表达蛋白的生物学活性的检测

一、MTT比色法检测细胞活性(一)原理 活细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶能催化无色的MTT形成蓝色的甲肷,其形成的量与活细胞数和功能状态呈正相关。对细胞活力有影响的表达蛋白活性检测可以通过MTT比色法进行。(二)试剂准备1、 青链霉素溶液(100X):青霉素100万U,链霉素100万U,溶于100mlddH2O中, 抽滤除菌。2、 L15基础培养基:1000mlL15培养基,加2g碳酸氢钠,10ml 100X青链霉素,5mlHEPES。3、 MTT液:5mg/ml溶于L15基础培养基。4、 SDS处理液:20gSDS,50μl二甲基甲酰胺,加双蒸水50ml溶解。5、 L-多聚赖氨酸:50μg溶于1ml双蒸水中。6、 &nb......阅读全文

表达蛋白的生物学活性的检测

一、MTT比色法检测细胞活性(一)原理    活细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶能催化无色的MTT形成蓝色的甲肷,其形成的量与活细胞数和功能状态呈正相关。对细胞活力有影响的表达蛋白活性检测可以通过MTT比色法进行。(二)试剂准备1、   青链霉素溶液(100X):青霉素100万U,链霉素100万U,溶于10

表达蛋白的生物学活性的检测

一、MTT比色法检测细胞活性(一)原理活细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶能催化无色的MTT形成蓝色的甲肷,其形成的量与活细胞数和功能状态呈正相关。对细胞活力有影响的表达蛋白活性检测可以通过MTT比色法进行。(二)试剂准备1、青链霉素溶液(100X):青霉素100万U,链霉素100万U,溶于100mlddH2

表达蛋白的生物学活性的检测

一、MTT比色法检测细胞活性(一)原理活细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶能催化无色的MTT形成蓝色的甲肷,其形成的量与活细胞数和功能状态呈正相关。对细胞活力有影响的表达蛋白活性检测可以通过MTT比色法进行。(二)试剂准备1、青链霉素溶液(100X):青霉素100万U,链霉素100万U,溶于100mlddH2

活性G蛋白的检测

来自细胞外的信号绝大多数都是要通过分布于细胞表面的各种受体传导到细胞内部,从而引起细胞的生理反应,发挥相应的功能。细胞表面最大的受体家族就是G蛋白偶联的受体(G-Protein-Coupled Receptors, GPCRs)。编码GPCR的基因有1000多个,占人类基因组总数超过2%。G蛋白

表达蛋白检测实验

实验方法原理 当重组病毒通过噬斑纯化和扩增后,免疫印迹可用于鉴定重组蛋白,并检测其是否有预期的大小以及是否从感染细胞中分泌。下面的步骤是介绍检测非分泌性(细胞内)蛋白的,如果重组蛋白是分泌到培养基中的,可按注解中的步骤操作。实验材料 生长至汇片的单层 BS-C-1 细胞重组痘苗病毒储液试剂、试剂盒

表达蛋白检测实验

免疫印迹法 免疫沉淀法 点印迹法             实验方法原理 当重组病毒通过噬斑纯化和扩增后,免疫印迹可用于鉴定重组蛋白,并检测其是否有预期的大小以及是

各类免疫球蛋白的生物学活性

  不同Ig其合成部位、合成时间、血清含量、分布、半衰期以及生物学活性有所差别。  一、IgG  IgG主要由脾、淋巴结中的浆细胞合成和分泌,以单体形式存在。在个体发育过程中机体合成IgG的年龄要晚于 IgM,在出生后第3个月开始合成,3~5岁接近成年人水平。IgG是血清中主要的抗体成分,约占血

免疫球蛋白生物学活性

免疫球蛋白的重要生物学活性为特异性结合抗原,并通过重链C区介导一系列生物学效应(表2-2),包括激活补体、亲和细胞而导致吞噬、胞外杀伤及免疫炎症,最终达到排除外来抗原的目的。(一)抗原结合作用抗体分子在结合抗原时,其Fab片段的V区与抗原决定簇的立体结构(构象)必须吻合,特别与高变区的氨基酸残基直接

TNFα生物学活性检测方法

光密度法 实验材料 小鼠L929细胞 试剂、试剂盒 TNF标准品

细胞因子生物学活性检测

实验方法原理 白细胞介素1是一种重要的细胞因子,主要由单核-巨噬细胞产生,IL-1不仅对多种免疫活性细胞有重要的调节功能,而且与发热、炎症发生以及某些疾病的病理变化有关。目前对IL-1产生水平的检测主要应用生物学活性检测的方法。一、ConA刺激小鼠胸腺细胞检测IL-1生物学活性 小鼠胸腺细胞在丝裂原

TNFα生物学活性检测方法

基本原理TNF的生物学活性之一是能直接杀伤肿瘤细胞。TNF与相应受体结合后向细胞内移,被靶细胞溶酶体摄取导致溶酶体稳定性降低,各种酶外泄,引起细胞溶解。肿瘤细胞株对TNF-α的敏感性有很大的差异,用放线菌素D、丝裂酶素C、放线菌酮等处理肿瘤细胞,可明显增强TNF-α杀伤肿瘤细胞活性。材料和试剂1,完

干扰素生物学活性检测

实验方法原理干扰素能刺激某些指示细胞(如人羊膜上皮细胞Wish株、人喉癌细胞株Hep-2以及人胚肌皮或肺单层细胞)产生抗病毒蛋白,从而使细胞免受水疱性口炎病毒(VSV)的攻击,根据待测样品不同稀释度的保护能力,计算出干扰素生物学活性单位。实验材料VSVWISHHeP-2细胞株试剂、试剂盒MTT二甲亚

抑癌基因编码蛋白表达的检测

实验步骤             展开           

抑癌基因编码蛋白表达的检测

实验步骤             展开

SDSPAGE检测蛋白表达

一、材料与仪器30%丙烯酰胺溶液;1.5mol/L Tris-HCl分离胶缓冲液,PH8.8;1.0mol/L Tris-HCl浓缩胶缓冲液,PH6.8;电泳缓冲液,PH8.3;10%SDS溶液;10%过硫酸铵溶液;样品处理液;染色液;脱色液;电泳玻璃板,电泳电源架,电泳槽,电泳仪等;蛋白Mark。

抗体的生物学活性

抗体的生物学功能:可以中和毒素和阻止病原体入侵。识别并特异性结合抗原,执行该功能的结构是抗体的V区,其中CDR部位在识别和结合特异性抗原的过程中起决定性作用;激活补体产生攻膜复合物使细胞溶解破坏。人的抗体IgG1~3和IgM与相应抗原结合后,可因构象改变而使其CH2和CH3结构域内的补体结合点暴露,

补体的生物学活性

  补体系统是人和某些动物种属,在长期的种系进化过程中获得的非特异性免疫因素之一,它也在特异性免疫中发挥效应,它的作用是多方面的。补体系统的生物学活性,大多是由补体系统激活时产生的各种活性物质(主要是裂解产物)发挥的。补体成分及其裂解产物的生物活性列于表3-6。补体成分或裂解产物生物活性作用机制C5

SDSPAGE检测检测蛋白表达的实验操作步骤

一、材料与仪器    30%丙烯酰胺溶液;1.5mol/L Tris-HCl分离胶缓冲液,PH8.8;1.0mol/L Tris-HCl浓缩胶缓冲液,PH6.8;电泳缓冲液,PH8.3;10%SDS溶液;10%过硫酸铵溶液;样品处理液;染色液;脱色液;电泳玻璃板,电泳电源架,电泳槽,电泳仪 

检测表达的重组蛋白质的方法

检测表达的重组蛋白质的检测方法有,首先采用DNA分子杂交技术,找到目的基因。其次检测目的基因是否转录出了mRNA,最后检测目的基因是否翻译成蛋白质,进行抗原抗体杂交。

膜蛋白的表达

常用于重组膜蛋白的表达系统有真核表达系统、原核表达系统和近些年来发展的无细胞表达系统。其中以大肠杆菌(E.coli)为代表的原核表达系统因为操作简单、成本相对低廉、遗传背景清楚、方便同位素标记,以及有大量可利用的表达载体和宿主菌株等原因,是当下获取重组膜蛋白的最主要途径。对于一些膜蛋白而言,采用增加

表达蛋白检测实验_点印迹法

实验方法原理本方案用DNA点迹杂交检测噬斑以鉴定重组病毒。像点迹杂交一样,将感染细胞裂解物印迹在硝酸纤维素膜上(可参考「痘苗DNA检测实验」中「斑点杂交法」)。用可以识别外源基因表达蛋白的抗体与膜一起孵育,用125I 标记的蛋白 A 检测结合的抗体,还可应用化学发光检测系统,如 Amersham E

简述抗体的生物学活性

抗体的生物学功能:可以中和毒素和阻止病原体入侵。识别并特异性结合抗原,执行该功能的结构是抗体的V区,其中CDR部位在识别和结合特异性抗原的过程中起决定性作用;激活补体产生攻膜复合物使细胞溶解破坏。人的抗体IgG1~3和IgM与相应抗原结合后,可因构象改变而使其CH2和CH3结构域内的补体结合点暴露,

IL10生物学活性检测

实验材料 小鼠IL-4试剂、试剂盒 FCS-IMDM培养液rh IL-10标准品3H-TdR仪器、耗材 离心机培养箱实验步骤 D36细胞悬液制备①↓接种细胞于96孔培养板②↓加待测样品和标准品③↓加3H-TdR④↓收集细胞,测定3H-TdR掺入量⑤↓绘制标准曲线,计算待测样品的IL-10的活性单位⑥

IL4生物学活性检测

实验材料 IL-4诱生试剂、试剂盒 生理盐水淋巴细胞分层液FCS-IMDM培养液PHA仪器、耗材 细胞培养板培养箱实验步骤 一、IL-4生物学活性测定 CT.4S细胞悬液制备①↓接种细胞于96孔培养板②↓加待测样品和标准品③↓加3H-TdR④↓收集细胞,测定3H-TdR掺入量⑤↓绘制标准曲线,计算待

肿瘤坏死因子α生物学活性检测

实验方法原理TNF-α受体广泛地分布于多种肿瘤细胞和血细胞,根据TNF-α与相应靶细胞结合后引起不同的生物学效应,建立了多种检测TNF-α生物学活性方法。某些肿瘤细胞膜表面的TNF-α受体与TNF-α结合后,可导致这些肿瘤细胞的死亡,可通过检测对肿瘤细胞的杀伤能力,来反映TNF-α的生物学活性。若这

IL8生物学活性检测

(一)原理IL-8对中性粒细胞具有激活和趋化作用,通过检测中性粒细胞的迁移距离可以确定IL-8的生物学活性,即对中性粒细胞的趋化活性。 (二)材料 (1)6%右旋糖酐生理盐水溶液。 (2)淋巴细胞分层液比重为1.077+(-)0.001。 (3)2%琼脂糖:称取2g琼脂糖,加入到10

IL1生物学活性检测

实验方法原理 IL-1与小鼠胸腺细胞共同培养时,IL-1可刺激小鼠胸腺细胞增殖。进一步通过3H-TdR掺入法或染料摄入法判定小鼠胸腺细胞增殖量,推定IL-1的生物学活性。通过检测IL-1的生物学活性,可了解单核-巨噬细胞等的功能。实验材料 小鼠胸腺细胞试剂、试剂盒 FCS-RPMI-1640培养液L

检测细胞生物学活性有哪些方法

根据每细胞定重量设计用于单细胞、细胞及丝状体微物测定定体积品通离或滤菌体离经洗涤再离直接称重求湿重丝状体微物滤用滤纸吸菌丝间自由水再称重求湿重论细菌品丝状菌品放已知重量平皿或烧杯内于一05℃烘干至恒重取放入干燥器内冷却再称量求微物干重 要测定固体培养基放线菌或丝状真菌先加热至50℃使琼脂熔化滤菌丝体