SDSPAGE检测蛋白表达(proteinexpression)
一、材料与仪器30%丙烯酰胺溶液；1.5mol/L Tris-HCl分离胶缓冲液，PH8.8；1.0mol/L Tris-HCl浓缩胶缓冲液，PH6.8；电泳缓冲液，PH8.3；10%SDS溶液；10%过硫酸铵溶液；样品处理液；染色液；脱色液；电泳玻璃板，电泳电源架，电泳槽，电泳仪等；蛋白Mark。 二、方法与步骤 1) 分离胶和浓缩胶配制 按下表比例分别配制分离胶和浓缩胶： 表2-7：聚丙烯酰胺组成 试剂： 体积（ml） 分离胶 浓缩胶 H2O 2.8 3.4 Acrgl-bis 4.5 ......阅读全文
毕赤酵母表达（pichia－pastoris－expression－）实验手册（3）
液体YPD培养基可常温保存；琼脂YPD平板在4℃可保存几个月。加入Zeocin 100ug / ml，成为YPDZ培养基，可以4℃条件下保存1～2周。2.4 YPDS + Zeocin 培养基（Yeast Extract Peptone Dextrose Medium）：yeast extract
毕赤酵母表达（pichia－pastoris－expression－）实验手册（6）
随着PCR技术的不断发展成熟（扩增长度、保证性、产量和特异性等），质粒构建过程的大多数细胞内的DNA复制将被PCR这一细胞外的DNA复制所代替，质粒构建效率将有质的飞跃。4.4密码子的偏好性的原则酵母菌对外源基因的表达也和外源基因密码子的选用有关。了解表达系统宿主在密码子使用上的偏爱性对从翻译水平分
戊型肝炎病毒线性抗原表位克隆及表达的初步研究
通过首位串联可以实现HEV线性表位较高效的表达。 Cloning and expression a linear epitope from hepatitis E virusXIA Xiaobing, HUANG Rutong, LI Derong. (Institute of Microbio
蛋白质（protein）概述
蛋白质是一种复杂的有机化合物，旧称“朊”。蛋白质这一概念最早是由瑞典化学家永斯·贝采利乌斯于1838年提出，但当时人们对于蛋白质在机体中的核心作用并不了解。1926年，詹姆斯·B·萨姆纳揭示尿素酶是蛋白质，首次证明了酶是蛋白质。第一个被测序的抗原肽蛋白质是胰岛素，由弗雷德里克·桑格完成，他也因此获得
大肠杆菌蛋白sdspage检测使用什么裂解
和样品本身没多大关系,要不就是内槽的电泳液漏了,加紧一点.cicelyzh(站内联系TA)为什么要跑胶估算浓度,直接做蛋白定量不行吗?wizardfan(站内联系TA)定量一般都需要有某种计量方法,比如做MS的intensity,或者透光度等.SDS-PAGE都是用来分离,而不是。
癌基因编码蛋白表达的检测
实验步骤展开
表达蛋白检测实验_点印迹法
实验方法原理本方案用DNA点迹杂交检测噬斑以鉴定重组病毒。像点迹杂交一样，将感染细胞裂解物印迹在硝酸纤维素膜上（可参考「痘苗DNA检测实验」中「斑点杂交法」）。用可以识别外源基因表达蛋白的抗体与膜一起孵育，用125I 标记的蛋白 A 检测结合的抗体，还可应用化学发光检测系统，如 Amersham E
蛋白表达
Protein Construct Expression and Purification Procedures (Gimila's Lab) Protein Expression (Mark's Lab) · Purification of GST Fused
troponin蛋白纯化－Protein－purification:－troponins
Overview TROPONINS The calcium-dependent regulatory protein complex located on the thin actin filaments of muscle comprises of TnC (17.8 kDa), TnI (2
蛋白浓缩（protein－concentration）基本方法
蛋白浓缩方法基本有：丙酮沉淀法；免疫沉淀法；三氯醋酸沉淀法；硫酸铵沉淀法；（低温）有机溶剂沉淀法；聚乙二醇沉淀法；超滤法；透析法；离子交换层析和冷冻干燥法…… 1.丙酮沉淀法；三氯醋酸沉淀法 试验要求的仪器简单，但是常常导致蛋白质变性。 2.免疫沉淀法：得有特异性抗体！ 3.硫酸铵沉淀法
蛋白质抽取(protein－extraction)
蛋白质在细菌中表现后，以反复的冷冻-解冻方法打破细胞，再用硫酸铵把蛋白质沉淀下来，此步骤可以去除大部份核酸、多醣、脂质等杂物。仪器用具：恒温震荡培养箱37℃；高速冷冻离心机及离心管 （使用20,000 rpm离心陀）使用高速离心机要注意： 离心机及离心陀的温度要预冷完全，相对位置的两只离心管要平衡好
蛋白浓缩(protein－concentration)方法详解
1，透析袋浓缩法利用透析袋浓缩蛋白质溶液是应用最广的一种。将要浓缩的蛋白溶液放入透析袋（无透析袋可用玻璃纸代替），结扎，把高分子（6000－12000）聚合物如聚乙二醇（碳蜡）、聚乙烯吡咯、烷酮等或蔗糖撒在透析袋外即可。也可将吸水剂配成30%－40%浓度的溶液，将装有蛋白液的透析袋放入即可。吸水剂用
分子克隆蛋白表达实验指南（十一）
SDS-PAGE胶样品排列： MarkerUII 37CUI’I’ Marker：低分子量蛋白marker，上样10ul UI：未诱导菌液，上样10ul。任取37C和20C中一个 I：诱导后对照，上样10ul UI’, I’代表G
抑癌基因编码蛋白表达的检测
实验步骤展开
抑癌基因编码蛋白表达的检测
实验步骤 展开
抑癌基因编码蛋白表达的检测
实验步骤 展开
新技术同时检测基因和蛋白表达
美国俄亥俄州立大学的研究人员近日开发出一种新技术，能同时观察细胞中的基因数量和蛋白表达。此技术能够详细分析基因状态以及相应蛋白表达之间的关联，并更透彻地了解癌症及其他复杂疾病。该成果发表在《Neuro-Oncology》上。 这种新技术称为荧光原位基因蛋白分析（fluorescent in
表达蛋白检测实验_免疫印迹法
实验方法原理当重组病毒通过噬斑纯化和扩增后，免疫印迹可用于鉴定重组蛋白，并检测其是否有预期的大小以及是否从感染细胞中分泌。下面的步骤是介绍检测非分泌性（细胞内）蛋白的，如果重组蛋白是分泌到培养基中的，可按注解中的步骤操作。实验材料生长至汇片的单层 BS-C-1 细胞重组痘苗病毒储液试剂、试剂盒完全
表达蛋白检测实验_免疫印迹法
实验方法原理当重组病毒通过噬斑纯化和扩增后，免疫印迹可用于鉴定重组蛋白，并检测其是否有预期的大小以及是否从感染细胞中分泌。下面的步骤是介绍检测非分泌性（细胞内）蛋白的，如果重组蛋白是分泌到培养基中的，可按注解中的步骤操作。实验材料生长至汇片的单层 BS-C-1 细胞重组痘苗病毒储液试剂、试剂盒完全
Fusion－Protein－Isolation(融合蛋白分离纯化)
Peter Novick Lab,Department of Cell Biology Yale University School of Medicinehttp://info.med.yale.edu/cellbio/Novick/Second/Protocols/Fusion.pdf1.Sta
Bradford法蛋白定量（Bradford－Protein－Assay－）
Bradford Assay is a rapid and accurate method commonly used to determine the total protein concentration of a sample. The assay is based on the observ
表达蛋白(Expressed－protein)的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分析
一、原理细菌体中含有大量蛋白质，具有不同的电荷和分子量。强阴离子去污剂SDS与某一还原剂并用，通过加热使蛋白质解离，大量的SDS结合蛋白质，使其带相同密度的负电荷，在聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）上，不同蛋白质的迁移率仅取决于分子量。采用考马斯亮兰快速染色，可及时观察电泳分离效果。因而根据预计表达蛋
膜蛋白研究的整体解决方案1
提起膜蛋白，浮现在广大从事蛋白研究的科研工作者脑海中的是两点：1.膜蛋白功能的重要性。2.膜蛋白研究的困难性。众所周知，膜蛋白在细胞间接触、表面识别、信号转导、酶活性和运输方面都扮演着重要的角色。由于它们功能多样，也就成为理想的药物靶点。然而，膜蛋白的生化和结构研究一直都很缓慢。Protein Da
表达蛋白的生物学活性的检测
一、MTT比色法检测细胞活性（一）原理 活细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶能催化无色的MTT形成蓝色的甲肷，其形成的量与活细胞数和功能状态呈正相关。对细胞活力有影响的表达蛋白活性检测可以通过MTT比色法进行。（二）试剂准备1、 青链霉素溶液（100X）：青霉素100万U，链霉素100万U，溶于10
NanoString技术检测微创穿刺样品蛋白表达
NanoString技术由于其高灵敏度，高重复性并且检测过程中不需要进行反转录和扩增，一经推出便受到了广泛的关注和认可。现在这项技术广泛的应用在基因表达（mRNA），小RNA（miRNA），拷贝数变异（CNV），长链非编码RNA（lncRNA）等方面的检测，但是这些检测的对象都是核酸，对于细胞蛋白的
表达蛋白的生物学活性的检测
一、MTT比色法检测细胞活性（一）原理活细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶能催化无色的MTT形成蓝色的甲肷，其形成的量与活细胞数和功能状态呈正相关。对细胞活力有影响的表达蛋白活性检测可以通过MTT比色法进行。（二）试剂准备1、青链霉素溶液（100X）：青霉素100万U，链霉素100万U，溶于100mlddH2
表达蛋白的生物学活性的检测
一、MTT比色法检测细胞活性（一）原理活细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶能催化无色的MTT形成蓝色的甲肷，其形成的量与活细胞数和功能状态呈正相关。对细胞活力有影响的表达蛋白活性检测可以通过MTT比色法进行。（二）试剂准备1、青链霉素溶液（100X）：青霉素100万U，链霉素100万U，溶于100mlddH2
表达蛋白检测实验_免疫沉淀法
实验方法原理使用强大的晚期基因启动子表达的重组蛋白可以用放射性氨基酸标记，再用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测。当使用早期或晚期基因启动子时，利用标记蛋白免疫沉淀能提高灵敏性和特异性。试剂、试剂盒磷酸缓冲液（PBS）细胞裂解液[35S]蛋氨酸或[35S]半胱氨酸仪器、耗材完全 MEM-5 培养基（含和不含蛋氨
上海生科院最新PNAS文章
4月19日，《美国科学院院刊》（PNAS）杂志在线发表了中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所巫永睿研究组题为Gene duplication confers enhanced expression of 27-kDa γ-zein for endosperm modification
PRAM1基因编码的功能和结构描述
该基因编码的蛋白类似于fyn结合蛋白（fyb/slap-130），一种参与t细胞受体介导的信号转导的衔接蛋白。该基因在正常骨髓生成过程中表达和调节。该基因的表达由维甲酸诱导，并被pml-raralpha、早幼粒细胞白血病（pml）融合蛋白和维甲酸受体α（raralpha）的表达所抑制。The pro