且对细胞基本没有毒 性。不仅可以瞬时表达，也可以筛选稳定细胞株。 Ø 质粒 DNA, DNA, siRNA 等均可使用。 Ø 可用
关于物理转染法的基本介绍
①显微注射 ②电穿孔 ③基因枪 显微注射虽然费力，但是非常有效的将核酸导入细胞或细胞核的方法。这种方法常用来制备转基因动物，但却不适用于需要大量转染细胞的研究。电穿孔法常用来转染如植物原生质体这样的常规方法不容易转染的细胞。电穿孔靠脉冲电流在细胞膜上打孔而将核酸导入细胞内。导入的效率与脉冲
脂质体转染法的技术要点
利用脂质体转染法最重要的就是防止其毒性，因此脂质体与质粒的比例，细胞密度以及转染的时间长短和培养基中血清的含量都是影响转染效率的重要问题，通过实验摸索的合适转染条件对于效率的提高有巨大的作用。
痘苗载体转染细胞实验——DOTAP－法
实验方法原理将感兴趣的外源基因亚克隆到质粒转移载体上，外源基因的两端为痘苗病毒基因组非必需基因片段。随后，将重组质粒转染病毒感染的细胞，痘苗病毒基因组与质粒上同源的部分发生同源重组。应用适当的筛选方案，经几轮噬斑纯化，从细胞裂解物中获得重组病毒。实验材料pSCll／pRB21／pSC65／pLW9
化学转染法人工脂质体法应用
人工脂质体法采用阳离子脂质体，具有较高的转染效率，不但可以转染其他化学方法不易转染的细胞系，而且还能转染从寡核苷酸到人工酵母染色体不同长度的DNA，以及RNA,和蛋白质。此外，脂质体体外转染同时适用于瞬时表达和稳定表达，与以往不同的是脂质体还可以介导DNA和RNA转入动物和人的体内用于基因治疗。Li
DEAE葡聚糖介导的高效率转染实验
在此介绍经典 DEAE-葡聚糖转染方法的两种形式。第一种（主要方案）细胞短时间接触髙浓度 DEAE-葡聚糖，转染效率较髙，但对细胞的毒性较大。第二种 (备选方案：DEAE-葡聚糖介导的转染：增强细胞存活力）细胞长时间接触较低浓度的 DEAE-葡聚糖，转染效率较低，但细胞存活率较高。本实验来源于分子克
DEAE葡聚糖介导的高效率转染实验
实验材料 指数生长的哺乳动物细胞 试剂、试剂盒 二磷酸氯喹 DEAE-葡聚糖磷酸盐缓冲液 含葡萄糖
DEAE葡聚糖介导的高效率转染实验
在此介绍经典 DEAE-葡聚糖转染方法的两种形式。第一种（主要方案）细胞短时间接触髙浓度 DEAE-葡聚糖，转染效率较髙，但对细胞的毒性较大。第二种 (备选方案：DEAE-葡聚糖介导的转染：增强细胞存活力）细胞长时间接触较低浓度的 DEAE-葡聚糖，转染效率较低，但细胞存活率较高。本实验来源于分子克
DEAE葡聚糖介导的高效率转染实验
实验材料 指数生长的哺乳动物细胞试剂、试剂盒 二磷酸氯喹DEAE-葡聚糖磷酸盐缓冲液含葡萄糖的 Tris-缓冲盐溶液质粒 DNA细胞生长培养基仪器、耗材 组织培养皿实验步骤 材料缓冲液与溶液贮存液、缓冲液与试剂的成分见附录 1。稀释贮存液至所需浓度。二磷酸氯喹（100 mmol/L)溶解 60 mg
Nat－Commun：氟化修饰方法实现高效安全的基因转染
华东师范大学生命科学学院、上海市调控生物学重点实验室程义云教授课题组的最新成果近期在线发表于Nature子刊《Nature Communications》 ，该成果提出的氟化修饰方法为高分子基因载体的设计提供了一个全新的思路。 程义云教授(右)与该成果第一作者博士生王铭明在实验室 基
物理转染法的主要类型和技术特点
包括：①显微注射②电穿孔③基因枪等，显微注射虽然费力，但是非常有效的将核酸导入细胞或细胞核的方法。这种方法常用来制备转基因动物，但却不适用于需要大量转染细胞的研究。电穿孔法常用来转染如植物原生质体这样的常规方法不容易转染的细胞。电穿孔靠脉冲电流在细胞膜上打孔而将核酸导入细胞内。导入的效率与脉冲的强度
痘苗载体转染细胞实验——CaCl2－法
实验方法原理将感兴趣的外源基因亚克隆到质粒转移载体上，外源基因的两端为痘苗病毒基因组非必需基因片段。随后，将重组质粒转染病毒感染的细胞，痘苗病毒基因组与质粒上同源的部分发生同源重组。应用适当的筛选方案，经几轮噬斑纯化，从细胞裂解物中获得重组病毒。实验材料pSCll／pRB21／pSC65／pLW9
转染
细胞传代(1) 试验准备：200ul/1mlTip头各一盒（以上物品均需高压灭菌），酒精棉球，废液缸，试管架，微量移液器，记号笔，培养皿，离心管。(2) 弃掉培养皿中的培养基，用1ml的PBS溶液洗涤两次。(3) 用Tip头加入1ml Trypsin液，消化1分钟（37。C，5%CO2 )。用手轻拍
磷酸钙法转染HEK293T细胞
磷酸钙法转染HEK293T细胞可应用于：（1）研究转染哺乳动物细胞的机理；（2）基因工程。实验方法原理常规转染技术可分为两大类，一类是瞬时转染，一类是稳定转染（永久转染）。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色体中，因此一个宿主细胞中可存在多个拷贝数，产生高水平的表达，但通常只持续几天，多用于启动子
磷酸钙共沉淀转染法的技术特点
磷酸钙法是磷酸钙共沉淀转染法，因为试剂易取得，价格便宜而被广泛用于瞬时转染和稳定转染的研究，先将DNA和氯化钙混合，然后加入到PBS中慢慢形成DNA磷酸钙沉淀，最后把含有沉淀的混悬液加到培养的细胞上，通过细胞胞膜的内吞作用摄入DNA。磷酸钙似乎还通过抑制血清中和细胞内的核酸酶活性而保护外源DNA免受